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◦제1세부과제: 식용란중 항생물질 및 합성항균제의 미생물학적 간이검사법 확립
가. 음성대조시료를 이용하여 B. cereus 등 7종의 균주에 대하여 추출완충액에 대한 비특이반응 여부를 조사한 결과 이들 중 B. megaterium 등 두 균주는 추출완충 액으로 추출한 시료용액에 의해 억제반응을 나타내어 비특이반응이 있음을 확인하였음.
나. 추출완충액의 최적량은 10㎖로 추출시 가장 낮은 농도까지 검출하였으며, 시험용기구로서 disc(직경 10mm, 흡수량 평균 75㎕)와 spider(직경 6mm, 분주량 200㎕)간의 검

◦제1세부과제: 식용란중 항생물질 및 합성항균제의 미생물학적 간이검사법 확립
가. 음성대조시료를 이용하여 B. cereus 등 7종의 균주에 대하여 추출완충액에 대한 비특이반응 여부를 조사한 결과 이들 중 B. megaterium 등 두 균주는 추출완충 액으로 추출한 시료용액에 의해 억제반응을 나타내어 비특이반응이 있음을 확인하였음.
나. 추출완충액의 최적량은 10㎖로 추출시 가장 낮은 농도까지 검출하였으며, 시험용기구로서 disc(직경 10mm, 흡수량 평균 75㎕)와 spider(직경 6mm, 분주량 200㎕)간의 검출감도를 비교한 결과 disc에 비해 spider에 의한 방법의 검출능이 다소 우수함을 확인할 수 있었음.
다. 식품공전의 미생물학적 간이검사법에 의해 네오마이신 등 아미노글리코사이드계는 잔류허용기준 수준까지 검출되지 않았으나 베타락탐계, 테트라싸이클린계 및 마크로라이드계 외국의 잔류허용기준 수준까지 검출가능하였으며, 각국에서 산란계에 사용이 금지되고 있는 퀴놀론계 및 니트로푸란계 약물은 Ec/TA 평판 조건에서 가장 낮은 농도 수준까지 검출가능하였음.
라. 실제 HPLC법에 의해 퀴놀론계 약물이 잔류된 것으로 확인된 시료에 대하여 미생물학적 간이검사법과의 상관성을 확인한 결과 3개 시료 모두 미생물학적 간이검사법에 의해 양성으로 검출되어 실제 약물잔류시료에서도 검사가능한 방법임을 입증할 수 있었음.
◦ 제2세부과제: 식용란중 테트라싸이클린계 항생물질 동시다제 잔류분석법 확립
가. 4종의 테트라싸이클린계 항생물질(OTC, TC, CTC, DC)에 대한 HPLC를 이용한 최적분석조건을 조사한 결과 컬럼은 Waters, XTerra C8(4.6x250㎜, 5㎛), 이동상 용매는 0.01M oxalic acid, methanol, acetonitrile의 혼합용액(72:10:18, v/v/v), 검출파장은 자외부 360㎚에서 동시 검출할 때 모두 상관계수 0.999이상의 직선성을 나타내었음.
나. 시료전처리는 bulk C18을 이용한 고체상분산처리(MSPD)법으로 추출하여 분석하였을 때 OTC, TC, CTC, DC 순으로 음성시료와 첨가시료 사이에 어떠한 방해 피크 없이 표준용액과 동일한 분리도를 나타내었음.
다. 계란에 0.1～0.4㎍/g을 첨가한 시료에서의 정확도와 정밀도를 측정한 결과 평균 회수율은 OTC 84%, TC 68%, CTC 74%, DC 69%을 나타내었으며, 변이계수는 4.2～10.5%로서 양호한 수준이었음.
라. 계란에서의 정량한계는 OTC 18.0ppb, TC 13.3ppb, CTC 40.9ppb, DC 46.0ppb로서 ½MRL수준까지 충분히 검출 가능하였음.
마. 실험실간 비교시험 결과 평균 회수율은 54～76%로 나타났고 변이계수는 8.9～10.3%로 비교적 양호한 수준이었음.
◦제3세부과제: 식용란중 플루오로퀴놀론계 약물 동시다제 잔류분석법 확립
가. 7종의 플루오로퀴놀론계 약물(OFX, PFX, NFX, CPFX, EFX, DFX, OBFX)에 대한 HPLC를 이용한 최적분석조건을 조사한 결과 칼럼은 Waters, Symmetry C18(4.6x250㎜, 5㎛), 이동상 용매는 0.4% triethylamine과 0.4% phosphoric acid 첨가 용액, methanol의 혼합용액(82:18, v/v), 검출파장은 형광검출기의 여기파장 278㎚, 측정파장 455㎚에서 동시 검출할 때 모두 상관계수 0.999 이상의 직선성을 나타내었음.
나. 식용란 중 플루오로퀴놀론계 약물에 대한 시료전처리는 bulk C18을 이용한 고체상분산처리(MSPD)법으로 추출하여 분석하였을 때 OFX, PFX, NFX, CPFX, EFX,DFX, OBFX 순으로 양호한 분리도를 나타내었음.
다. 계란에 0.05～0.2 mg/g으로 첨가한 시료에서 정확도와 정밀도를 측정한 결과 평균회수율은 OFX 88%, PFX 64%, NFX 75%, CPFX 76%, EFX 74%, DFX 65%, OBFX 81%로 나타났으며 실험실내 평균 변이계수(CV)는 5.0～10.0%이었음.
라. 계란에서 7종의 정량한계는 OFX 33.6ppb, PFX 2.5ppb, NFX 4.8ppb, CPFX 3.2ppb, EFX 5.2ppb, DFX 0.3ppb, OBFX 2.5ppb 수준으로 매우 낮은 농도까지 정량할 수 있었음
마. 실험실간 비교시험을 실시한 결과 평균 회수율은 68～91%로 나타났고 변이계수는 평균 6.3～7.6%로 매우 양호한 수준이었음
◦ 제4세부과제: 식용란중 벤지미다졸계 구충제 동시다제 잔류분석법 확립
가. 6종의 벤지미다졸계 구충제(TBZ, OFZ, MBZ, FLU, ABZ, FBZ)에 대한 HPLC를 이용한 최적분석조건을 조사하였을 때 칼럼은 Waters, XTerra C18(4.6x250㎜, 5㎛), 이동상 용매는 0.04M (NH4)2HPO4와 acetonitrile의 혼합용액(62:38, v/v), 검출파장은 자외부 295㎚로 동시 검출할 때 표준검량선은 모두 직선성(r> 0.999)을 나타내었음.
나. 식용란 중 벤지미다졸계 구충제에 대한 시료전처리는 ethyl acetate를 이용한 액상추출법으로 추출하여 분석하였을 때 TBZ, OFZ, MBZ, FLU, ABZ, FBZ 순으로 잘 분리되었음.
다. 계란에 0.2～0.8 mg/g으로 첨가한 시료에서의 정확도 및 정밀도를 조사한 결과 평균 회수율은 TBZ 95%, OFZ 98%, MBZ 89%, FLU 94%, ABZ 79%, FBZ 75%을 나타내었으며, 변이계수는 모두 10%이내로서 양호한 수준이었음.
라. 계란에서의 검출한계와 정량한계는 각각 TBZ 2.3ppb와 3.9ppb, OFZ 9.3ppb와 15.6ppb, MBZ 28.5ppb와 45.2ppb, FLU 27.4ppb와 41.0ppb, ABZ 8.6ppb와 14.0ppb, FBZ 12.8ppb와 22.3ppb이었음.
마. 실험실간 비교실험 결과 평균 회수율은 74～96%로 나타났고 변이계수는 3.4～ 4.6%로 매우 양호한 수준이었음.

목차 Contents

• 수의과학기술개발연구사업 연구과제 중간보고서 ... 1
• 제 1 세부과제 ... 4
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 4
• Ⅱ. 재료 및 방법 ... 4
• 1. 공시재료 ... 4
• 2. 시험용 균주 ... 4
• 3. 시험용 배지 ... 5
• 4. 표준품, 시약 및 기구 ... 5
• 5. 첨가시료의 조제 ... 5
• 6. 시료추출 및 시험방법 ... 6
• Ⅲ. 결과 및 고찰 ... 6
• 1. 음성대조시료의 추출용액에 따른 비특이반응 조사 ... 6
• 2. 추출완충액량과 시험용기구에 따른 검출능 조사 ... 7
• 3. 계란내 항생 • 항균제 첨가시료의 검출한계 ... 7
• 4. 퀴놀론계 약물 잔류시료의 미생물학적 간이검사법과 HPLC간 검출능 비교 ... 7
• Ⅳ. 결론 ... 8
• Ⅴ. 참고문헌 ... 9
• Ⅵ. 연구결과 활용 ... 9
• 제 2 세부과제 ... 10
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 10
• Ⅱ. 재료 및 방법 ... 10
• 1. 표준품 및 시약 ... 10
• 2. 기기 ... 10
• 3. 표준용액 및 첨가시료 조제 ... 10
• 4. 이동상 조제 ... 11
• 5. 표준곡선 작성 ... 11
• 6. 시료 전처리 ... 11
• Ⅲ. 결과 및 고찰 ... 12
• 1. 표준곡선 작성 ... 12
• 2. HPLC chromatogram ... 12
• 3. 정확도 및 정밀도 조사 ... 12
• 4. 검출한계 및 정량한계 조사 ... 14
• 5. 실험실간 비교시험 ... 14
• Ⅳ. 결론 ... 15
• Ⅴ. 참고문헌 ... 15
• Ⅵ. 연구결과활용 ... 16
• 제 3 세부과제 ... 17
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 17
• Ⅱ. 재료 및 방법 ... 17
• 1. 표준품 및 시약 ... 17
• 2. 기기 ... 17
• 3. 표준용액 및 첨가시료 조제 ... 18
• 4. 이동상 조제 ... 18
• 5. 표준곡선 작성 ... 18
• 6. 시료 전처리 ... 18
• Ⅲ. 결과 및 고찰 ... 19
• 1. 표준곡선작성 ... 19
• 2. HPLC chromatogram ... 19
• 3. 정확도 및 정밀도 조사 ... 20
• 4. 검출한계 및 정량한계 조사 ... 21
• 5. 실험실간 비교시험 ... 21
• Ⅳ. 결론 ... 22
• Ⅴ. 참고문헌 ... 22
• Ⅵ. 연구결과활용 ... 23
• 제 4 세부과제 ... 24
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 24
• Ⅱ. 재료 및 방법 ... 24
• 1. 표준품 및 시약 ... 24
• 2. 기기 ... 24
• 3. 표준용액 및 첨가시료 제조 ... 25
• 4. 이동상의 제조 ... 25
• 5. 표준곡선 작성 ... 25
• 6. 시료전처리 ... 25
• Ⅲ. 결과 및 고찰 ... 26
• 1. 표준곡선 작성 ... 26
• 2. HPLC chromatogram ... 26
• 3. 정확도 및 정밀도 조사 ... 27
• 4. 검출한계 및 정량한계 조사 ... 28
• 5. 실험실간 비교시험 ... 29
• Ⅳ. 결 론 ... 29
• Ⅴ. 참고문헌 ... 30
• Ⅵ. 연구결과활용 ... 30