초록 ▼

본 연구는 어류의 세균성 질병 예방을 위한 백신 개발을 위하여 전반부에는 연쇄구균과 에드와드균의 혼합백신을 개발하고 후반부에는 비브리오하베이 백신 개발을 위하여 어류 비브리오증의 주요 병원체인 Vibrio harveyi의 병원성 및 항원특성을 조사하고 방어능을 확인하였다.
○연쇄구균과 에드와드균 혼합백신 개발 연쇄+에드와드균 혼합백신은 wild type 균주에 대해 항병력을 나타내었고, 아 쥬반트(FIA)를 혼합투여하였을 때 효능기간이 연장되었음. 현장시험에서도 연쇄 구균 (Streptococcus iniae)과 에드와드균 (

본 연구는 어류의 세균성 질병 예방을 위한 백신 개발을 위하여 전반부에는 연쇄구균과 에드와드균의 혼합백신을 개발하고 후반부에는 비브리오하베이 백신 개발을 위하여 어류 비브리오증의 주요 병원체인 Vibrio harveyi의 병원성 및 항원특성을 조사하고 방어능을 확인하였다.
○연쇄구균과 에드와드균 혼합백신 개발 연쇄+에드와드균 혼합백신은 wild type 균주에 대해 항병력을 나타내었고, 아 쥬반트(FIA)를 혼합투여하였을 때 효능기간이 연장되었음. 현장시험에서도 연쇄 구균 (Streptococcus iniae)과 에드와드균 (Edwardsiella tarda)에 대한 항병력을 확인하였음.
○비브리오균 신속동정
․V. harveyi와 V. ichthyoenteri의 균주특성을 조사하여 생화학적 특성, 항원단백 특성 등을 조사하였고 유전적 분석에 의한 신속동정법을 개발함.
○비브리오하베이 백신 개발
․V. harveyi 항원 단백질 발현의 적정 조건을 확립함. V. harveyi는 외막단백질 유전자 비교에서 여러 genotype으로 구분되었고 유전자가 동일한 ompW의 재조합단백질은 면역원성이 확인되었음. V. harveyi FKC와 S. parauberis FKC를 혼합하여 투여하는 것이 넙치의 항병력을 증가시켰음. V. harveyi의 외막단백질에 다른 비브리오균과 공통적인 항원이 있으며 유전적으로 유사성이 높았음. E. coli에서 발현 후 분리된 ompU 재조합단백질은 면역원성이 확인되었음. V. harveyi 백신을 투여 후 P. damsela에 대한 교차방어능이 있었음

Abstract

An investigation on the antigenicity, immunogenicity, genetic characteristics of V. harveyi and efficacy of a vaccine of olive flounder against vibriosis caused V. harveyi.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 보고서 요약 ... 4
• 요약문 ... 5
• SUMMARY ... 6
• 목차 ... 7
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 22
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 24
• 제3장 연구 개발수행 내용 및 결과 ... 32
• 제 1 절 넙치에 투여된 Edwardsiella tarda와 Streptococcus iniae에대한 혼합백신의 예방효과와 성장에 미치는 영향 ... 32
• 1. 목 적 ... 32
• 2. 재료 및 방법 ... 33
• 가. 실험어 및 사육환경 ... 33
• 나. 백신 제작 ... 33
• 다. 백신 투여 ... 34
• 라. 항체가 측정 ... 34
• 마. 상대생존율 조사 ... 34
• 바. 성장률 및 생존율 조사 ... 34
• 사. 통계 분석 ... 34
• 3. 결과 ... 35
• 가. 혼합백신 투여 후 항체가의 변화 ... 35
• 나. 상대생존율 ... 36
• 다. 체중의 변화 ... 37
• 라. 생존율의 변화 ... 37
• 4. 고찰 ... 38
• 제 2절 Multiplex-PCR에 의한 Vibrio harveyi, Vibrio ichthyoenteri, Photobacterium damselae의 신속동정 ... 40
• 1. 목 적 ... 40
• 2. 재료 및 방법 ... 40
• 가. 특이 primer의 제작 ... 40
• 나. Multiplex-PCR ... 41
• 다. 비브리오균 비율 조사 ... 41
• 3. 결과 및 고찰 ... 41
• 가. 특이 프라이머 제작 ... 41
• 나. 비브리오속 세균의 비율 ... 44
• 제3절 해산어류에서 분리된 Vibrio harveyi의 혈청학적 특성과 항원성 ... 45
• 1. 목 적 ... 45
• 2. 재료 및 방법 ... 46
• 가. Vibrio harveyi의 생화학적 성상 비교 ... 46
• 나. 분리균주의 배양 조건에 따른 발육 시험 ... 46
• 다. FKC (Formalin Killed Cell)과 HKC (Heat Killed Cell) 제작 ... 47
• 라. V. harveyi에 대한 토끼의 polyclonal antibody제작 ... 48
• 마. Slide agglutination ... 48
• 바. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis ... 48
• 사. Immunoblotting analysis ... 48
• 아. 면역 후 방어력 조사 ... 49
• 3. 결과 ... 49
• 가. 분리균주의 생화학적 성장 ... 49
• 나. 분리균주의 배양 조건에 따른 발육시험 ... 49
• 다. Slide agglutination에 의한 V. harveyi의 구분 ... 51
• 라. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis profile ... 52
• 마. Immunoblotting analysis ... 53
• 바. 면역 후 방어력 ... 54
• 4. 고찰 ... 55
• 제 4절 어류의 비브리오 하베이 감염증 예방용 불활성화 백신 및 그 제조방법 ... 59
• 1. 목 적 ... 59
• 2. 재료 및 방법 ... 60
• 가. 백신 균주의 분리 및 동정 ... 60
• 나. 백신 균주의 병원성 ... 60
• 다. 백신 균주의 유전형 분석 ... 60
• 라. 외막단백질의 분리 및 면역원성 분석 ... 61
• 마. 백신 균주의 배양조건 조사 ... 61
• 바. 불활성화 백신의 제조 및 접종 ... 62
• 사. 항체가 측정과 상대생존율 조사 ... 62
• 아. 배양배지별 제작 백신과 백신 첨가물에 의한 백신 효능 변동 ... 63
• 자. 비브리오속 세균과 Vibrio harveyi의 항원 단백질 및 유전자 비교 ... 64
• 차. 비브리오속 세균에 대한 교차면역 조사 ... 64
• 3. 결과 및 고찰 ... 64
• 가. 백신 균주의 분리 및 동정 ... 64
• 나. 백신 균주의 병원성 ... 64
• 다. 백신 균주의 유전형 분석 ... 65
• 라. 백신 균주의 주요 항원 특성 분석 ... 66
• 마. 항원 단백질 분리 및 면역원성 분석 ... 67
• 바. V. harveyi HN 균주의 배양조건 ... 72
• 아. 불활성화 백신의 면역원성 시험 ... 75
• 자. 배양배지별 제작 백신의 효과 ... 76
• 차. 백신 첨가물에 의한 효과 ... 77
• 카. V. harveyi 불활성화 백신 투여에 따른 안전성 조사 ... 77
• 타. 비브리오속 세균과 Vibrio harveyi의 항원 단백질 및 유전자 비교 ... 78
• 파. 비브리오속 세균에 대한 교차면역 조사 ... 80
• 4. 고찰 ... 81
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 어류 양식은 동물성 단백질 공급을 위한 식량산업으로 중요한 위치를 차지하고 ... 83
• 제5장 연구개발 결과의 활용계획 ... 84
• 제6장 참고문헌 ... 85