초록 ▼

저온적응 약독화 생백신 공여균주 X31 ca를 backbone으로 하여 pandemic A (H1N1) 2009 virus (A/Korea/01/2009)의 제조합 생백신 (SI ca)을 제작하였다. 이 생백신 후보주는 모균주의 생화학적 특성인 저온적응, 온도민감성, 그리고 약독화 형질을 그대로 유지하고 있었다. 마우스 모델을 이용하여 고농도로 접종시도 몸무게 감소가 전혀 나타나지 않아 그 안전성이 입증되었을 뿐 아니라, 혈청 내 항체 (serum IgG), HI 항체, 그리고 분비항체 (secretory IgA) 까지 모두 유도할

저온적응 약독화 생백신 공여균주 X31 ca를 backbone으로 하여 pandemic A (H1N1) 2009 virus (A/Korea/01/2009)의 제조합 생백신 (SI ca)을 제작하였다. 이 생백신 후보주는 모균주의 생화학적 특성인 저온적응, 온도민감성, 그리고 약독화 형질을 그대로 유지하고 있었다. 마우스 모델을 이용하여 고농도로 접종시도 몸무게 감소가 전혀 나타나지 않아 그 안전성이 입증되었을 뿐 아니라, 혈청 내 항체 (serum IgG), HI 항체, 그리고 분비항체 (secretory IgA) 까지 모두 유도할 수 있는 점에서, SI ca 생백신 후보주 바이러스가 안전성 (safety)과 효능성 (efficacy)을 모두 지니고 있음을 알 수 있었다.
특히 백신 접종 후 유도된 항체는 자기 바이러스뿐만 아니라 2009년 유행성 독감 바이러스와 판데믹 H5N1형 제조합 바이러스에 대한 우수한 교차면역원성을 지니고 있었다. ELISA assay를 통해 테스트한 결과, 혈청 IgG와 상기도 (nasal wash)와 하기도 (bronchoalveolar fluid)의 분비 항체인 IgA 모두 A형 독감바이러스에 대한 교차면역원성을 나타내었다. 이 결과는 X31 ca 모균주를 이용하여 생백신을 제작하여 사용할 경우 여러 가지 타입의 독감바이러스를 동시에 방어할 수 있다는 점을 시사한다. 페렛을 이용하여 생백신 후보주의 안전성과 면역원성을 테스트한 결과도 마우스와 마찬가지로 독성을 전혀 띄지 않았으며 여러 장기에서 극히 제한된 증식만을 보여줄 뿐, 몸무게 감소나 체온상승 등의 감염에 의한 증상은 관찰할 수 없었다. 백신 접종 후 초기에 페렛의 상기도액에서는 innate immune response에 관여하는 cytokine의 발현이 측정되어 바이러스의 확산 시 항체형성에 의한 방어이외에도 확산초기에 즉각적인 방어능력을 부여할 수 있는 가능성을 보여주었다.
따라서, SIca 생백신 후보주 바이러스는 안전성 (safety)와 면역원성(immunogenicity), 그리고 교차면역원성 (cross-reactivity)등을 충분히 지닌다는 점에서 신종인플루엔자에 대한 효과적 생백신으로 사용이 가능하다고 볼 수 있다.

Abstract ▼

We generated cold-adapted live attenuated vaccine against pandemic A (H1N1) 2009 virus (A/Korea/01/2009) in the background of X-31 ca. This reassortant virus (SIca) found to retain all the biochemical characteristics, such as cold-adaptation, temperature-sensitivity and attenuated phenotype carried

We generated cold-adapted live attenuated vaccine against pandemic A (H1N1) 2009 virus (A/Korea/01/2009) in the background of X-31 ca. This reassortant virus (SIca) found to retain all the biochemical characteristics, such as cold-adaptation, temperature-sensitivity and attenuated phenotype carried by master donor strain. In mice model, immunization with Sica virus did not lead to any clinical symptom but elicited strong systemic and mucosal antibody responses, which made CAsi virus suitable as safe and efficacious live vaccine candidate. Notably, SIca virus induced substantial level of cross reactive antibody responses against seasonal influenza viruses and H5N1 pandemic reassortant viruses, suggesting that SIca virus could also serve as live vaccine against antigenically different influenza A viruses.
In addition, the safety and immunogenicity of SIca virus were also analyzed in ferret model. Sica virus showed highly restrictive replication in several tissues in immunized ferrets without any clinical symptoms, but induced robust serum HI and IgG antibodies responses. Moreover, immunization with SIca virus resulted in genes expression related to innate immune response, such as IFN-r and IL-12, which could be beneficial to immediate protection at early stage of viral spread.
Taken together, these results support that X-31 ca master donor strain can provide a promising platform for developing safe and effective LAIVs against both homologous and heterologous influenza infection.

목차 Contents

• 학술연구용역사업 최종결과보고서 ... 1
• 목차 ... 2
• Ⅰ. 연구개발결과 요약문 ... 3
• (한글)최종결과보고서 요약문 ... 3
• (영문) ... 4
• Ⅱ. 학술연구용역사업 연구결과 ... 5
• 제1장 최종연구개발목표 ... 5
• 1.1 목표 ... 5
• 1.2 목표달성도 ... 7
• 1.3 국내․외 기술개발 현황 ... 7
• 제2장 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 11
• 2.1. 마우스 모델에서의 생백신 후보주의 면역원성 분석 (secretory IgA) ... 11
• 2.2 Protection against lethal challenge ... 11
• 2.3 생백신 후보주의 유전자 및 항원 안정성 분석 ... 11
• 2.4 생백신 후보주의 교차면역원성 분석 ... 12
• 2.5 Ferret model을 이용한생백신 후보주의 저병원성 전환분석 ... 12
• 2.6 Ferret model을 이용한 생백신 후보주의 면역원성 평가 ... 13
• 2.7 생백신 후보주의 속효성 면역기작 분석 ... 13
• 제3장 최종 연구개발 결과 ... 14
• 3.1 생백신 후보주의 유전자 및 항원 안정성 분석 ... 21
• 3.2 생백신 후보주의 교차면역원성 분석 ... 24
• 3.3 Ferret model을 이용한생백신 후보주의 저병원성 전환분석 ... 37
• 3.4 Ferret model을 이용한 생백신 후보주의 면역원성 평가 ... 40
• 3.5 생백신 후보주의 속효성 면역기작 분석 ... 45
• 제4장 연구결과 고찰 및 결론 ... 46
• 제5장 연구성과 ... 48
• 5.1 활용성과 ... 48
• 5.2 활용계획 ... 49
• 제6장 기타 중요 변경사항 ... 50
• 제7장 참고문헌 ... 51
• 제8장 첨부서류 ... 53