보고서 정보
주관연구기관 |
(주)중겸 |
연구책임자 |
임명운
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2009-06 |
주관부처 |
보건복지부 |
과제관리전문기관 |
질병관리본부 Korea Center for Diease Control and Prevention |
등록번호 |
TRKO201300000646 |
DB 구축일자 |
2013-05-20
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키워드 |
항혈청.콜레라균.살모넬라균.세균성 이질균.병원성 대장균.뇌염 바이러스.
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초록
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1, 2차년도 사업에 이어 콜레라 진단제제 4종 (Poly- 994 vials, Ogawa- 911 vials, Inaba- 911 vials, O139- 929 vials), 병원성 대장균 진단제제 8종 (O157- 942 vials, O26- 932 vials, O111- 932 vials, O55- 100 vials, O91- 100 vials, O103- 100 vials, O104- 100 vials, O146- 100 vials), 살모넬라 진단제제 7종 (Poly- 1437 vials, A- 1193 vials, B-
1, 2차년도 사업에 이어 콜레라 진단제제 4종 (Poly- 994 vials, Ogawa- 911 vials, Inaba- 911 vials, O139- 929 vials), 병원성 대장균 진단제제 8종 (O157- 942 vials, O26- 932 vials, O111- 932 vials, O55- 100 vials, O91- 100 vials, O103- 100 vials, O104- 100 vials, O146- 100 vials), 살모넬라 진단제제 7종 (Poly- 1437 vials, A- 1193 vials, B- 1200 vials, C- 1197 vials, D- 1272 vials, E- 1196 vials, Vi- 1279 vials), 그리고 세균성 이질균 진단제제 4종 (A- 1129 vials, B- 1132 vials, C- 1127 vials, D- 1149 vials)의 진단제제를 생산하였으며, 아울러 7종의 살모넬라균 항혈청의 품질 표준화를 실시하였고 콜레라 진단용 신속진단키트를 개발하기 위한 단클론 항체 및 다클론 항체를 정제하여 신속진단키트 제작에 활용하였다. 이러한 과정을 통해 생산된 진단제제는 해당부서의 품질검증을 통과한 후 제출하였다. 당해 연도 사업에서는 1차년도 사업에 이어 기개발된 진단제 용기와 포장 방법을 활용하였으며, 최종 제품의 제출양은 해당부서의 요청에 따라 결정하였다.
법정 2군 전염병인 일본뇌염은 1980년대 중반이후 급격히 감소하여 산발적인 발생양상을 보이고 있으나, 자연계 매개체에서 꾸준히 일본뇌염바이러스가 분리되고 있어 재유행의 가능성을 배재할 수 없다. 이에 따라 질병관리본부에서는 매년 일본뇌염 유행예측사업을 수행하여 질병의 발생시기와 유행추세를 파악하고 효과적인 방역대책을 수립하고 있으며, 일본뇌염유행예측사업 의수행을 위해서 고품질의 진단 표준 시약이 필요하다. 따라서 본 사업에서는 일본뇌염 바이러스주를 마우스 뇌에 투여하여 고역가의 바이러스액을 확보하였고, 이러한 바이러스를 해당 세포주에 감염시켜 IFA 검사용 슬라이드를 제작하여 제출하였다.
이러한 일련의 결과물들은 장내세균 및 일본뇌염 관련 방역사업에 효율적으로 활용될 것으로 판단된다.
Abstract
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Purpose : Legal communicable disease (the 1st and 2nd group) are required to be diagnosed rapidly, for field clinical laboratories can confront the epidemical outbreaks actively. So the production of the 23 kinds of antisera (8 serotypes of E. coli antisera, 7 serogroups of Salmonella antisera, 4 se
Purpose : Legal communicable disease (the 1st and 2nd group) are required to be diagnosed rapidly, for field clinical laboratories can confront the epidemical outbreaks actively. So the production of the 23 kinds of antisera (8 serotypes of E. coli antisera, 7 serogroups of Salmonella antisera, 4 serogroups of Shigella antisera, and 4 serotypes of Cholera antisera) reagents, rapid kits for Cholerae, and the diagnostic reagents for Japanese encephalitis virus was purposed to be used.
Methods : the various kinds of Cholerae, Salmonella, Shigella, and E. coli cells were cultured for antigen preparation, and they were injected to NZW rabbit or Balb/C mouse for the poly- or monoclonal antibody production. For polyclonal antibody prep, rabbit whole serums that have the cross-reactivity with other pathogens were absorbed with them, and were diluted for the adequate working concentration for the final diagnostic reagents. And the antisera standardization method was defined for 7 kinds of Cholerae (serotype Inaba, Ogawa, and O139), 5 kinds of E. coli (serotype O55, O91, O103, O104, and O146), and V. Cholerae Polyvalent O1. The purified mAbs were used for immunochromatographic kit development. and also Japanese encephalitis viruses were purified from ICR mouse brains and used to produce the IFA diagnostic slides for the antibody detection from patients.
Results : The 23 kinds of antisera diagnostic reagents mentioned above that have the specificity for the bacteria intended, Cholerae diagnostic kits, the high titers of JE virus produced by the it's injection to mouse brain in vivo, and IFA slides by cell line infected with JE virus were prepared and reported to Korea center for disease control and prevention sucessfully.
Conclusions : This study provided the various diagnostic reagents for enteric bacteria and encephalitis virus respectively, that can be applied for the epidemic controls of the legal communicable disease (the 1st and 2nd group).
목차 Contents
- 보고서 ... 1
- Ⅰ. 연구개발결과 요약문 ... 5
- Ⅱ. 학술연구용역사업 연구결과 ... 7
- 제1장 최종 연구개발 목표 ... 7
- 1.1 목표 ... 7
- 1.2 목표달성도 ... 13
- 1.3 국내외 기술개발 현황 ... 14
- 제2장 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 16
- 2.1 연구개발 내용 ... 16
- 2.1.1 콜레라균, 세균성 이질균 등 4종류 (23종 진단제)의 병원성 세균 진단제제 생산 ... 16
- 2.1.2 장내세균 표준진단품 개발 ... 17
- 2.1.3 콜레라 신손 진단키트 개발 ... 17
- 2.1.4 일본뇌염 진단 항원액 생산 ... 17
- 2.1.5 일본뇌염 진단용 간접면역형광항체 시험용 항원 슬라이드 생산 ... 17
- 2.2 연구개발 방법 ... 18
- 2.2.1 장내세균 진단제제 연구개발 방법 ... 18
- 2.2.2 콜레라 진단키트 연구개발 방법 ... 31
- 2.2.3 뇌염바이러스 진단제제 연구개발 방법 ... 39
- 제3장 최종 연구개발 결과 ... 45
- 3.1 장내세균 진단제제 각 병원체별 교차반응 검사 균주 항목 ... 45
- 3.2 장내세균 진단제제 각 병원체별 원혈청의 교차반응 및 흡수 ... 45
- 3.3 장내세균 진단제제 각 병원체별 진단제제 자가시험 평가 ... 63
- 3.3.1 콜레라균 진단혈청 자가역가 및 무균시험 성적 ... 63
- 3.3.2 살모넬라균 진단제제 자가역가 및 무균시험 성적 ... 66
- 3.3.3 세균성 이질균 진단제제 자가역가 및 무균시험 성적 ... 71
- 3.3.4 병원성 대장균 진단제제 자가역가 및 무균시험 성적 ... 75
- 3.4 장내세균 진단제제 각 병원체별 진단제제 및 표준품 생산 및 배포 ... 82
- 3.5 장내세균 진단제제 표준품 개발 ... 83
- 3.6 장내세균 진단제제 용기 및 포장방법 ... 110
- 3.7 콜레라균 진단키트 개발 ... 112
- 3.7.1 콜레라 O1 (Inaba, Ogawa) poly- 및 monoclonal antibody 제작 및 정제 ... 112
- 3.7.2 콜레라 O139 poly- 및 monoclonal antibody 제작 및 정제 ... 118
- 3.7.3 콜레라 진단키트 개발 ... 120
- 3.8 일본뇌염 진단제제 개발 ... 122
- 3.8.1 바이러스 항원에 대한 혈구 응집 반응 역가 측정 ... 122
- 3.8.2 IFA (Immunofluoresent Assay) test ... 122
- 제4장 연구결과 고찰 및 결론 ... 123
- 제5장 연구성과 ... 125
- 5.1 활용성과 ... 125
- 5.2 활용계획 ... 126
- 제6장 기타 중요변경사항 ... 127
- 제7장 참고문헌 ... 128
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