초록 ▼

1. 천연물 Library 제작(500종) 및 1,000종 분획제작(2,000종) 및 합성물 Library제조 : 피부 관련 약재로 원료화가 용이한 천연물의 MeOH로 추출하여 500종의 천연물 library를 제작하였고 (주)LG생활건강에서 보유하고 있는 500종과 함께 1,000종의 천연물 library에 대해 chloroform과 BuOH분획으로 총 2,000종 천연물 분획을 제조하고 합성물 4,800종을 HTS에 적합한 96-well plate 형태로 제조함.
2. c-Kit enzyme assay법 확립 및 HTS 실

1. 천연물 Library 제작(500종) 및 1,000종 분획제작(2,000종) 및 합성물 Library제조 : 피부 관련 약재로 원료화가 용이한 천연물의 MeOH로 추출하여 500종의 천연물 library를 제작하였고 (주)LG생활건강에서 보유하고 있는 500종과 함께 1,000종의 천연물 library에 대해 chloroform과 BuOH분획으로 총 2,000종 천연물 분획을 제조하고 합성물 4,800종을 HTS에 적합한 96-well plate 형태로 제조함.
2. c-Kit enzyme assay법 확립 및 HTS 실시 : c-Kit 효소에 대한 저해제 검색법을 384-well plate format으로 확립하였고 HTS를 통해 4,800종 화합물로부터 8종을, 2000종의 천연물 분획으로부터 44종을 선정하였으며 합성물에 대한 RTK에 대한 선택성 및 세포독성을 조사함.
3. 1차 hit의 세포내 신호전달 차단 조사 : 1차 검색에서 유효물질로 판단된 화합물이 실제로 in vitro에서 배양된 세포내의 신호전달을 차단하는 효과가 있는지 조사하고자 c-Kit이 발현되는 M07e를 사용하여 SCF의 인산화 차단 여부를 조사하여 천연물 2종, 화합물 8종을 선정함.
4. 천연물(감국)의 유효성분 연구 : 선정된 천연물중 경쟁력이 우수한 감국 성분연구를 통해 c-kit 활성 저해 유효성분 4종을 구조 분석함.
5. c-kit 활성 저해 유효성분은 주로 flavone 유도체임을 확인하고 다양한 flavone유도체를 대상으로 평가를 추가로 실시하여 세포내(M07e) 신호전달 차단능을 갖는 11종의 flavone유도체 성분을 확보함.
6. 원료화 후보 물질 선정 : 세포내(M07e) 신호전달 차단능을 갖는 화합물에 대한 안전성, 안정성, 제품 적용성, 겸피흡수 등을 통해 Diosmetin과 flavone유도체 2종을 원료화 후보 물질로 선정하고 brown guinea pig에서 미백효과를 검증 중임
7. 원료화 후보 물질의 생산공정 연구 : 천연물 생산업체 조사를 통해 Diosmetin을 대량으로 생산하는 업체를 확보하고 상업적으로 구입가능 함을 확인함. 따라서 별도의 생산연구는 필요치않은 것으로 판단됨

Abstract ▼

I. Aims of development
Definition of cosmetics is "to protect and beautify for human skin, but their effects on skin are minor". But after introduction of cosmeceutical, effects of skin -whitening, wrinkle, sun-protection areas are more important and their market volumes are in the increase.
M

I. Aims of development
Definition of cosmetics is "to protect and beautify for human skin, but their effects on skin are minor". But after introduction of cosmeceutical, effects of skin -whitening, wrinkle, sun-protection areas are more important and their market volumes are in the increase.
Most of the melanin pigmentary disorders or hyperpigmentation are cosmetically important and have a strong impact on the quality of life of affected individuals. But many skin-whitening agents cause some skin irritation and some agents are insufficiently or only partially effective. So development of effective skin -whitening agents is essential to meet consumer demand.
II. Contents and scopes
UVB irradiation is well known as a potent stimulator for epidermal hyperpigmentation. In UVB-exposed human epidermis, expression of SCF were markedly enhanced compared with the non-exposed epidermis. SCF/c-kit signaling is involved in the differentiation of melanoblasts into melanocytes and proliferation of human melanocyte.
So we intend to develope c-kit inhibitor as skin-whitening agent by HTS(High Throughput Screening) of extracted natural/chemical library, test of cellular inhibitory activities of hits on Kit phosphorylation by SCF in c-kit expressing cells, their action mechanisms, safety, stability, and skin delivery test etc.
III. Results
1. Manufacture of extracted natural samples library (500samples), fractionation (2,000 fractions) and chemical substance library (4,800 samples)
2. Set-up of c-Kit inhibitor assay method, HTS(High-throughput screening) with natural/chemical substance library sets and selectivity test of RTK(Receptor Tyrosine Kinase, EGFR, VEGFR2, PDGFR-b and FGFR)
3. Test of cellular inhibitory activities of hits on Kit phosphorylation by SCF in M07e cells (2 extracted natural samples and 8 chemical substances)
4. Diosmetin as c-Kit inhibitor purified from Chrysanthemum morifolium by activity-guided fractionation.
5. Selection of 3-hydroxy-6-methylflavone, 3, 7-dihydroxyflavone from 10 flavone derivatives and diosmetin as raw material candidate of skin -lightening agent by their safety, stability, solubility and skin delivery test etc.
6. Inhibitory effects of proliferation and melanin synthesis on NCCmelan5 and normal human melanocyte of diosmetin.
IV. Plans of application
1. Launching whitening cosmetics containing c-kit inhibitor as skin-lightening agent in 2007.
2. Apply to Mast cell acting areas

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 보고서 요약서 ... 5
• 요약문 ... 6
• SUMMARY ... 7
• 1. 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 8
• 2. 총괄연구결과 세부내용 ... 9
• 3. 향후 성과 추진 계획 ... 18
• Contents ... 23
• 목차 ... 24
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 25
• 1.1 연구 배경 및 연구의 필요성 ... 25
• 1.2 연구목적 및 범위 ... 27
• 1.3 연구과제의 구성 및 추진체계 ... 28
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 29
• 2.1 국내.외 관련분야에 대한 기술개발현황 ... 29
• 2.2 연구결과가 국내.외 기술 개발 현황에서 차지하는 위치 ... 29
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 31
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ... 31
• 2. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 59
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 60
• 1. 총괄연구개발과제의 목표달성도 ... 60
• 2. 연구개발결과의 파급효과 ... 61
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 61
• 1. 연구개발결과의 활용계획 및 추가연구의 필요성 ... 61
• 2. 사업화(기업화) 목표 달성도 및 계획 ... 61
• 제 6 장 참고문헌 ... 64
• 제 7 장 첨부서류 ... 66
• 제1세부연구개발과제 연구결과 ... 79
• 1. 제1세부연구개발과제의 목표 ... 81
• 2. 제1세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 83
• 3. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 83
• 4. 제1세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 93
• 5. 제1세부연구개발과제의 목표달성도 ... 94
• 6. 참고문헌 ... 94
• 제2세부연구개발과제 연구결과 ... 97
• 1. 제2세부연구개발과제의 목표 ... 99
• 2. 제2세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 99
• 3. 제2세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 99
• 4. 제2세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 120
• 5. 제2세부연구개발과제의 목표달성도 ... 121
• 6. 참고문헌 ... 122
• 자체평가의견서 ... 125