초록 ▼

◆ 연구목표
<최종목표>
microRNA (miRNA) 발현 양상 분석을 통한 암의 진단과 치료 예측 및 예후인자의 발견
<당해년도 목표>
유방암과 식도암에서 혈액 또는 조직을 이용한 miRNA array
◆ 연구내용 및 방법
- 최근 miRNA 의 발현이 여러 암에서의 발병과 경과에 미치는 영향에 대한 연구가 활발하게 이루어 지고 있음. miRNA는 18-24개의 뉴클레오타이드로 구성된 작은 단일가닥 RNA로서, 직접 단백질을 coding 하지는 않지만, 상보적인 mRNA의 translation을

◆ 연구목표
<최종목표>
microRNA (miRNA) 발현 양상 분석을 통한 암의 진단과 치료 예측 및 예후인자의 발견
<당해년도 목표>
유방암과 식도암에서 혈액 또는 조직을 이용한 miRNA array
◆ 연구내용 및 방법
- 최근 miRNA 의 발현이 여러 암에서의 발병과 경과에 미치는 영향에 대한 연구가 활발하게 이루어 지고 있음. miRNA는 18-24개의 뉴클레오타이드로 구성된 작은 단일가닥 RNA로서, 직접 단백질을 coding 하지는 않지만, 상보적인 mRNA의 translation을 억제하고 degradation 을 유도함으로써 해당 유전자의 발현을 조절하는 기능을 담당함.
- 종양에서 miRNA는 종양억제 유전자의 기능 저해, oncogene의 발현 증가, 세포 주기 및 사멸 조절 등 다양한 기전을 통하여 종양을 발생하는 쪽으로 작용할 수 있고(예: miR-17-92) 반대로 oncogene을 억제하는 종양억제 효과를 나타내기도 함(예: let-7).
- 국립암센터에서 2001년부터 2009년까지 식도 편평상피 세포암으로 수술을 시행 받은 환자의 수술검체에서 종양은행에 보관중인 cancerous 및 adjacent noncancerous tissue 108례 중 training 및 validation set으로 분류하여 분석하고자 함. 단, 이 환자들은 수술 외의 다른 치료는 시행 받지 않은 편평상피 세포암으로 국한함.
- 무작위로 54명을 Training cohort 로, 나머지 54명을 test cohort 로 분류
- Training cohort에서 recurrence를 end-point 로 하여 예후에 영향을 주는 miRNA signature 발굴
- 찾아진 recurrence 관련 miRNA signature를 test cohort에서 검증.
- 또한, Pilot study 로 본원의 건강검진 센터를 내원한 건강인 5명과 유방암환자 (호르몬 수용체 양성, HER2 수용체 음성) 11명을 대상으로 혈액을 채취하여 시행한 miRNA microarray 를 분석해 보았을 때 정상과 대별되는 miRNA expression pattern 을 볼 수 있었으며 대상군의 blood에서 qRT-PCR 로 candidated miRNA (mir 1280, mir 720) 를 정량적으로 측정해 보았을 때도 정상인과 유방암 환자에서 의미있는 차이를 볼 수 있었음
- 두 miRNA 의 발현을 여러 종류의 cell lines 과 정상유방조직 및 유방암 조직에서 확인.
- 유방암이 없는 건강인과 조기 유방암 환자, 전이성 유방암 환자의 혈액에서 miRNA 의 level을 확인
- 조기 유방암 환자와 전이성 유방암 환자에서 일차 치료 후의 임상적인 반응과 혈액 내에서의 miRNA level 의 변화를 연관하여 분석.
- 해당 miRNA 의 세포 내 역할을 anti-Mir 를 이용해 형태적 변화 및 연관된 gene expression의 변화를 확인함.
◆ 연구성과
- 정량적 성과
1) 총연구기간내 목표 연구성과로 기 제출한 값
- 정성적 성과
․ 식도편평세포암에서 수술 후 재발을 예측하는 miRNA signauture를 찾음.
․ 이 signature 중 가장 영향력 있는 miRNA는 miR-886 및 mir-1269 2개의 miRNA 들의 조합으로도 재발을 충분히 예측.
․ mir-886은 miRNA가 아닌 100 base pair의 vault RNA 로 분류되어 있어, small non-coding RNA의 예후인자로의 재발견
․ 혈액 내에서 정상인과 구별되는 유방암 환자에서 특이적인 miRNA 의 패턴을 확인함.
․ 특정 miRNA 가 종양의 양적인 증가와 같이 혈액 내에서의 level 도 증가되는 것을 확인함.

Abstract ▼

Objectives
- MicroRNAs (MiRNA) are non-coding RNA species that have a crucial role in growth, development, and cell death and differenctiation.
- To evaluate the correlation between miRNA microarrays from tissues or blood and clinical results or cancer recurrence in esophageal squamous cell ca

Objectives
- MicroRNAs (MiRNA) are non-coding RNA species that have a crucial role in growth, development, and cell death and differenctiation.
- To evaluate the correlation between miRNA microarrays from tissues or blood and clinical results or cancer recurrence in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and breast cancer
Methods
- Microarray-based miRNA expression data from cancerous and adjacent noncancerous tissue pairs from 108 ESCC patients who underwent curative esophageal surgery without peri-operative chemo- or radio-therapy.
- This cohort was randomly divided into discovery set and test set.
- From the discovery set, miRNA signature to predict the tumor recurrence was found.
- MiRNA signature was internally validated in test set.
- miRNA expression array using blood samples of patients with breast cancer and those of healthy controls
- check the blood levels of candidate miRNA using quantitative RT-PCR methods in large patient cohort.
- mir-1280 gene cloning and transfection to MCF-7 cell line
- MTT assay
Results
- In ESCC, 30 miRNA signature was found to predict the recurrence.
- Among them, most potent miRNAs were mir-886 and mir-1269 to predict the recurrence.
- These two miRNA signature predicted the recurrence in the discovery cohort (p=0.006).
- Also, two miRNA signature was validated in the test cohort (p=0.03).
- Mir-886 is not miRNA. Currently, the nomenclature of this RNA is vault RNA 2-1 (VTRNA2-1).
- In breast cancer patients, profiles of circulating miRNAs were significantly different compared with those of controls
- Of those, the levels of circulating mir-1280 and mir-720 were significantly elevated in blood of breast cancer patients. In addition, those levels showed a positive correlation with overall tumor burdens in each patients.
- The mir-1280 and mir-720 were detected in breast cancer tissue, however they were not found in normal mammary tissue.
Conclusion
- VTRNA2-1 and miR-1269 signature predicts the recurrence in completely resected esophageal squamous cell carcinoma.
- This signature should be externally validated.
- In breast cancer, circulating microNAs, mir-1280 and mir-720, could be used as a potential biomarker of breast cancer.
- Their functions should be addressed in a further study.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• 요약문 ... 5
• Project Summary ... 7
• 1. 연구의 최종목표 ... 9
• (1) 최종목표 ... 9
• (2) 목표 ... 9
• 2. 연구의 내용 및 결과 ... 9
• (1) 식도암 ... 9
• (2) 유방암 ... 10
• 3. 연구결과 고찰 및 결론 ... 10
• (1) 식도암 ... 10
• (2) 유방암 ... 11
• 4. 연구성과 및 목표달성도 ... 11
• (1) 연구성과 ... 11
• (2) 목표달성도 ... 13
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 14
• (1) 연구종료 2년후 예상 연구성과 ... 14
• (2) 연구성과의 활용계획 ... 14
• I. 제1세부과제 ... 15
• 목차 ... 16
• 요약문 ... 17
• Project Summary ... 19
• 1. 연구의 최종목표 ... 21
• 2. 연구의 내용 및 결과 ... 21
• 3. 연구결과 고찰 및 결론 ... 27
• 4. 연구성과 및 목표달성도 ... 32
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 34
• 6. 참고문헌 ... 35
• 7. 첨부서류 ... 37
• II. 제2세부과제 ... 38
• 목차 ... 39
• 요약문 ... 40
• Project Summary ... 42
• 1. 연구의 최종목표 ... 43
• 2. 연구의 내용 및 결과 ... 43
• 3. 연구결과 고찰 및 결론 ... 50
• 4. 연구성과 및 목표달성도 ... 51
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 52
• 6. 참고문헌 ... 53
• 7. 첨부서류 ... 53