초록 ▼

1. 만성 간질환 환자에서 혈청 exosome 순수 분리 후 exosomal RNA 분리법 확립
- 본 연구진은 만성 간질환 환자의 혈청에서 exosome을 순수 분리한 뒤 분리한 exosome에서 microRNA를 추출하는 방법을 확립하여 exosomal microRNA 발현 양상을 조사할 수 있는 기본 기술을 확보하였음. 기존에 사용되던 방법은 differential ultracentrifugation을 이용한 분리법을 주로 사용하나 많은 혈청양과 ultracentrifuge가 필요하다는 문제점이 있어서, 본 연구팀은 적

1. 만성 간질환 환자에서 혈청 exosome 순수 분리 후 exosomal RNA 분리법 확립
- 본 연구진은 만성 간질환 환자의 혈청에서 exosome을 순수 분리한 뒤 분리한 exosome에서 microRNA를 추출하는 방법을 확립하여 exosomal microRNA 발현 양상을 조사할 수 있는 기본 기술을 확보하였음. 기존에 사용되던 방법은 differential ultracentrifugation을 이용한 분리법을 주로 사용하나 많은 혈청양과 ultracentrifuge가 필요하다는 문제점이 있어서, 본 연구팀은 적은 혈청양으로 exosome을 분리할 수 있는 SBI사의 kit를 사용하였으며 여러차례 실험을 통하여 적은 혈청양에서 양질의 혈청 exosomal microRNA를 얻을 수 있는 방법을 최적화하였음.

2. 만성 간질환 환자 및 간암 환자에서 exosomal microRNA 발현을 quantitative PCR 방법으로 분석하여 간암 특이적인 exosomal microRNA 바이오마커를 최초로 학술지에 보고함.
- 본 연구진은 각각 20명의 만성 B형 간염 환자, 간경변 환자, 간암 환자의 혈청에서 exosomal microRNA를 순수 분리하고 광범위한 문헌 조사를 통하여 지금까지 간암 발생과 관련된 microRNA들을 조사하였음.
- 이들 중 임상적 의의가 크고 기전이 밝혀진 총 10개의 microRNA(Mir-18a, Mir-21, Mir-93,Mir-101, Mir-106b, Mir-122, Mir-195, Mir-221, Mir-222, Mir-224)를 선정하여 이들 exosomal microRNA의 발현양을 qPCR을 이용하여 정량한 후, 만성간염 환자군, 간경변 환자군, 간암환자군에서 비교하였음.
- 혈청 exosomal microRNA 중 Mir-18a, Mir-221, Mir-222과 Mir-224발현이 만성 간염 또는 간경변 환자군에 비해 간암 환자군에서 유의하게 증가되는 것(P<0.05)을 확인하였으며, Mir-101,Mir-106b, Mir-122, Mir-195의 발현은 만성 간염 환자군에 비하여 간암 환자군에서 유의하게 감소된 결과(P<0.05)를 얻었음. 혈청내 mir-21, mir-93발현양은 간암 환자군과 만성 간염 환자군 사이에는 유의한 차이가 없었음(P=0.925, P=0.355).
- 본 연구진은 혈청 exosomal microRNA와 혈청내 free microRNA 발현 정도를 비교분석하였고 그 결과 혈청내 free microRNA보다 exosomal microRNA가 간염/간경변 과 간암 환자 간에 더 큰 차이를 보여주는 사실을 알아냈으며 따라서 이러한 결과를 통하여 간암의 새로운 바이오마커로서 혈청 exosomal microRNA의 유용성과 임상적 활용가능성을 제시하였음.

3. Nanostring microRNA 어레이를 이용한 간암 exosomal microRNA 발현 분석방법의 확립
- 본 연구진이 확보하고 있는 Nanostring사의 nCounter miRNA expression assay 기기는 현재까지 알려진 700여 종류의 microRNA 유전자들의 발현 양을 한번의 실험으로 확인가능한 장점을 갖고 있으며 특히 RNA 증폭과정이 없어 불필요한 유전자들의 증폭으로 인한 masking 효과를 줄여 더 정밀한 결과를 얻을 수 있음. 본 연구진은 여러차례의 실험과 Nanostring 본사 연구팀의 자문 끝에 Nanostring을 이용한 만성간질환 환자 혈청 exosomal microRNA 발현 프로파일 분석방법을 최초로 확립하였음.
- Nanostring array를 이용하여 만성 간염 및 간암 환자에서 혈청 exosomal microRNA 발현 프로파일을 비교 분석하여 miR-126-3p, 142-3p, 144-3p, 150-5p, 223-3p, 451a, 513b-5p, 93-5p가 만성간염 환자군보다 간암 환자군에서 의미있게 발현이 증가됨을 발견함. 반면, miR-296-3p, 371a-5p,424-5p, 449c-5p, 675-5p, 802, 877-5p는 만성간염 환자군보다 간암 환자군에서 의미있게 발현이 감소됨을 확인하였으며 특허 출원 계획임.