초록 ▼

○ 조합법을 이용한 staphyloxanthin대사회로 완성 및 대장균 내에서의 발현
* Staphylococcus aureus로부터 C30 카로틴노이드 생합성 관련 유전자들을 cloning하여 확보한 후, 이들을 모듈화 하여 대장균내에서 다양한 C30 카로틴노이드를 생합성하였음.
* 이 과정에서 기존에 밝혀지지 않았던 4,4'-diaponeurosporen-aldehyde dehydrogenase유전자(aldH)를 확보하여 대장균 내에서 발현시킴으로써 완전한 staphyloxanthin생합성 대사회로를 구축할수 있었으며

○ 조합법을 이용한 staphyloxanthin대사회로 완성 및 대장균 내에서의 발현
* Staphylococcus aureus로부터 C30 카로틴노이드 생합성 관련 유전자들을 cloning하여 확보한 후, 이들을 모듈화 하여 대장균내에서 다양한 C30 카로틴노이드를 생합성하였음.
* 이 과정에서 기존에 밝혀지지 않았던 4,4'-diaponeurosporen-aldehyde dehydrogenase유전자(aldH)를 확보하여 대장균 내에서 발현시킴으로써 완전한 staphyloxanthin생합성 대사회로를 구축할수 있었으며, 이를 이용하여 다양한 종류 신규의 C30 카로틴노이드를 대장균 내에서 생합성 하였음.
* 새로운 대사회로 aldH 유전자는 S. aureus ΔaldH strain을 제작함으로써 그 기능을 완전히 규명하였으며, S. carnosus의 aldH 유전자를 조합법을 통해 대장균 내에서 S. aureus의 유전자 모듈과 함께 발현함으로써 기존에 밝혀진 문헌의 오류를 찾을 수 있었음.
○ Diapophytoene desaturase (CrtN) 인위적 분자진화를 통한 활성 변화
* Error-prone PCR기법을 이용, CrtN에 인위적인 mutation을 주어 변화된 활성을 diapophytoene을 발현하는 재조합 대장균을 이용하여 screen하여 붉게 변하거나 노랗게 변한 clone들을 스크린하여 profile을 확인하였음
* 각 돌연변이의 염기서열의 변화를 확인하고 각각 site의 효과를 site-directed mutagenesis를 통해 확인하여 구조와 활성의 관계를 규명하였음.
○ 카로틴노이드 구조별 수용성 변화 확인
* S. aureus의 생합성 효소들을 이용, 다양한 구조의 기능기를 가지는 C30 카로틴노이드를 발현하여 이들의 수용성을 확인하였음.

목차 Contents

• 일반연구자지원사업 최종(결과)보고서 ... 1
• 목차 ... 3
• Ⅰ. 연구결과 요약문 ... 4
• Ⅱ. 연구내용 및 결과 ... 5
• 1. 연구과제의 개요 ... 5
• 2. 국내·외 기술개발 현황 ... 5
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 6
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 8
• 5. 연구결과의 활용 계획 ... 8
• 6. 연구과정에서 수집한 해외 과학기술 정보 ... 8
• Ⅲ. 연구성과 ... 9