초록 ▼

연구의 목적 및 내용
퇴행성 뇌질환 중에 대표적인 알츠하이머병 모델 개 구축을 위한 기초연구로서 병리학적 특징인 베타-아밀로이드 축적 관련된 유전자들을 개 fibroblast에 렌티바이러스 벡터를 이용하여 발현 후 핵치환을 통한 형질전환 개 생산 및 알츠하이머병 발병 모델 개발을 본 과제의 최종 목표로 한다.

연구결과
1차년도에는 현재 실험동물 개로 가장 많이 이용되는 비글견의 fibroblast를 생산하여, 복제가능세포주를 확립하고, 인간의 퇴행성 뇌질환의 대표적인 질병인 알츠하이머병과 관련된 유전자인 베타

연구의 목적 및 내용
퇴행성 뇌질환 중에 대표적인 알츠하이머병 모델 개 구축을 위한 기초연구로서 병리학적 특징인 베타-아밀로이드 축적 관련된 유전자들을 개 fibroblast에 렌티바이러스 벡터를 이용하여 발현 후 핵치환을 통한 형질전환 개 생산 및 알츠하이머병 발병 모델 개발을 본 과제의 최종 목표로 한다.

연구결과
1차년도에는 현재 실험동물 개로 가장 많이 이용되는 비글견의 fibroblast를 생산하여, 복제가능세포주를 확립하고, 인간의 퇴행성 뇌질환의 대표적인 질병인 알츠하이머병과 관련된 유전자인 베타-아밀로이드 전구체 (APPsw), beta-secretase를 안정적으로 발현을 위하여, EF1a 와 CMV promoter가 있는 GFP발현 렌티 바이러스 벡터을 제작하였다. 이렌티 바이러스를 비글견의 fibroblast에 감염시켜, 알쯔하이머 관련 유전자 및 report 유전자를 함유한 세포주를 수립하였다. 그후, SCNT기술을 이용하여, 핵을 제거한 난자에 이세포를 삽입하여, 대리모에 이식 함으로서, 복제견을 탄생시켰다. 이 개는 microsatellite와 mitochondria gene analysis 를 통해 클론임이 확인되었다.

연구결과의 활용계획
더 나아 복제 기술을 개발하고, 알츠하이머병 질환 모델 개의 대량 생산으로 인류의 신약 개발과 질병 연구에 도움이 될 것이라 기대한다.

Abstract ▼

Purpose&contents
Our ultimate objective is to produce a transgenic cloned dog models especially for the Alzheimer's Disease research as preliminary studies for making a degenerative brain disease animal by SCNT.

Result
In the first step of the this study, we established a normal beagle

Purpose&contents
Our ultimate objective is to produce a transgenic cloned dog models especially for the Alzheimer's Disease research as preliminary studies for making a degenerative brain disease animal by SCNT.

Result
In the first step of the this study, we established a normal beagle cell line for producing transgenic cloned dog using in vitro culture system. And then a lentivirus vector was constructed with stable expression of APPsw, β-secretase, a gene related to Alzheimer' s disease, EF1a and CMV promoter, and GFP marker. Thus, we established the cell line for SCNT.
In the second step, after transfection of the lentiviral vector into beagle’s cell line, the GFP expressed cells was injected into enucleated dog oocyte. Then producing cloned embryos were transferred into recipient mother. Finally one fetus was produced.
For the parentage and maternal analysis, we performed microsatellite and mitochondria gene analysis. The results showed that the fetus is cloned. We have to investigate the transfection possibility of disease gene into cloned dogs and find the potential application and industrialization of established transgenic cloned dog.

Expected Contribution
We will make further progress in cloning technique and attempt to make a cloned small-breed dog at the third year of study. Our ultimate objective is to produce a human disease model dog based on our achievement.

목차 Contents

• 중견연구자지원사업(핵심연구) 최종보고서 ... 1
• 목차 ... 3
• 연구계획 요약문 ... 4
• 연구결과 요약문 ... 5
• 한글요약문 ... 5
• SUMMARY ... 6
• 연구내용 및 결과 ... 7
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 7
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 10
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 14
• 4. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 41
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 43
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 44
• 7. 주관연구책임자(공동연구원) 대표적 연구실적 ... 44
• 8. 참고문헌 ... 45
• 9. 연구성과 ... 46
• 10. 기타사항 ... 53
• [별첨1] ... 54