보고서 정보
주관연구기관 |
경희대학교 Kyung Hee University |
연구책임자 |
김해영
|
참여연구자 |
김재환
,
홍연
,
유명렬
,
양희석
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보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2012-11 |
과제시작연도 |
2012 |
주관부처 |
식품의약품안전청 |
사업 관리 기관 |
식품의약품안전청 Korea Food & Drug Administration |
등록번호 |
TRKO201300028861 |
과제고유번호 |
1475006895 |
사업명 |
식품 등 안전관리 |
DB 구축일자 |
2013-09-28
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키워드 |
미승인 유전자재조합 식품.광역 프라이머.스크리닝.unapproved genetically modified food.universal primer.screening.
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초록
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본 연구에서는 승인 및 미승인 유전자재조합식품의 모니터링을 위해 universal primer sets를 이용하여 multiplex PCR 분석법을 개발하였다. 이를 위하여 전 세계적으로 개발된 유전자재조합 농산물 24종으로부터 137개의 단일이벤트에 대한 screening elements를 조사하여 각각의 사용빈도수를 파악하였고, 35S promoter, nos terminator를 제외한 12개의 universal primer sets를 선별하였다. 이러한 각각의 primer sets는 다양한 GM events에 대해 특이성을
본 연구에서는 승인 및 미승인 유전자재조합식품의 모니터링을 위해 universal primer sets를 이용하여 multiplex PCR 분석법을 개발하였다. 이를 위하여 전 세계적으로 개발된 유전자재조합 농산물 24종으로부터 137개의 단일이벤트에 대한 screening elements를 조사하여 각각의 사용빈도수를 파악하였고, 35S promoter, nos terminator를 제외한 12개의 universal primer sets를 선별하였다. 이러한 각각의 primer sets는 다양한 GM events에 대해 특이성을 확인하였고 서로 다른 4개의 targets을 동시에 확인 할 수 있는 3 sets의 multiplex PCR 분석법이 개발되었다. Set 1은 ocs, hsp17 terminators, Ta29, FMV promoters를 target으로 하였고, Set 2는 E9, PinII terminators, nos, SsuAra promoters를 target으로 하였고, Set 3는 35S terminator, maize ubiquitin, mas, rice actin1 promoters를 target으로 하였다. 각각의 multiplex PCR 분석의 검정한계치는 모두 100 copies로 확인되었다. 이와 같이 개발된 multiplex PCR 분석법은 콩, 옥수수, 면화, 카놀라로부터 전체 25종의 GM events를 대상으로 validation을 실시하였고, 각각의 GM event에 삽입된 promoter와 terminator가 모두 특이적으로 확인되었다. 추가적으로 기 개발된 35S promoter, nos terminator와 internal control로써 18S rRNA gene에 특이적인 primer sets을 이용한 multiplex PCR분석법을 개발하였다. 특히, 본 연구에서 개발한 12개의 universal primer sets를 이용한 multiplex PCR systems은 플루토스사와 협조하여 모두 kit화함으로써 실험자간의 오차를 최대한 줄일 수 있도록 하였으며 현장에서 신속하고 정확하게 적용이 가능하도록 하였다.
Abstract
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Multiplex PCR detection methods were established to monitor both approved and unapproved genetically modified (GM) crops using universal primer sets. Screening elements of 137 single events for 24 GM crops that have been developed in all over the world were investigated by comparing their frequencie
Multiplex PCR detection methods were established to monitor both approved and unapproved genetically modified (GM) crops using universal primer sets. Screening elements of 137 single events for 24 GM crops that have been developed in all over the world were investigated by comparing their frequencies of usage in development of genetically modified organism (GMO). Twelve universal primer sets targeting screening elements except for 35S promoter and nos terminator were selected. The specificity for individual primer set was evaluated by using various GM events. Three sets of multiplex PCR detection methods were established and each method was able to detect 4 different target sequences simultaneously. Target sequences for set 1 were ocs, hsp17 terminators, Ta29, and FMV promoters, for set 2 were E9, PinII terminators, nos, and SsuAra promoters, and for set 3 were 35S terminator, maize ubiquitin, mas, and rice actin1 promoters. The values for limit of detection (LOD) for all multiplex PCR systems were approximately 100 copies. The three multiplex PCR detection methods were validated by using total of 25 GM events for soybean, maize, cotton, and canola. All promoters and terminators inserted into GM events were specifically confirmed. Also, a multiplex PCR detection method was additionally established to detect 35S promoter, nos terminator, and 18S rRNA gene as an internal control with previously known primer sets. Especially, the three multiplex PCR detection methods using 12 universal primer sets were developed as screening kits for GMO together with PLUTOS Inc. The multiplex PCR screening kits can be used as fast and accurate detection methods for GMO in actual fields with minimum cross-laboratory errors.
목차 Contents
- 용역연구개발과제 최종보고서 ... 1
- 제 출 문 ... 2
- 목 차 ... 3
- Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 5
- 국문 요약문 ... 5
- Summary ... 7
- Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 9
- 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 9
- 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 13
- 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 23
- 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 54
- 제5장 총괄주요연구 변경사항 ... 56
- 제6장 총괄참고문헌 ... 57
- 제7장 총괄첨부서류 ... 58
- Ⅲ. 제(1)세부연구개발과제 연구결과 ... 59
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