중간엽줄기세포가 종양세포의 증식에 영향을 미친다는 최근의 보고에 따라, 세포치료제의 특성 평가 시 암세포와의 상호 작용에 관한 평가법 마련이 절실하다. 이에 따라 본 과제는 MSC와 암세포 상호작용을 확인하기 위하여 공배양법 확립 및 세포 특성변화를 확인하기 위한 다양한 시험법을 이용하여 종양유발성 평가 시 타당한 방법인지 확인하고자 하였다. 실험에 사용한 중간엽줄기세포와 암세포는 가장 많이 연구되고 있는 복부유래 중간엽줄기세포(A cell) 및 M CF-7 암세포주를 선정하였다. 상호 작용을 평가하기 위한 방법으로는 증식, 세포자
중간엽줄기세포가 종양세포의 증식에 영향을 미친다는 최근의 보고에 따라, 세포치료제의 특성 평가 시 암세포와의 상호 작용에 관한 평가법 마련이 절실하다. 이에 따라 본 과제는 MSC와 암세포 상호작용을 확인하기 위하여 공배양법 확립 및 세포 특성변화를 확인하기 위한 다양한 시험법을 이용하여 종양유발성 평가 시 타당한 방법인지 확인하고자 하였다. 실험에 사용한 중간엽줄기세포와 암세포는 가장 많이 연구되고 있는 복부유래 중간엽줄기세포(A cell) 및 M CF-7 암세포주를 선정하였다. 상호 작용을 평가하기 위한 방법으로는 증식, 세포자연사, 이동성, 액틴 변화, 세포 분비물질 분석을 선택하였다. A cell의 특성을 분석한 결과, 부착성, 표면항원, 분화능에서 전형적인 중간엽줄기세포의 특성을 나타내었고, GRO, IL-6, IL-8, IP-10, MCP-1, VEGF를 분비하였다. M CF-7은 바닥에 붙어 자라는 adenocarcinoma로서 VEGF를 많이 분비하였다. 두 세포 간 상호작용을 평가하기 위하여 공배양법(Conditioned Media(CM )를 이용한 indirect co-culture)을 확립하였다. 공배양에 의한 세포의 특성 변화 결과는 다음과 같다. 1) 증식: A cell은 CCM에 의해 증식이 일어나지 않으나, MCF-7은 ACM에 의해 증식함 2) 이동성: A cell은 CCM에 의해 이동성이 변화가 거의 없으나, MCF-7은 ACM에 의해 이동성이 크게 나타남 3) 세포 내 액틴 변화: A cell은 액틴의 차이가 없음 ※ CCM : MCF-7을 배양하여 얻은 conditioned medium ACM : A cell을 배양하여 얻은 conditioned medium 두 가지 방법을 적용한 세포 분비물질 분석 결과는 다음과 같다. 1) Bead array 방법: A cell을 CCM에 배양하면 GRO, VEGF의 양이 줄어들고, MCF-7을 ACM에 배양하면 GRO, IP-10은 늘어나고 VEGF는 줄어듦 2) LC-MS/MS 방법: A cell을 CCM에 배양하면 POTE-2 등 14개의 단백질이 새로 검출되었고, MCF-7을 ACM에 배양하면 alpha-fetoprotein precursor 등 8개의 단백질이 새로 검출됨 CM을 이용하여 중간엽줄기세포와 암세포의 상호작용 평가 시 증식, 이동성, cytokine 등 분비물질 분석은 유용한 평가 지표가 될 수 있을 것으로 예상되나, 액틴의 변화는 추가 실험이 필요한 것으로 사료된다. 또한 분비물질을 분석한 bead array와 LC-MS/M S 시스템은 그 원리와 목적이 다르기 때문에 결과의 직접 비교는 불가능하나 두 방법 모두 세포의 상호작용을 알아보는 데 적용할수 있는 방법으로 사료된다. 2차연도에는 세포 종류 및 시험항목을 추가하여 다양한 지표 가능성을 타진할 계획이다.
Abstract▼
Many evidences are elucidating that specific paracrine factors secreted by MSCs affect the characteristics of the cancer cells. So It is necessary to prepare the accessing strategy of the safety issues induced by MSCs and cancer cell interactions. In this study, we choose the abdomen-derived MSCs(A
Many evidences are elucidating that specific paracrine factors secreted by MSCs affect the characteristics of the cancer cells. So It is necessary to prepare the accessing strategy of the safety issues induced by MSCs and cancer cell interactions. In this study, we choose the abdomen-derived MSCs(A cell) and MCF-7 cells as a model cell lines. Cells grown within the conditioned media were analyzed in aspects of proliferation, apoptosis, motility, cytoskeleton and secretomes. An A cells showed typical MSC characteristics; adherence, surface marker expression pattern and differentiation potential and secreted GRO, IL-6, IL-8, IP-10, MCP-1 and VEGF. A MCF-7 cells secreted the VEGF highly. The A cells showed no difference in proliferation, migration and actin staining when the cells were grown within MCF-conditioned medium(CCM). But the MCF-7 cells showed the increased proliferation and migration in A cell-conditioned medium(ACM). There were some differences in secretome between A cells and MCF-7 grown in conditioned medium by bead array. The level of GRO and VEGF were decreased in A cells grown in CCM. The level of GRO and IP-10 were increased in MCF-7 cells grown in ACM, but the VEGF was decreased. We applied another method, LC-MS/MS, to analyze the secretome. There were many new proteins and their function should be deeply investigated.
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