초록 ▼

알레르기접촉피부염 유발 물질을 검색하기 위하여 수행되는 감작성 시험은 기니픽을 이용한 시험과 마우스를 이용한 국소림프절시험법(LLNA)이 있다. 기니픽을 이용한 시험은 육안으로 결과를 판정하므로 시험결과가 객관적이지 못하다는 단점이 있고 LLNA시험은 금속과 계면활성제와 같은 일부 자극물질에 대하여 판정하지 못하는 단점이 있다. 따라서 이들 시험법의 단점을 보완할 수 있는 새로운 감작성 시험법 개발이 필요하다. 피부각질세포는 감작성 물질과 가장 먼저 접촉하는 세포로 염증관련 인자들을 분비하며 감작성 유발에 주요한 역할을 하는 것으로

알레르기접촉피부염 유발 물질을 검색하기 위하여 수행되는 감작성 시험은 기니픽을 이용한 시험과 마우스를 이용한 국소림프절시험법(LLNA)이 있다. 기니픽을 이용한 시험은 육안으로 결과를 판정하므로 시험결과가 객관적이지 못하다는 단점이 있고 LLNA시험은 금속과 계면활성제와 같은 일부 자극물질에 대하여 판정하지 못하는 단점이 있다. 따라서 이들 시험법의 단점을 보완할 수 있는 새로운 감작성 시험법 개발이 필요하다. 피부각질세포는 감작성 물질과 가장 먼저 접촉하는 세포로 염증관련 인자들을 분비하며 감작성 유발에 주요한 역할을 하는 것으로 알려져 있어 피부각질세포주인 HaCaT을 이용하여 감작성 시험법 개발 연구를 수행하였다. HaCaT에 ARE-luciferase expression vector를 삽입한 세포주를 구축하여 시험법 개발에 이용하였다. Hexyl cinnamic aldehyde, 2,4-dinitrochlorobenzene, salicylic acid, sodium lauryl sulfate, nickel chloride 처리 후 luciferase activity 증가 정도로 감작성 물질을 판정한 결과 모두 인체 결과와 일치하여 피부감작성 물질 검색 시험법으로써의 가능성을 확인하였다. OECD 가이드라인인 DA법을 이용한 비방사선 국소림프절시험법과 ELISA법을 이용한 비방사선 국소림프절시험법 가이드라인(안)을 작성하여 향후 화장품의 감작성 평가에 활용할 수 있는 기반을 마련하였다. 또한 ELISA법을 이용한 비방사선 국소림프절시험법으로 hexyl cinnamic aldehyde, 2,4-dinitrochlorobenzene, salicylic acid, sodium lauryl sulfate, nickel chloride의 감작성을 평가한 결과 기존 시험결과와 동일함을 확인하였다. DA법을 이용한 비방사선 국소림프절시험법으로 2,4-dinitrochlorobenzene의 감작성을 평가한 결과 기존 시험과 같은 결과를 보였다. 이를 통해 두 가지 비방사선 국소림프절시험법을 확립하였다.

Abstract ▼

Skin sensitization (OECD TG 406) and local lymph node assay (LLNA, OECD TG 429) is used to identify the skin-sensitization potential of a test substance. The guinea pig has been the animal of choice for skin senstization test (OECD TG 406), the mouse has been the animal of choice for LLNA (OECD TG 4

Skin sensitization (OECD TG 406) and local lymph node assay (LLNA, OECD TG 429) is used to identify the skin-sensitization potential of a test substance. The guinea pig has been the animal of choice for skin senstization test (OECD TG 406), the mouse has been the animal of choice for LLNA (OECD TG 406). The guinea pig test does not provide but the LLNA provides quantitative data for dose-response assessment. But there are certain limitation of the LLNA (e.g. the testing of certain metals, false positive findings with certain skin irritants). Therefore, it is necessary to develop new skin senstization test that over come limitations of current skin sensitization tests. In this project, we develop new in vitro skin sensitization test based on toxicity pathway to predict skin sensitization potential. We established ARE(Antioxidant Response Element)-luciferase expression vector transfected HaCaT cell line (ARE-HaCaT) for detecting the change of Keap1-Nrf2-ARE signaling with treatment of skin sensitizer and non-skin sensitizer. Hexyl cinnamic aldehyde, 2,4-dinitrochlorobenzene and nickel chloride ,which are increased luciferase activity concentration-dependent manner, are identified as skin sensitizers. Salicylic acid and sodium lauryl sulfate have no effect on luciferase activity, and are identified as non skin-sensitizers. These results are same with the results of human test.
We developed two domestic guidelines on alternative test methods for identifying the skin-sensitization potential of a test substance for internatinal harmonization. Two test guidelines are LLNA:DA (OECD TG 442A) and LLNA:BrdU-ELISA(OECD TG 442B). In addition, we performed LLNA:DA and LLNA:BrdU-ELISA to establish test methods.

목차 Contents

• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 1
• 표지 ... 2
• 국문 요약문 ... 3
• Summary ... 4
• 목차 ... 5
• 연구개발과제 연구결과 ... 6
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 10
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 12
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 48
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 54
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 56
• 제7장 참고문헌 ... 57
• 제8장 첨부서류 ... 61