초록 ▼

넙치 및 무지개 송어와 같은 어류에서 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스는 대량폐사의 원인이 되는 병원체이다. 어류에서 렉틴은 바이러스 감염에 있어서 선천멱역에 중요한 역할을 담당한다. 본 연구에서는 EST 분석을 이용하여 돌돔으로부터 총 1,435 bp 길이의 fucose binding lectin을 새롭게 동정하였다. RbFTL-3 단백질이 과발현된 어류세포에서 VHSV 감염 시 세포생존율이 증가 하였고, caspase-3 활성이 증가 하였다. pcDNA 3.1(+)-RbFTL-3 발현벡터에 과발현된 어류세포에서 프로테오믹 분석

넙치 및 무지개 송어와 같은 어류에서 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스는 대량폐사의 원인이 되는 병원체이다. 어류에서 렉틴은 바이러스 감염에 있어서 선천멱역에 중요한 역할을 담당한다. 본 연구에서는 EST 분석을 이용하여 돌돔으로부터 총 1,435 bp 길이의 fucose binding lectin을 새롭게 동정하였다. RbFTL-3 단백질이 과발현된 어류세포에서 VHSV 감염 시 세포생존율이 증가 하였고, caspase-3 활성이 증가 하였다. pcDNA 3.1(+)-RbFTL-3 발현벡터에 과발현된 어류세포에서 프로테오믹 분석 결과, 총 90개 의 단백질이 동정되었으며, 동정된 단백질의 biofunctional groupings과 상호네트워크를 IPA를 통하여 예측하였다. 바이러스 감염으로 인하여 HSC71이 증가하였으나, RbFTL-3dl 과발현된 세포에서는 변화가 없음을 프로테오믹 분석에서 확인 되었다. 이와 같이, HSC71 inhibitor인 KNK437을 처리하였을 때, 세포 생존율 증가와 바이러스 증식을 감소 시키고, HSC71 발현도 감소되었음을 western blot에 의해 확인 하였으며, 이는 HSC71이 항바이러스 타켓 분자임을 제시하였다. 프로테오믹 분석에서 RbFTL-3이 SNF8의 발현을 저해시켜 viral budding process를 줄이고, prothrombin의 소실을 줄여줌으로인해 출혈을 감소시켜 줌으로써 세포에서 VHSV 감염 취약함을 감소시키는 것을 규명하였다. 본 연구는 넙치 전체 지놈분석이미공개된 현 상황에서 EST 정보를 활용하여 왜 돌돔이 출혈성패혈증바이러스에 저항성을 보이는 기작을 규명하였으며, 본 연구의 주요결과물로서 돌돔유래 신규한 생체방어단백질 (F-type 렉틴)을 발견하였고, 왜 과발현된 렉틴 단백질이 바이러스 민감성 세포에서 항바이러스성을 지니는지를 단백질체 수준에서 규명한 최초의 논문성과를 도출하였다. 향 후 본 연구 결과는 항바이러스 소재 개발에 있어서 바이오마커로서 활용될 수 있고 타 어종의 항바이러스 연구에 기여할 수 있다고 본다. 그리고 2010~2013까지 연구기간 동안 특허 2건, 국제학술발표 8건, 논문발표최우수상 수상 1건, 국제학술지 (IF 9.13) 투고 1건의 성과를 도출하였다.
Ⅰ. 특허 (2건)
1. 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스에 대한 항바이러스 조성물 (출원등록번호 10-2011-0123935)
2. 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 (VHSV) 감염 관련 신규한 유전자 및 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 감염 억제용 조성물 (출원등록번호 10-2012-0110819)
Ⅱ. 대표 국제학술대회 발표 (총 8건 중 대표 2건 실적)
1. 조세영, 김종오, 오명주, 김두운. Curcumin inhibits viral hemorrhagic septicaemia virus via down-regulation of the metabolic coactivator PGC-1 alpha. 2011. KoSFoST (대한민국)
2. 조세영, 고상무, 김종오, 오명주, 이제희, 김두운. Characterization of antiviral proteins identified in the rockfish EST sequences. 2011. 4th Congress of European Microbiologists (스위스)
Ⅲ. 국제학술대회 논문발표 최우수상 수상
1. 수상자: 조세영(과제 수행 박사과정 학생)
주제: Quantitative proteomics analysis of a novel antiviral rockbream F-type lectin-3 against viral hemrrhagic septicemia virus via down-regulation of heat shock cognate 71. 2012. 한국식품영양과학회 (제주)
Ⅳ. 논문
1. Cho SY, Kwon J, Kim JO, Vaidya B, Park SH, Hong ST, Baik KS, Choi JS, Bae HJ, Oh MJ, Kim D,. Comparative proteomic analysis of antiviral effect of a novel lectin RbFTL-3 against viral hemorrhagic septicemia virus. 2013. PLoS Pathogens. (Submitted)

목차 Contents

• 일반연구자지원사업 최종(결과)보고서 ... 1
• 목 차 ... 3
• Ⅰ. 연구결과 요약문 ... 4
• Ⅱ. 연구내용 및 결과 ... 5
• 1. 연구과제의 개요 ... 5
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 5
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 5
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 6
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 7
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 7
• Ⅲ. 연구성과 ... 8