초록 ▼

1. 당초 연구목적 및 배경
그람음성세균은 자연적으로 OMVs(Outer Membrane Vesicles)라는 균외막낭을 분비하는 것으로 알려져 있으며 본 OMVs는 그람음성 세균에서 세균 대 세균의 정보교환에 중요한 역할을 수행하는 것으로 여겨지고 있다. 본 연구의 목적은 항생제 내성을 지닌 세균에서 유래된 OMVs가 항생제 내성을 지니지 않은 세균에 직접적으로 항생제 내성을 전달하거나, 항생제 내성을 지닌 OMVs가 존재할 경우 항생제가 존재하더라도 항생제 내성을 지니지 않은 세균이 성장할 수 있음을 확인하기 위하여 연구를

1. 당초 연구목적 및 배경
그람음성세균은 자연적으로 OMVs(Outer Membrane Vesicles)라는 균외막낭을 분비하는 것으로 알려져 있으며 본 OMVs는 그람음성 세균에서 세균 대 세균의 정보교환에 중요한 역할을 수행하는 것으로 여겨지고 있다. 본 연구의 목적은 항생제 내성을 지닌 세균에서 유래된 OMVs가 항생제 내성을 지니지 않은 세균에 직접적으로 항생제 내성을 전달하거나, 항생제 내성을 지닌 OMVs가 존재할 경우 항생제가 존재하더라도 항생제 내성을 지니지 않은 세균이 성장할 수 있음을 확인하기 위하여 연구를 수행하였다.
2. 당초 연구내용, 범위 및 방법
1) 항생제 내성 S. enteritidis와 항생제 감수성이 높은 S. enteritidis를 양계장에서 분리하였고, 생화학적 검사와 MALDI-TOF MS를 이용하여 동정하였다. 이 후 항생제 감수성 검사를 실시하여 S. enteritidis 중 항생제 내성이 높은 세균(Sal45)와 내성이 낮은 세균(Sal26)을 분리하였다.
2) Sal45세균을 8L로 대량 배양한 뒤 원심분리를 실시하여 상층액만 따로 Quixstand purifying system을 이용하여 100 kDa를 기준으로 농축을 하였고 다시 초원심분리를 실시하여 자연적으로 분비하는 OMVs를 구하였다. 이 후 OMVs의 순수분리를 위하여 60%에서 35%에 이르는 sucrose density gradient를 실시하여 순수 OMVs만을 분리하였다. 이 후 다시 PBS로 씻어낸 후 초원심분리를 실시하여 실험에 이용하였다. 당일 분리한 OMVs만을 이용하였고, 위의 과정을 각각의 실험마다 별도로 실시하였다.
3) 순수 분리한 OMVs를 Carbencillin이 포함된 배지에 protein assay 기준 100ug을 넣은 뒤 항생제 내성이 없는 sal26 세균이 성장할 수 있는지를 확인하였다.
4) 순수 분리한 OMVs라도 DNA contents가 분리 시에 미량이라도 들어있을 수 있고, 이러한 DNA contents가 sal26세균에 항생제 내성 전달 기전에 관여할 수 있다. 이러한 가정을 제외하기 위하여 배지 내에 DNAse를 처리하여 OMVs만이 항생제 내성 전달에 관여함을 확인하였다.
5) 항생제 내성 Sal45세균의 genomic DNA나 plasmid가 항생제 내성을 전달할 수 있으므로 이를 배제하기 위하여 genomic DNA나 plasmid를 Sal45세균에서 분리하여 항생제 내성이 없는 Sal26세균과 함께 배양을 실시하였다.
6) 마지막으로 OMVs가 항생제 내성 전달에 관여하지 않으나, OMVs 자체가 배지 내 항생제를 소모하고, 항생제 감수성이 높은 세균의 증식에 도움을 준다는 가설을 확인하기 위하여 다음과 같은 실험을 실시하였다. 먼저 항생제 감수성이 높은 E. coli (RC85)과 Sal45 세균을 함께 배양하여 다재 항생제 내성 균주인 RC85+를 생산하였다. 이 후 RC85+에서 OMVs만을 위의 방법으로 분리한 후 항생제 내성이 없는 RC85세균과 다양한 항생제가 함유된 배지에서 배양을 실시하여 항생제 내성 세균에서 분리한 OMVs가 항생제를 소모하여 항생제 내성이 없는 세균이 성장할 수 있음을 확인하였다.

목차 Contents

• 2012년 선정 학문후속세대양성사업(유형 : 박사후국내연수) 결과보고서 ... 1
• 1. 당초 연구목적 및 배경 ... 1
• 2. 당초 연구내용, 범위 및 방법 ... 1
• 3. 연구내용 및 결과 ... 2
• 4. 향후 연구결과의 기대효과 및 활용 방안 ... 3