보고서 정보
주관연구기관 |
부산가톨릭대학교 |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2012-11 |
과제시작연도 |
2011 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO201400001081 |
과제고유번호 |
1545003280 |
사업명 |
2011 수의과학기술개발연구 |
DB 구축일자 |
2014-08-16
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키워드 |
비둘기 분변.환경주.임상주.병원성 효모양 진균.유전 자원.pigeon droppings.Crytococcus neoformans.environmental strain.clinical strain.pathogenic yeast-like fungus.genetic resource.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201400001081 |
초록
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최근 공원이나 자연환경의 비말 등에 포함되어 있는 Cryptococcus neoformans 및 효모양 진균에 의한 폐렴 및 피부병 등이 증가 추세에 있으며, 특히 면역이 결핍된 환자, 소아 및 노인에게 심각한 피해를 나타내고, 또한 이들 환자에 있어서는 치료가 어렵기 때문에 예방이 우선적으로 필요한 실정이다. 그러나 현재 효모양 진균에 대한 유전자원 부재로 인해 연구를 수행하려고 해도 효과적인 연구 수행이 어려운 실정이라 사회적으로 큰 이슈화가 되기 이전에 균주확보가 필수적인 상황이다.
따라서 본 과제에서는 얻어진 결과는 다
최근 공원이나 자연환경의 비말 등에 포함되어 있는 Cryptococcus neoformans 및 효모양 진균에 의한 폐렴 및 피부병 등이 증가 추세에 있으며, 특히 면역이 결핍된 환자, 소아 및 노인에게 심각한 피해를 나타내고, 또한 이들 환자에 있어서는 치료가 어렵기 때문에 예방이 우선적으로 필요한 실정이다. 그러나 현재 효모양 진균에 대한 유전자원 부재로 인해 연구를 수행하려고 해도 효과적인 연구 수행이 어려운 실정이라 사회적으로 큰 이슈화가 되기 이전에 균주확보가 필수적인 상황이다.
따라서 본 과제에서는 얻어진 결과는 다음과 같다.
1. 545개의 야생조류 분변 검체로부터 C. neoformans를 포함한 효모양 진균 790 균주를 분리 동정하였으며, 효모양 진균의 분포와 계절적 변화를 확인하였다.
2. 부산지역의 종합병원으로부터 얻어진 환자의 여러 종류의 검체로부터 효모양 진균 총 745 임상 균주를 확보하여 역학조사를 실시하였으며, 효모양 진균과 공동 감염되는 세균의 분포와 역학을 확인하였다.
3. 환경검체와 임상검체로부터 얻어진 34주의 C. neoformans 에 대해, 항진균제 내성 실험을 수행하였으며, 그 결과 분리된 거의 모든 C. neoformans에서 항진균제에 대해 저항성을 나타내지 않았다.
4. C. neoformans의 신속한 진단과 감별을 위해, C. neoformans CNLAC1 특이유전자를 이용하여 신속 진단이 가능하게 되었다. 또한, 확인한 여러 유전자를 통한 동정 실험으로 연구기간 중 분리 된 모든 분리주가 혈청형 A, 메이팅 형 α 임을 확인하였다.
5. C. neoformans 혈청형을 RFLP와 RAPD기법을 이용하여 5가지 혈청형 감별진단을 수립하였다.
6. Capsule의 항원인 GXM (glucuronoxylomannan)을 추출하여, 각 serotype 및 환경균주, 임상균주 별로 분석하였으나, serotype별로 협막의 차이점을 발견할 수 가 없었다.
7. 동물실험에서 C. neoformans의 환경주와 임상주의 유의성 있는 병원성의 차이를 발견 할 수는 없었다.
8. 동물실험에서 C. neoformans의 혈청형에 따른 병원성의 차이를 확인하였다. 그 결과, 혈청형 B 균주가 염증, 출혈 조직 손상에서 가장 강한 독성을 보임을 확인하였다.
9. C. neoformans 균주에 대해 특이적인 항원 (capsule 부위)을 이용하여 pAb와 mAb를 생산하였으나 특이혈청반응이 없었으며, 다른 효모양진균과의 교차반응이 높아 혈청을 이용한 감별진단법 개발은 가능하지 않았다.
10. 기존의 C. neoformans 분별배지인 BSA 배지보다 더 선명하고 정확한 감별배지를 개발하였으며, 혈청형별로 집락 특이성을 나타내었다.
11. 임상주와 환경주를 대상으로 ITS region을 이용한 분자생물학적 진단법을 수립하였으며, D pn I 제한효소를 이용한 RFLP법으로 Candida species를 감별할 수 있었다. phylogenetic tree 분석을 통해, Candida albicans 국내분리주는 중국
분리주(strain C1)와 계통학적으로 유사하였다.
12. 연구수행결과 분리된 모든 유전자원 및 병원체를 검역원 (한국수의유전자은행)에 기탁하였다.
Abstract
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As increasing of immunocompromised persons, opportunistic and systemic fungal infections are dramatically increasing. The encapsulated yeast Cryptococcus neoformans (Cr. neoformans) is a basidiomycetous dimorphic organism and is found worldwide, because its natural habitats are pigeon droppings and
As increasing of immunocompromised persons, opportunistic and systemic fungal infections are dramatically increasing. The encapsulated yeast Cryptococcus neoformans (Cr. neoformans) is a basidiomycetous dimorphic organism and is found worldwide, because its natural habitats are pigeon droppings and contaminated soil. Its inhalation from an environmental source may cause pulmonary and central nervous system infection in susceptible human and animal hosts. Consequently, C. neoformans and other yeast infections are an important medical problem which is required rapid diagnosis and accurate identification for early proper antifungal therapy.
Therefore, results of in this study are as follow.
1. Seven-hundred ninety pathogenic yeast-like fungi were isolated from 540 pigeon dropping samples. In addition, seasonal variation and distribution of environmental yeast-like fungus isolates were investigated.
2. Seven-hundred forty five pathogenic yeast-like fungi were isolated from clinical sample, which are collected from general hospitals, in Busan. Moreover, distribution and characterization of clinical yeast-like fungus and co-infected bacteria isolates were clear.
3. Thirty four C. neoformans clinical and environmental isolates were investigated for antibiotics susceptibility test. As a result, almost isolates were not resistant to antifungal agents.
4. For rapid diagnosis and identification of C. neoformans, CNLAC1 gene was selected. As a result, nested PCR using CNLAC1 provided one of rapid and reliable molecular diagnostic method to overcome weak points such as long culture time of many conventional methods. In addition, serotype and mating-type of thirty four C. neoformans isolates were A serotype and α-mating type.
5. Five serotype of C. neoformans were classified by using RFLP and RAPD molecular methods.
6. GXM (glucuronoxylomannan), which is capsule antigen was extracted from C. neoformans. Difference for capsule antigen between serotype was investigated. As a result, there was no difference among them.
7. Virulences of C. neoformans between clinical and environmental isolates were not different.
8. Inflammation, bleeding and tissue damage by serotype B were more severe than those by other serotypes. The virulence of C. neoformans var gattii (serotype B) is stronger than those of other serotype.
9. Polyclonal Ab and Monocloncal Ab were produced by using specific antigen of C. neoformans strain (Capsule site). However, development of diagnostic ELISA kit for C. neoformans was impossible due to high cross reaction with other yeast-like fungus.
10. We development a new selective medium for C. neoformans. This selective medium was useful than traditional selective medium (BSA). In this medium, simple serotyping of C. neoformans was possible by colony characterization.
11. We established the rapid diagnostic method of yeast-like fungi from clinical and environmental sources by molecular technique using internal transcribed spacer (ITS) region. In addition, we found that Candida albicans isolates(danation strains) is similar to China strains by phylogenetic tree analysis.
12. We sent all genetic resources and yeast-like fungus isolates to Animal, Plant and Fisheries Quarantine and Inspection Agency.
목차 Contents
- 용역연구사업 연구결과보고서 ... 1
- 제 출 문 ... 2
- 목 차 ... 3
- 연구결과보고서 요약문 ... 4
- Summary ... 5
- 총괄연구개발과제 연구결과 ... 6
- 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 6
- 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 12
- 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ... 20
- 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 45
- 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 50
- 제6장 참고문헌 ... 56
- 총괄 연구과제 요약 ... 58
- 표준기술활용 기술서 I ... 61
- 표준기술활용 기술서 II ... 65
- 표준기술활용 기술서 III ... 69
- 끝페이지 ... 73
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