초록 ▼

크론씨병은 Inflammatory Bowel Disease (IBD)에 속하는 난치성 소화질환으로 과거에는 유전적 소인에 기인하거나 자가면역질환의 일종으로 생각되었으나 최근 Mycobacterium paratuberculosis (MAP)가 세균학적 원인체로 세계적으로 주목받고 있음. 본 연구에서는 MAP의 지속감염과 크론씨병의 관계를 임상적, 면역학적, 세균학적 측면에서 분석하였음. 특히, 크론씨병, 궤양성 대장염 등 IBD 환자에서 MAP의 감염여부를 확인하고 임상 DB를 구축하였으며 다양한 IBD환자 혈청과 MAP의 분비항원,

크론씨병은 Inflammatory Bowel Disease (IBD)에 속하는 난치성 소화질환으로 과거에는 유전적 소인에 기인하거나 자가면역질환의 일종으로 생각되었으나 최근 Mycobacterium paratuberculosis (MAP)가 세균학적 원인체로 세계적으로 주목받고 있음. 본 연구에서는 MAP의 지속감염과 크론씨병의 관계를 임상적, 면역학적, 세균학적 측면에서 분석하였음. 특히, 크론씨병, 궤양성 대장염 등 IBD 환자에서 MAP의 감염여부를 확인하고 임상 DB를 구축하였으며 다양한 IBD환자 혈청과 MAP의 분비항원, 세포질내 항원을 이용하여 2DE-immunoblot과 LC-ESI/MS기법으로 총 30가지의 진단가치 항원을 발굴하였고 이에 대한 유전자 재조합 단백질과 비병원성 M. semgmatis를 이용하여 과발현 균주를 생산하였음. 또한, DSS와 TNBS를 이용하여 IBD의 병인기전 분석을 위한 동물임상모델을 확립하였고 크론씨병의 발병기전에 MAP의 방어적 백신효과와 면역세포와의 관계를 규명하였음. 본연구는 MAP 감염-크론씨병환자의 효율적인 진단을 위한 혈청학적 기법을 확립하고 크론씨병의 병인에 기여하는 MAP의 역할을 규명한 최초의 연구임.

Abstract ▼

II. Study contents and results
Step 1: Identification and production of CD-specific MAP-antigens by serological analysis
(1) Construct of clinical data base and serum bank encompassing a variety of IBD patients: A total of 125 sera from IBD patients were collected for the subsequent experiment

II. Study contents and results
Step 1: Identification and production of CD-specific MAP-antigens by serological analysis
(1) Construct of clinical data base and serum bank encompassing a variety of IBD patients: A total of 125 sera from IBD patients were collected for the subsequent experiments. In addition, we investigated the MAP infection in those patients.
(2) Primary screening of MAP antigen specifically reacting to sera from CD patients using 2DE-immunoblot and LC-ESI/MS proteomic analysis: Identification of six secreted proteins from H-MAP reacting only to sera from CD patients.
(3) Comparative analysis of protein expression pattern between MAP origin sources and production of recombinant proteins resulted from (2): Identification of two diagnostic values, rModD and rPepA, displaying a high antibody responses to sera from CD patients.
(4) Production of mouse monospecific polyclonal antibody against rModD and rPepA, respectively.
(5) Production of antigens nonspecifically disturbing host immune system and recombinant M. semegmatis expressing them: On the basis of bioinformatic analysis, GroEL-like proteins including Cpn60.1 (inducer of IL-10 from macrophages), Cpn60.2 (Hsp65) and DnaK (Hsp70) were produced.
(6) Primary construct of animal models of IBD using DSS and TNBS: Selection of DSS induced-IBD model for the subsequent experiments.
Step 2: Investigation of the functional roles of MAP in IBD and analysis of specific immune responses
(1) Analysis of specific immune responses in dendritic cells (DCs) by the proteins: Identification of proteins inducing or inhibiting of DC-maturation.
(2) Identification of protective effect of MAP infection in DSS-induced IBD mice.
(3) Identification and production of 30 proteins in secreted and cytosolic antigens from H-MAP specifically reacting to sera from MAP-CD patients by 2DE-immunoblot and LC-ESI/MS proteomics.
(4) Study on early and differential detection methods using the identified proteins for MAP-CD patients: Production of cocktail proteins with serological diagnostic potential (ELISA) for the detection of MAP-IBD patients.
(5) Investigation of the protective roles of MAP infection in DSS-induced IBD models according to the infection routes and timing. Study on the immune responses induced by MAP infection in DSS-induced mice and identification of down-regulation of immune responses by MAP infection in DCs.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 보고서 요약서 ... 4
• 요 약 문 ... 5
• SUMMARY ... 7
• 연구 성과 실적 및 향후 계획 ... 9
• 참여연구원 현황표 ... 13
• Ⅱ. 총괄연구과제 연구결과 ... 14
• 1. 연구개발과제의 배경 및 필요성 ... 15
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 23
• 3. 연구개발과제의 추진체계 ... 27
• 4. 연구개발수행 내용 및 결과 ... 28
• 5. 목표달성도 및 관련분야 기여도 ... 44
• 6. 향후 연구성과 추진 계획 ... 45
• 7. 연구개발결과의 파급효과 ... 45
• 8. 연구개발결과의 활용계획 ... 45
• 9. 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 47
• 10. 참고문헌 ... 47
• Ⅳ. 첨 부 서 류 ... 48
• 끝페이지 ... 49