초록 ▼

5. 최종 연구결과 요약
◦ 세부과제명 : 돼지 세균성 호흡기질병의 혈청학적 진단법 표준화 연구
- 주요 호흡기질병 원인체 표준항혈청 구축을 위하여 각 원인체에 대한 싱글톤 혈청, 백신접종혈청, 감염혈청을 구축하였음.
- B.bronchiseptica 및 H. parasuis에 대한 진단용 항원 선정을 위해 OMP항원 및 LPS항원을 시험하여 OMP항원을 선정하였음.
- 선정된 주요 항원을 대상으로 표준 항혈청을 이용하여 항체수준 및 반전시기를 평가하였음.
- 야외 농장혈청 구축 및 이에 대한 항체수준을

5. 최종 연구결과 요약
◦ 세부과제명 : 돼지 세균성 호흡기질병의 혈청학적 진단법 표준화 연구
- 주요 호흡기질병 원인체 표준항혈청 구축을 위하여 각 원인체에 대한 싱글톤 혈청, 백신접종혈청, 감염혈청을 구축하였음.
- B.bronchiseptica 및 H. parasuis에 대한 진단용 항원 선정을 위해 OMP항원 및 LPS항원을 시험하여 OMP항원을 선정하였음.
- 선정된 주요 항원을 대상으로 표준 항혈청을 이용하여 항체수준 및 반전시기를 평가하였음.
- 야외 농장혈청 구축 및 이에 대한 항체수준을 평가하였음.
- 세균성 호흡기질병에 대한 혈청학적 가이드라인을 설정하였음.
◦ 세부과제명: 돼지 세균성 호흡기질병의 혈청학적 진단법 산업화 연구
- M. hyopneumoniae, A. pleuropneumoniae, P. multocida에 대한 진단용 항원 개발 및 평가를 통해 각각 recombinant p46 단백질, APX toxin 및 OMP항원등을 항원으로 선정하였음.
- 선정된 주요 항원에 대한 ELISA 동일시험조건을 설정하였음.
- 진단용 항원 대량생산공정 표준화 및 ELISA 진단킷트를 제작하였음.
- 표준 항혈청을 이용하여 진단킷트의 유효성을 평가하였음.

Abstract ▼

Title (1st subtitle) : Development of Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Using Recombinant P46 Surface Antigen for Serum Antibody against Mycoplasmahyopneumoniae
Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyopnemoniae)is a causative agent of mycoplasmal pneumoniae of swine (MPS). It is widespread and ca

Title (1st subtitle) : Development of Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Using Recombinant P46 Surface Antigen for Serum Antibody against Mycoplasmahyopneumoniae
Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyopnemoniae)is a causative agent of mycoplasmal pneumoniae of swine (MPS). It is widespread and causes economic losses in the swine industry through stunted growth caused by poor feeding efficiency and susceptibility of swine to co-infection by other pathogenic organisms. Early diagnosis and isolation of infected pigs from the herd are most effective in preventing the spread of this disease. A reliable diagnosis of M.hyopnemoniae in fection is necessary for control of MPS. The 46k Daantigen(P46) of M Hwasconsidere done of the species-specificsur faceantigens. Antibodiesagainst P46 were detected most of tenin the seru m of pigsexperiment allyvac cinatedorinfected with M. hyopnemoniae from the early phase. Therefore, it proved to bean excellent marker of MPS. P 46 gene was revealed that the codingregion of the P 46 gene was 1,260 bplong, containing three TGA codons of encoding try ptophan. It is known that the TGA codonistrans latedasatry ptophanra the rthanasatranslation alstop. In the presentstudy, wedevelopedmutagenicreco mbinant P46(r-P46)proteinandvalidated an indirect ELISA for the detection of serum antibodies against M. hyopnemoniae.expressed in Escherichiacoli(1-36) M. hyopnemoniae.The codon replacement within the P46 genes was performed using GeneTailor Site-Directed Mutagenesis kit (Invitrogen). M. hyopnemoniaeThe purified r-P46 was successfully used in an enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies against M. hyopnemoniae. Hyperimmune sera against M.hyopnemoniaewerepreparedby immunizing pigs known to be free of mycoplasmas. The negative sera were harvested from known seronegative minipig. All sera were tested with commercial MHcompared the practical usefulness of ELISA. For production of the full-length P46 protein in E.coli,itisnecessarytoreplaceTGAwithTGG.Invitromutagenesistechniquestoreplacethebases,correct basechangeswereconfirmedbyDNAsequencinganalysis.Theresultingplasmid,p-ET-MHP46,wasuse dforexpressionandpurificationofr-P46protein(46kDa).Ther-P46wasstronglyboundtotheantiserum M. hyopnemoniae in western blottingSera from uninfected or non-vaccinated SPF mini-pigweretospecificityofELISA.Thespecificityscoreoftheassaywas95%.Antibodiesconversioninre sponsetoM. hyopnemoniae was shown 3 weeks after immunization with inactivated antigen of M. hyopnemoniae and did not react with sera from mock infected animals. The correlation (r²)betweenMHP46basedELISAandcommercialELISAwas0.84andobservedsimilarsero-conversionpa ttern.
In this study, we have successfully demonstrated production of M. hyopnemoniae P46 in E.coliand r-P46 was successfully used in an enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies against M. hyopnemoniae. It improved the reproducibility and simplicity of preparation of an ELISA antigen for diagnosis of M. hyopnemoniae antibodies. Taken together, it is considered to effective tool for maintaining an SPF herd of swine and increasing the productivity of a pig farm.

목차 Contents

• 총괄요약표 ... 1
• 연구과제 최종결과보고서 ... 3
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 4
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 5
• 1. 재료 ... 5
• 2. 연구전략 및 방법 ... 5
• Ⅲ. 연구결과 ... 6
• 1. 진단용 항원 개발 및 유효성 평가 ... 6
• 2. 진단용 항원의 비교 및 선정 ... 9
• 3. 동일한 검사조건이 가능한 진단기술의 표준화 ... 10
• 4. 백신접종 및 공격접종 혈청을 이용한 진단기술의 개선 및 표준화 ... 12
• 5. 혈청학적 가이드 라인 설정 ... 14
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 16
• Ⅴ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 16
• Ⅵ. 참고문헌 ... 17
• Ⅹ. 영문초록 ... 18
• 끝페이지 ... 18