초록 ▼

연구결과
1. NKT 세포 표면 존재하며 glycolipid를 인지하는 CD1d 유전자 및 단백질 확보
▶논문 및 서열 분석을 통하여 NKT cell 표면에 존재하는 CD1d 단백질에 대한 서열 정보확보
▶PCR 기법 및 분자 생물학 기법 등을 활용한 CD1d 유전자 확보
▶고효율 단백질 재조합 시스템을 활용한 CD1d 재조합 cloning
▶고효율 재조합 CD1d clone의 표적 단백질 과발현 조건 확립
▶Ni-NTA agarose resion을 활용한 표적 His-tagging CD1d 단백질

연구결과
1. NKT 세포 표면 존재하며 glycolipid를 인지하는 CD1d 유전자 및 단백질 확보
▶논문 및 서열 분석을 통하여 NKT cell 표면에 존재하는 CD1d 단백질에 대한 서열 정보확보
▶PCR 기법 및 분자 생물학 기법 등을 활용한 CD1d 유전자 확보
▶고효율 단백질 재조합 시스템을 활용한 CD1d 재조합 cloning
▶고효율 재조합 CD1d clone의 표적 단백질 과발현 조건 확립
▶Ni-NTA agarose resion을 활용한 표적 His-tagging CD1d 단백질 정제 확보
2. SELEX 기법을 활용한 CD1d 단백질과 특이적으로 결합하는 지질 대체용 앱타머 선별, 분리, 동정, 확보
▶SELEX 기법을 이용한 CD1d 단백질과 특이적으로 결합하는 DNA 앱타머 선별 조건 확립
▶SELEX 기법을 이용한 CD1d 단백질과 특이적으로 결합하는 CD1d 결합 앱타머 후보군 선별 및 분리
▶T-vector cloning 및 염기서열 분석 기법을 이용한 CD1d 단백질과 결합하는 앱타머 후보군 발굴 확보 및 동정
▶SPR 기법을 활용한 CD1d 단백질 결합 최적 CD1d 단백질 결합 앱타머 선별 및 확보
3. 선별된 CD1d 단백질과 특이적으로 결합하는 앱타머의 in vitro/in vivo에서의 효율성 평가
▶형광 염색 기법을 활용한 CD1d 단백질과 CD1d 단백질과 결합하는 앱타머간의 특이적인 결합 확인
▶In vitro에서의 NKT 세포의 활성을 통한 싸이토카인 분비 여부 확인

Abstract ▼

Result
Natural killer T (NKT) cells are a heterogeneous group of T cells that share properties of both T cells and natural killer (NK) cells. But they represent a novel lymphoid lineage distinct from mainstream T cells, B cells, and NK cells. NKT cells recognize glycolipid antigens presented by C

Result
Natural killer T (NKT) cells are a heterogeneous group of T cells that share properties of both T cells and natural killer (NK) cells. But they represent a novel lymphoid lineage distinct from mainstream T cells, B cells, and NK cells. NKT cells recognize glycolipid antigens presented by CD1d - a subset of the CD1 family of MHC class I like molecules - and activated when presented with glycolipids bound to CD1d. This glycolipid antigens, a combination of a sugar head group and lipid tails, fits into the antigen-binding groove of human CD1d that the lipid tail is hidden in the CD1d cleft, whereas the sugar head group is exposed for T cell receptor (TCR). The glycolipid stimulated anti-cancer and anti-viral cytokine release from human NKT cells for anti-cancer and anti-viral. So, for years, researchers found that a few natural lipid and glycolipid antigens recognized by NKT cells, and much more extensive studies have been carried out using synthetic glycolipid ligands that mimic natural CD1d-presented antigens. But natural lipid and glycolipid antigens were difficult to obtain direct from organism. Synthetic glycolipid ligands were not physiologically relevant for CD1d-mediated NKT cell activation because they are artificial. Therefore, we should develop new biomaterials as alternative to glycolipid antigens. This study describes the cloning and expression pattern of a CD1d gene. And describes methods for selection of CD1d binding DNA aptamer. CD1d sequence analysis predicted an 1,008 bp open reading frame encoding a protein of 336 amino acids with a predicted molecular weight of about 45 kDa. A CD1d binding DNA aptamer was carefully selected by bead binding method and characterized to target CD1d directly. The real time PCR, EMSA, SPR binding assay, and dot blotting verified the high specificity and affinity of the aptamer to CD1d. CD1d binding DNA aptamers which inhibit significant interaction between CD1d protein and CD1d antibody in vitro. This results provide a set of new biomaterials as alternative to glycolipid antigens with aptamer. And CD1d binding DNA aptamers were applied for CD1d detection. We will be used to reactivate of NKT cells by CD1d binding DNA aptamer.

목차 Contents

• 일반연구자지원사업 최종보고서 양식 ... 1
• 목차 ... 2
• 연구 계획 요약문 ... 3
• 연구 결과 요약문 ... 4
• 한글요약문 ... 4
• SUMMARY ... 5
• 연구내용 및 결과 ... 6
• 1. 연구 개발 과제의 개요 ... 7
• 2. 국내외 기술 개발 현황 ... 10
• 3. 연구 수행 내용 및 결과 ... 16
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 23
• 5. 연구 결과의 활용 계획 ... 24
• 6. 연구 과정에서 수집한 해외 과학기술 정보 ... 26
• 7. 주관연구책임자 대표적 연구 실적 ... 27
• 8. 참고 문헌 ... 27
• 9. 연구 성과 ... 28
• 10. 기타사항(중요 연구 변경사항 등) ... 29
• 끝페이지 ... 30