해산어류에서의 Poly(I:C)-면역법을 이용한 바이러스백신의 실용화 Utilization of virus vaccine using Poly(I:C)-immunization for marine fishes.원문보기
보고서 정보
주관연구기관
전남대학교 Chonnam National University
연구책임자
니시자와 토요히코
보고서유형
최종보고서
발행국가
대한민국
언어
한국어
발행년월
2013-10
과제시작연도
2012
주관부처
교육과학기술부
사업 관리 기관
한국연구재단
등록번호
TRKO201400008404
과제고유번호
1345168299
사업명
기본연구지원사업(유형I)
DB 구축일자
2014-05-31
초록▼
1) 능성어와 그 병원바이러스인 NNV, 넙치와 VHSV를 모델로 각 실험계를 확립하고, Poly(I:C)-면역법의 유효성에 대해서 검증하였다. 즉, Poly(I:C)을 투여한 각 어종에 바이러스를 근육내 투여하고, 그 생존성을 관찰하므로서 Poly(I:C)을 투여한 어류가 抗바이러스상태인 것을 확인하였고, 또한, 이들 실험의 생잔어로부터 투여한 바이러스에 대한 특이항체가 검출되는 것을 ELISA로 확인하였다. 아울러, 면역된어류를 각각의 병원바이러스로 공격하고, 그 생잔율의 추이를 관찰하여 면역효과에 대해서 검토하였다. 2)
1) 능성어와 그 병원바이러스인 NNV, 넙치와 VHSV를 모델로 각 실험계를 확립하고, Poly(I:C)-면역법의 유효성에 대해서 검증하였다. 즉, Poly(I:C)을 투여한 각 어종에 바이러스를 근육내 투여하고, 그 생존성을 관찰하므로서 Poly(I:C)을 투여한 어류가 抗바이러스상태인 것을 확인하였고, 또한, 이들 실험의 생잔어로부터 투여한 바이러스에 대한 특이항체가 검출되는 것을 ELISA로 확인하였다. 아울러, 면역된어류를 각각의 병원바이러스로 공격하고, 그 생잔율의 추이를 관찰하여 면역효과에 대해서 검토하였다. 2) IFN 및 抗바이러스상태유도를 위한 Poly(I:C) 최소유효농도를 확인하였다. 즉, 각 어종에, 다른 농도의 Poly(I:C)을 투여한 후, 병원바이러스로 공격하고, 그 사망율을 비교하므로서 본 면역법에 있어서의 Poly(I:C)의 최소필요량을 확인하였다. 면역에 이용한 바이러스의 2차 감염에 의한 영향을 최소한으로 억제하는 것을 목적으로 개별사육 장치를 개발하여 실시하였으며, 이 방법에 의해 Poly(I:C)의 필요최소량을 정확하게 측정하는 것이 가능하였다. 3) Poly(I:C)의 투여에 의해 유도된 항바이러스상태의 지속기간을 검토하였다. 즉, 각 어종에 Poly(I:C)을 투여한 후 0, 2, 4, 7, 14일째에 면역용 병원바이러스를 투여하고, 각 실험구에 있어서의 누적사망 추이를 비교하여 Poly(I:C)투여에 의한 항바이러스상태의 지속기간을 밝히려고 하였다. 본 실험에 의해, Poly(I:C)투여 후에 실시하는 면역용 바이러스의 적정 투여시간을 확인하였다. 4) 면역용 바이러스의 최소투여량의 검토하였다. 1차년도의 IFN 및 抗바이러스 상태유도를 위한 Poly(I:C) 최소유효농도로 밝힌 Poly(I:C)량을 투여한 어류에게, 1차년도 Poly(I:C)의 투여에 의해 유도된 항바이러스상태의 지속기간을 검토실험으로 밝힌 접종시기에 각각의 농도의 면역용 바이러스를 투여하고, 3주일 후에 각 병원바이러스에 의한 공격 시험을 실시하고, 각 실험구의 누적사망의 추이를 비교하는 것으로, Poly(I:C)-면역에 필요한 면역용 바이러스 최소투여량을 밝혔다. 5) 면역용 바이러스의 투여방법을 검토하였다. 면역용 바이러스의 투여방법으로서, 근육내접종법과 침지법의 유효성을 비교하였다. 한편, 근육내접종법과 침지법에 의한 효과를 검토하여, 각 방법에 있어서의 면역용 바이러스 필요최소량을 구하고, 그 값에 의해 어느 면역법이 유리할지를 판정하였다. 6) Poly(I:C)투여 부위 및 투여 방법을 검토하였다. Poly(I:C) 투여에 의해 Toll-like Receptor (TLR)를 통해 IFN이 유도되어 투여 물고기가 항바이러스 상태가 되는 것을 고려하면, Poly(I:C)의 투여부위 및 투여방법은 근육내접종이 좋은 것으로 생각되었다. 하지만, 양식현장에서의 실용화를 고려할 때, 근육내 주사 이외의 방법으로 투여가능하다면 본 법의 편이성이 향상될 것으로 생각되었다. 이러한 점에서 Poly(I:C)의 투여부위 및 투여방법으로 아가미 및 비강에의 적하에 의한 면역효과에 대해서 비교검토 하였다. 7)양식현장에서의 실용화를 위하여 1-2차년 연구결과물의 조건을 토대로, 넙치 및 능성어 양식현장에서 본 방법으로 면역한 어류를 사육해, 비면역구와의 생존율과 비교함으로서 본 방법의 실용성을 검증하였다. 8)Poly(I:C)의 치료효과를 확인하기 위하여 IFN 유도물질인 Poly(I:C)를 어류에 투여함으로서, 치료효과를 기대할 수 있는지 검토하였다. 미리 병원바이러스로 공격한 어류에 Poly(I:C)를 투여해, 폐사율 및 증상의 차이를 확인하고, 바이러스성 질병이 발생한 양식장에서 발병군에 Poly(I:C)를 투여해, 비투여군과의 폐사율의 차이를 비교하였다. 9)Poly(I:C)-면역법의 유효성 및 독성을 검증하였다. Poly(I:C)투여 및 무투여 어류를 준비하여 실험구의 어류를 NNV 바이러스로 면역했을 때, 체내의 NNV감염가의 추이를 해석하여 어떠한 상황 하에서 바이러스에 대한 면역이 유도되어지는가를 검토하였다. 아울러 넙치를 대상으로 Poly(I:C)의 독성에 대하여 검토하였는데 사용적량에서의 안정성을 확인하였으며. 저온-고농도의 경우 독성가능성이 확인되었다.
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