초록 ▼

Caliciviridae에 속하는 노로바이러스는 세계적으로 비박테리아성 급성 위장염의 주요 원인 중 하나이다. 본 연구에서는 항체를 사용한 빠른 진단 시스템의 개발을 위해 노로 바이러스 유전자의 일부 영역을 활용하여 rVLP들을 만들었다. 항원으로서 ORF2 또는 ORF3 및 ORF2+3 영역을 선택하여 활용하여 발현을 유도하였다. 본 연구의 결과로 만들어진 rVLP들은 향후 노로 바이러스 감염의 특성에 따라 식품은 물론 여러 임상 시료들에서 노로 바이러스의 신속한 검출을 위한 면역 분석법 개발에 사용할 수 있다.
노로바이러스

Caliciviridae에 속하는 노로바이러스는 세계적으로 비박테리아성 급성 위장염의 주요 원인 중 하나이다. 본 연구에서는 항체를 사용한 빠른 진단 시스템의 개발을 위해 노로 바이러스 유전자의 일부 영역을 활용하여 rVLP들을 만들었다. 항원으로서 ORF2 또는 ORF3 및 ORF2+3 영역을 선택하여 활용하여 발현을 유도하였다. 본 연구의 결과로 만들어진 rVLP들은 향후 노로 바이러스 감염의 특성에 따라 식품은 물론 여러 임상 시료들에서 노로 바이러스의 신속한 검출을 위한 면역 분석법 개발에 사용할 수 있다.
노로바이러스의 서로 다른 유전자형인 GⅠ 과 GⅡ를 구별하여 검출하기 위하여, 본 연구에서는 RT- PCR 및 semi-nested PCR을 각각 특정 NKⅡ-F, NKⅡ-R1 및 NKⅡ-R2 primer 쌍들을 사용하여 실시하였다. 임상 및 환경 시료에서 검출된 바이러스의 유전정보의 상관관계는 계통 발생 분석을 통하여 확인하였다. 결과적으로, 새롭게 설계된 primer에 의해서 정성 및 정량 분석 모두가 가능한 새로운 primer 염기서열을 본 연구를 통하여 확인 및 개발하였다. 본 연구에서 새롭게 개발된 primer는 임상 및 환경 시료 모두에서 장내 바이러스를 정확히 진단하는 것에 도움이 될 수 있을 것이다.
NCBI 와 국내 논문으로 확인된 염기 서열 정보들을 매년 구분하여 수집하였고 수집된 정보들은 국립환경과학원의 유해 미생물 웹사이트에 정보를 업데이트하였다. 지난 5년 동안 임상과 환경시료에서 각각 발견된 염기서열 정보들은 연도별로 수집 하여 각 시료들 사이의 상관관계는 수집 된 시퀀스에 계통 발생학적 분석방법을 사용하여 분석하였다. 이러한 바이러스성 병원체에 대해 민감성이 높은 검출 방법의 개발은 향후 공중 보건 향상을 위해 유용할 것이다.

Abstract ▼

Norovirus (NoV), which belongs to the family Caliciviridae, is one of the major causes of nonbacterial acute gastroenteritis in the world. In this study, we made rVLPs from regions of Norovirus for development of the rapid diagnosis system using antibodies. As antigens, parts of the ORF (open readin

Norovirus (NoV), which belongs to the family Caliciviridae, is one of the major causes of nonbacterial acute gastroenteritis in the world. In this study, we made rVLPs from regions of Norovirus for development of the rapid diagnosis system using antibodies. As antigens, parts of the ORF (open reading frame) 2 and/or 3 regions were selected and their expressions were induced. Those rVLPs can be used in further immunoassay for the rapid detection of NoVs from food and clinical specimens to characteristics of Norovirus infectivity.
To detect Norovirus genotypes GⅠ and GⅡ, RT-PCR and semi-nested PCR were performed with specific NKⅡ-F, NKIⅡ-R1, and NKⅡ-R2 primer sets, respectively. The correlation in genetic information of the virus detected from clinical and environmental samples was found through phylogenetic analysis. As a result, the qualitative analysis was possible that newly designed primer was also possible for qualitative and quantitative analysis. In this study, the developed method could be useful for diagnosing enteric viruses in both clinical and environmental specimens.
Nucleotide sequence information listed in NCBI and in domestic dissertation has been collected by year. Collected sequence information was updated on the harmful microorganisms Web site of Institute of Environmental Research. Nucleotide sequences discovered from clinical and environmental over the last five years were collected by year. The close correlation between clinical and environmental was found from the result of phylogenetic analysis to the collected sequences. Sensitive and high-throughput detection methods for these viral pathogens are compulsory for diagnosing viral pathogens and subsequently improving public health.

목차 Contents

• 표 지 ... 1
• 제 출 문 ... 5
• 목 차 ... 7
• 표 목 차 ... 8
• 그 림 목 차 ... 9
• Abstract ... 11
• 요약문 ... 13
• Ⅰ. 서 론 ... 13
• 1. 연구의 배경 ... 13
• 2. 연구의 목적 ... 16
• 3. 연구의 필요성 ... 17
• Ⅱ. 연구내용 및 방법 ... 19
• 1. 연구의 내용 ... 19
• 2. 연구수행 방법 ... 22
• Ⅲ. 연구결과 및 고찰 ... 30
• 1. 노로바이러스 감염특성 연구 ... 30
• 가. 세포배양 이외의 노로바이러스 감염특성 자료 조사 ... 30
• 나. 베큘로바이러스 (Baculovirus) 발현 유도체계 조사 ... 40
• 2. 환경 중 노로바이러스의 변종 등 유전학적 특성 연구 ... 50
• 가. 지하수, 하천수, 방류수 등 환경 중 노로바이러스 확보 ... 50
• 나. 확보된 환경 분리주의 종류 분석 및 변종검출방법 개선 ... 50
• 3. 노로바이러스 유전자 DB 정리 및 분석 ... 60
• 가. NCBI에서 업데이트 되고 있는 정보를 시기 및 지역별로 정리 ... 60
• 나. 노로바이러스 유전자형 결정을 통한 국내 분포특성 조사 (년도별) ... 60
• 다. 노로바이러스 유전자 DB와 식중독 사고 환자의 연관성 평가 ... 61
• 라. MEGA 5.2 프로그램을 이용한 염기서열의 배열 및 계통분석 ... 64
• 마. Nucleotide 및 Amino acid 분석을 통한 기능적 연관성 분석 ... 70
• Ⅳ. 결 론 ... 72
• 1. 노로바이러스 감염특성 연구 ... 72
• 2. 환경 중 노로바이러스의 변종 등 유전학적 특성 연구 ... 74
• 3. 노로바이러스 유전자 DB 정리 및 분석 ... 75
• 참고문헌 ... 78
• 끝페이지 ... 81