초록 ▼

인간의 정상적인 대사과정 및 약물남용, 흡연, 음주, 농약, 방사선 등의 외부적 요인으로 자유기가 과도하게 생성될 경우, 생체는 산화적 stress에 노출되어 연쇄적 지질과산화 반응이 진행되며, 이로 인해 세포막이 파괴되고 DNA 손상을 일으키게 되어 궁극적으로는 간경화, 돌연변이, 암, 노화 등을 야기시킨다. 시호는 소시호탕, 시호계지탕, 시호가용골모려탕의 주요 구성 약물로서 한방에서 간장 질환 치료의 대표적 약물로 알려져 있으나, 단지 경험과 이론적인 근거로 사용되어 왔을 뿐, 본 약물의 생체 방어 효능에 관한 객관적 기전 연구

인간의 정상적인 대사과정 및 약물남용, 흡연, 음주, 농약, 방사선 등의 외부적 요인으로 자유기가 과도하게 생성될 경우, 생체는 산화적 stress에 노출되어 연쇄적 지질과산화 반응이 진행되며, 이로 인해 세포막이 파괴되고 DNA 손상을 일으키게 되어 궁극적으로는 간경화, 돌연변이, 암, 노화 등을 야기시킨다. 시호는 소시호탕, 시호계지탕, 시호가용골모려탕의 주요 구성 약물로서 한방에서 간장 질환 치료의 대표적 약물로 알려져 있으나, 단지 경험과 이론적인 근거로 사용되어 왔을 뿐, 본 약물의 생체 방어 효능에 관한 객관적 기전 연구는 이루어지지 않고 있다. 또한 최근 약물효과와 침 자극 효과를 동시에 추구하는 약침요법이 개발되어 새로운 치료법으로 주목받고 있는데 이러한 치료법은 재래의 경구적 약물 투여 방식과는 달리, 약물 대사경로를 거치지 않고 약물 고유의 성분이 직접 생체에 적용될 수 있다는 이점이 있다. 한편 한의학에서는 자유기에 의한 산화적 손상을 주로 노화와 관련하여 연구하여 왔으나, 연구대상 약물의 선정 및 연구 방법적 측면이 다소 미흡하므로, 향후 한의약에 대한 항산화 기전을 객관적으로 규명하는 연구가 요구된다고 사료된다. 또한 항산화 효능을 가진 물질의 자유기 소거능은 면역 및 항암활성화과도 밀접한 관련성이 있는 것으로 보고 있다.
따라서 본 연구는 간장 질환 치료에 주요 약물로서 사용되는 시호의 생체 방어기전이 간 세포막에 다량 함유되어 있는 고도의 불포화 지방산의 과산화를 억제시킴에 기인한다고 판단되어 시호 약침액의 생체 방어 기전을 다음과 같은 방법으로 검토하였다.
그 방법으로는 1) 지질의 자동산화 억제 효과, 2) 자유기 소거효과, 3) 간 세포막의 지질과산화 반응 억제 효과, 4) 생체의 항산화 효소활성 및 항산화 물질에 미치는 효과, 5) 항염증 작용 규명, 6) 생체의 면역체계에 미치는 효과, 7) 항암 활성 검토 8) 항알러지 효과 등으로 세분하여 행하였다.
실험결과 본 연구에서는 시호약침액의 혈자리 투여로 1)지질의 자동산화를 유의성 있게 억제하였으며 2) 간 세포막의 지질과산화 반응 억제효과를 나타내었으며 3) 생체의 항산화 효소들(catalase, glutathione peroxidase, superoxide diamutase)의 활성을 유의성 있게 변화시켜 지질과산화 반응을 억제하는 것으로 나타났으며, 4)group I 및 phospholipase A₂의 활성을 억제하여 항염증 활성을 나타내었으며 5) 암세포의 성장억제, Sarcoma-180에 의한 복수암 마우스의 생명연장 및 natural killer 세포의 활성을 증대시켰으며 6) phase II효소인 quinone reductase 활성을 증가시키고 polyamine의 생성을 억제시키는 것으로 나타났다. 7) Carrageenin 유도성 부종에 대해서도 시호 약침 처치는 강한 부종 억제 효과를 나타내었다. 8) IgE가 매개하는 PCA 반응을 다소 억제시켰으며, 그러나 시호약침 처치가 알레르기 항원에 대한 IgE 생성을 현저하게 억제하지는 못하는 것으로 판단되었다. 9) Compound 48/80으로 유발된 전신성 아나필락시스 반응에 대해서 시호약침 처치가 흰쥐에서 histimine 유리를 억제하였다.
이상의 연구 결과로, 한약(약침) 효능성이 과학화 및 생체의 산화적 손상으로 인한 질환의 예방과 치료에 적용될 수 있으며, 면역체계 이상을 조절하고, 암의 발생(암예방)을 억제하고 항염증활성을 가지는 것으로 확인되었다.

Abstract ▼

Bupleury radiix has been used for the treatment of fever, liver disease, and inflammation in traditional medicine. The present study was performed to evaluate the antioxidant activity of Bupleuη radix aqua-acupuncture solution (BRAS) in vitro and in acetaminophen-induced mice, anti-inflammatory and

Bupleury radiix has been used for the treatment of fever, liver disease, and inflammation in traditional medicine. The present study was performed to evaluate the antioxidant activity of Bupleuη radix aqua-acupuncture solution (BRAS) in vitro and in acetaminophen-induced mice, anti-inflammatory and anti-allergic effects, inhibitory effect of BRAS on phospholipase A₂(PLA₂) activity. and immune response in mice.
Antioxidant effect of BRAS on lipid peroxidation was determined according to the method of 2-thiobabituric acid. BRAS inhibited markedly peroxidation of linoleic acid during the autoxidation, and also inhibited lipid peroxidation induced by hydroxyl radical derived from H₂O₂-Fe²⁺ in rat liver homogenate. BRAS showed 30% scavenging effect on DPPH radical and 53% inhibitory effect on superoxide generation in xanthine-xanthine oxidase system. With the administration of acetaminophen to starved ICR mice after pretreatment of BRAS for 6 days, lipid peroxide, glutathione, and activities of hepatic enzymes were measured. In vivo administration of BRAS showed significant inhibition of acetaminophen-induced lipid peroxide and glutathione depletion and elevation of superoxide dismutase activity in liver mitochondrial and cytosolic fractions.
To investigate the anti-inflammatory effect of BRAS on carrageenin-induced edema, rat was pretreated with BRAS into ST₃₆, which is the classical acupuncture point in traditional medicine, and then injected with carrageenin in the rat paw. BRAS significantly suppressed the carrageenin-induced edema. We also investigated the effect of BRAS on IgE-mediated passive cutaneous anaphylactic (PCA) reaction. BALB/C mice were sensitized 3 times by subcutaneous injection of egg albumin emulsified with complete Freund’s adjuvant, and treated BRAS for 3 days after each sensitization.
BRAS slightly inhibited the IgE-mediated PCA reaction.
In addition, BRAS improved survival of mice and showed inhibition of histamine release in the compound 48/80-induced anaphylactic shock models. BRAS exhibited dose-dependent inhibitory effect on histamine release from rat peritoneal mast cells.
It was also investigated the inhibitory effect of BRAS on activities of two different types of phospholipase A₂ (PLA₂). BRAS exhibited about 92% inactivation of group I PLA₂, and 60% inactivaton of group II PLA₂.
Moreover, BRAS significant1y exhibited an cytolytic effect in HepG₂ cells and showed significant antitumor activity against Sarcoma-180 bearing mice by CV₄ acupuntual administration.
The effect of BRAS on immune suppression induced by glucocorticoid was studied. ICR mice were administrated with glucocorticoid for 7 days and immunized with hapten, methamphetamine-horseradish peroxide. BRAS injected into CV₄ and BL₂₃, which are the classical acupuncture points in traditional medicine, for 7 days.
B and T cells proliferation and cytolytic activity of natural killer(NK) cell were measured. Intraperitoneal injection of glucocorticoid decreased lysozyme activity in macrophage and cytolytic activity of NK cell. B and T cell proliferations were significantly increased in aqua-acupuncture group compared to normal group. BRAS significant1y increased the lysozyme activity in macrophage, and the cytolytic activity of purified NK cell on K562. These results suggest that BRAS has antioxidative activity in vitro and in vivo and play anti-inflammatory role by mechanisms that probably involve inactivation of PLA₂ and cyclooxygenase. BRAS also has immuno-modulatory effect by proliferation of B and T cells that are suppressed by glucocorticoid and increase of NK cell activity.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구개발사업 최종보고서 요약문 ... 4
• Project Summary ... 5
• 연구개발과제 연구결과 ... 7
• 1. 연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 7
• 2. 연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ... 10
• 3. 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 40
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 45
• 5. 연구개발과제의 활용계획 ... 49
• 6. 첨부서류 ... 49
• 7. 참고문헌 ... 56
• 끝페이지 ... 59