초록 ▼

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살모넬라의 표면항원을 토끼에 주사하여 얻은 cDNA library를 screenlng 하여 항-sssP 항체 일부의 cDNA 760bp fragment를 확보하였고 이를 sequenclng 하여 Fab cDNA임을 확인하였다‘ 이 유전자를 성공적으로 pGINP21M 표면발현벡터에 삽입하여 pGINP21 M-SAB를 얻었으며 대장균에 transfection 하여 빙핵활성단백질과 항체의 융합단백질이 세포표면에 발현되었음을 확인하였다 융합단백질의 표면발현은 대장균의 생장에 영항을 미치지 않았으며， 따라서 본 연구는 항살

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살모넬라의 표면항원을 토끼에 주사하여 얻은 cDNA library를 screenlng 하여 항-sssP 항체 일부의 cDNA 760bp fragment를 확보하였고 이를 sequenclng 하여 Fab cDNA임을 확인하였다‘ 이 유전자를 성공적으로 pGINP21M 표면발현벡터에 삽입하여 pGINP21 M-SAB를 얻었으며 대장균에 transfection 하여 빙핵활성단백질과 항체의 융합단백질이 세포표면에 발현되었음을 확인하였다 융합단백질의 표면발현은 대장균의 생장에 영항을 미치지 않았으며， 따라서 본 연구는 항살모넬라 항체를 성공적으로 표면 발현시킴으로써 Salmonella 의 on-site monitoring system에 필요한 중요한 핵심기술을 확보하게 되었다.

Abstract ▼

Ingestion of food or water contaminated vvith Salmonellae can cause salmonellosis such as gastroenteritis, typhoid, or even death in some severe cases. Although food industry have been concerned about the incidents for many decades, incidents of salmonellosis have steadily increased for the past few

Ingestion of food or water contaminated vvith Salmonellae can cause salmonellosis such as gastroenteritis, typhoid, or even death in some severe cases. Although food industry have been concerned about the incidents for many decades, incidents of salmonellosis have steadily increased for the past few years. Recently, imported food contaminated with Salmonella or other pathogenic enteric bacteria have been reported in Korea. Common methods used for detecting pathogenic microorganisms in food are time-consuming, inconvenient, and expensive. Faster, simpler, and less expensive methods have been sought by the industry and the public worldwide.
Bacterial surface display technology has enabled to express useful and active proteins on the surface of bacteria. The purpLJse of this study is to express antibody protein that binds specifically to a surface protein of Salmonella and to provide basis towards developing a faster and possibly an on-site detection system for screening Salmonella in food and water.
The scope of this study includes screemng and cloning of cDNA encoding anti-SSSP antibody, and insertion of the gene into the surface expression vector pGINP21M and construct pGINP21M -SAB. This plasmid was transfected into E. coli, and was tested for surface expression of INP-antibody conjugated protein complex. The anti-SSSP antibody was successfully launched on the surface of the bacteria in conjugation vvith the ice-nucleation protein.
The results open the possibility of developing an on-site or instant detection system that will monitor contamination of Salmonella species in food.
Further studies will include increasing the binding affinity thus sensitivity of the antibody using the surface display system, concentrating the antigen-antibody complex using the characteristics of ll"JP, accurate measuring of antibody-antigen complex, and application of the system in detecting other pathogenic bacteria.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• 영문요약문(SUMMARY) ... 5
• 목차 ... 6
• 제 1 장 서론 ... 8
• 제 1 절 연구개발의 목적 및 필요성 ... 8
• 1. 배경 ... 8
• 2. 문제의 제기 ... 9
• 3. 기술의 개요 ... 10
• 4. 기술의 장점 및 기대효과 ... 12
• 제 2 절 연구개발의 범위 ... 14
• 1. 단계별 구분 ... 14
• 2. 본 연구과제의 범위 ... 16
• 제 2 장 국내.외 기술개발 현황 ... 18
• 1. 관련기술의 국내외 개발현황 ... 18
• 2. 기술개발의 기대효과 ... 20
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 21
• 제 1 절 항-sssP 항체 cDNA의 확보 ... 21
• 1. Bacterial strains ... 21
• 2. Salmonella-specific surface protein(SSSP) 의 분리 ... 21
• 3. 항-SSSP polyclonal antibody total RNA 및 cDNA 의 분리 ... 21
• 4. 항-SSSP 항체의 cDNA 염기서열 결정 ... 22
• 제 2 절 pGINP21M-SAB의 제작 ... 24
• l. pGINP2IM 벡터 ... 24
• 2. pGINP21M-SAB 의 제작 ... 24
• 제 3 절 항-SSSP 항체의 표면발현 ... 25
• 1. 표면발현균주 및 배양배지 ... 25
• 2. 항-SSSP 항체의 대장균 표면발현 ... 25
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 27
• 제 1 절 연구개발목표의 달성도 ... 27
• 제 2 절 기술발전에의 기여도 ... 28
• 제 5 장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ... 29
• 가. 계량적 성과 ... 29
• 나. 성과내용기술 ... 29
• 다. 활용계획 ... 29
• 제 6 장 기타 중요변경사항 ... 30
• 제 7 장 참고문헌 ... 30
• 최종보고서 요약 (초록) ... 32
• 끝페이지 ... 33