초록 ▼

○ 연구결과
제1세부과제에서는 암조직에서 MMP의 발현이 증가하며 암조직의 MMP가 inhibitor에 의해 용이하게 억제되는 환자의 예후가 양호하였다. 따라서 이러한 환자를 대상으로 MMP 억제제를 투여함이 바람직할것으로 판단되었다. 또한 혈액내에 신생혈관생성인지가 존재하는 경우 혈관내피세포의 증식 유도능이 증가되었고， 이러한 환자에서는 예후가 불량하였다. 따라서 본 과제에서 개발한 ex vivo 모델을 이용하여 혈관생성억제 치료를 시행할 수 있는 대상 환자를 선정할 수 있을것으로 기대된다. 제2세부과제에서는 sFLT1 cD

○ 연구결과
제1세부과제에서는 암조직에서 MMP의 발현이 증가하며 암조직의 MMP가 inhibitor에 의해 용이하게 억제되는 환자의 예후가 양호하였다. 따라서 이러한 환자를 대상으로 MMP 억제제를 투여함이 바람직할것으로 판단되었다. 또한 혈액내에 신생혈관생성인지가 존재하는 경우 혈관내피세포의 증식 유도능이 증가되었고， 이러한 환자에서는 예후가 불량하였다. 따라서 본 과제에서 개발한 ex vivo 모델을 이용하여 혈관생성억제 치료를 시행할 수 있는 대상 환자를 선정할 수 있을것으로 기대된다. 제2세부과제에서는 sFLT1 cDNA와 TIMP-2 cDNA를 cloning하여 COS-1 cell에서 transient expression시킨 후 각각 혈관내피세포 성장을 억제함과 MMP 활성을 억제함을 관찰하였다. 이 cDNA들을 제3세부과제에서 수행하는 mouse model의 유전자 치료 연구에 공급하였다. 곤충세포에 발현시켜 정제한 sFLT1(1-4)는 sFLT1와 유사한 기능을 갖는 최소 크기로서 단백질 제제로서 활용될 수 있을 것이다. 제3세부과제에서는 레트로바이러스 벡터시스템을 이용한 인체 유방암 세포주에서의 TIMP-2의 과발현은 암세포의 전이성 뿐 아니라 종양의 성장까지도 효과적으로 억제하였으며，TIMP-2와 sFLT의 동시발현은 누드생쥐 상에서 종양성장의 억제를 더욱 효율적으로 유도하였다. 현재 이미 동물시스템에 이미 형성되어 있는 종양조직을 대상으로 레트로바이러스벡터 시스템을 이용해 치료유전자를 도압한 뒤， tmor regression과 전이의 정도를 관찰하기 위한 실험이 진행 중에 있다.

Abstract ▼

제 1세부과제
We have evaluated the MMPs and TIMP-2 expression in paired normal and cancer tissues. Also we measured 4 angiogenic factors(VEGF, bFGF, angiogenin, PDGF-AB) in the blood of cancer patients and healthy volunteers to screen the proper candidates for gene therapy targeting tumor metastasis a

제 1세부과제
We have evaluated the MMPs and TIMP-2 expression in paired normal and cancer tissues. Also we measured 4 angiogenic factors(VEGF, bFGF, angiogenin, PDGF-AB) in the blood of cancer patients and healthy volunteers to screen the proper candidates for gene therapy targeting tumor metastasis and angiogenesis. MMPs elevated in tumor tissue than paired normal tissue. A parallel increment of normal tissue TIMP-2 level was found, which finally acted as an independent prognostic biological marker. MMPs inhibitor suppressed MMPs expression more in normal tissue than tumor tissue, suggesting the existence of different sensitivity to MMPs inhibitor based on tissue. In patients with more sensitivity to MMPs inhibitor in tumor tissue than normal tissue, better prognosis was found. This type of patient can be a proper candidate for the new trial targeting MMPs. With tumor progression, higher levels of angiogenic factors were found. Moreover, higher angiogenenic factors in blood showed a higher growth stimulatory effect on human umbilical vein endothelial cells(HUVEC) in ex vivo model. A poor prognosis was found in patients with blood angiogenic factors than in patients without any detectable factors. These angiogenic factors in blood and ex vivo HUVEC growth model can be applied in detecting patients for specific anti-angiogenic gene therapy.
제 2세부과제
We have tested whether soluble FLT1(sFLT1) and TIMP-2 would be useful for reagents of gene therapy through inhibition of cancer metastasis. FLT1 is a receptor for VEGF which induces proliferation of vascular endothelial cells and angiogenesis. sFLT1, the extracellular domain of FLT1, acts as an efficient spe다fic antagonist of VEGF. TIMP-2 is a natural inhibitor of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2; 72-kDa gelatinase) which plays a major role in basemembrane degradation. We cloned cDNAs for sFLT-1 and TIMP-2 and were transiently expressed in COS-1 cells. It was confirmed that sFLT1 inhibits proliferation of the HUVEC by [³H]thymidine incorporation assay and that TIMP-2 inhibits matrix metalloproteinases. To test a possiblity of polypeptide drug and determine the minimal size of sFLT1, we generated sFLT1 deletion mutant cDNAs encoding sFLT1(1-2), sFLT1(1-3), and sFLT1 (1-4). The sFLT1 and truncated polypeptides expressed in baculovirus/insect cell system were analyzed for the relative inhibition effects on HUVEC growth. Among these， sFLT1(1-4) showed most efficient inhibition of HUVEC growth. Therefore, sFLT1(1-4) cDNA would be the most efficient gene source for gene therapy and recombinant sFLT1(1-4) polypeptide, as a polypeptide drug, which treats for the diseases requiring new blood vessel formation such as cancer.
제 3 세부과제
In this sturdy, we examined the effect of expression of tissue inhibitor of metalloproteinase-2 (TIMP-2) and sFLT-1 on the growth and dissemination of a highly metastatic human breast cancer cell lines MDA-MB-231 and MDA-MB-435 cell lines by retroviral-mediated gene transfer. Overexpression of TIMP-2 markedly reduced tumor growth and invasiveness. In addition. coexpression of TIMP-2 and sFLT showed dramatic inhibition of the tumor growth on nude mouse. This study demonstrates the potential advantages of transduction of tumor cells with both of the TIMP-2 and the sFLT gene for enhancing antitumoral activity.

목차 Contents

• 표 지 ... 1
• 연구개발 최종보고서 ... 2
• 제 출 문 ... 3
• 요 약 문 ... 4
• 영 문 요 약 문 ... 8
• 영 문 목 차 ... 10
• 국 문 목 차 ... 10
• 총괄과제 제목: 전이억제와 종양혈관생성억제 유전자의 동시발현을 통한 새로운 암치료기술개발 ... 12
• 제 1 장 서론 ... 13
• 제 2 장 국내외 연구개발 현황 ... 16
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 19
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 26
• 제 5 장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ... 29
• 제 6 장 기타 중요변경사항 ... 31
• 제 7 장 참고문헌 ... 32
• 제 1 세부과제명 : 암 환자메서 전이억제 유전자 치료 대상 선정기준에 대한 연구 ... 36
• 제 1 장 서론 ... 37
• 제 2 장 국내·외 연구개발 현황 ... 38
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 40
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 60
• 제 5 장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ... 63
• 제 6 장 기타 중요변경사항 ... 64
• 제 7 장 참고문헌 ... 65
• 제 2 세부과제명: sFLT와 TIMP-2 발현에 의한 혈관생성저해와 기저막 분해저해를 통한 암전이의 억제 ... 70
• 제 1 장 서론 ... 71
• 제 2 장 국내·외 연구개발 현황 ... 72
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 74
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 89
• 제 5 장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ... 92
• 제 6 장 기타 중요변경사항 ... 93
• 제 7 장 참고문헌 ... 94
• 제 3 세부과제: 레트로바이러스 벡터시스템을 이용한 sFLT와 TIMP-2 유전자의 사람 암세포와 내피세포로의 도입과 발현 ... 97
• 제 1 장 서론 ... 98
• 제 2 장 국내·외 연구개발 현황 ... 100
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 101
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 113
• 제 5 장 연구개발결과의 활용성과 및 계획 ... 114
• 제 6 장 기타 중요변경사항 ... 115
• 제 7 장 참고문헌 ... 116
• 최종보고서 요약(초록) ... 118
• 끝페이지 ... 120