초록 ▼

본 연구는 2차 항체 키트 제작을 위한 효과적인 면역방법과 항체 분리-정제 방법을 개발하고 이 항체에 형광물젤, 효소 그리고 biotin등을 부착하여 실험용 및 병원 진단용으로 유용하게 쓰일 수 있는 2차 항체를 개발하기 위하여 시행하였다.
본 연구에서는 염소 및 토끼에서 항-마우스 면역글로불린 2차 항체를 효율적이고 경제적으로 생산하기 위하여 염소 및 토끼의 적혈구를 마우스에 면역시켜 항-적혈구 항체를 유도한 뒤이 마우스 혈청과 염소 혹은 토끼의 적혈구를 반응시켜 적혈구에 마우스 면역글로불린을 도포 하였으며 적혈구-면역글로불

본 연구는 2차 항체 키트 제작을 위한 효과적인 면역방법과 항체 분리-정제 방법을 개발하고 이 항체에 형광물젤, 효소 그리고 biotin등을 부착하여 실험용 및 병원 진단용으로 유용하게 쓰일 수 있는 2차 항체를 개발하기 위하여 시행하였다.
본 연구에서는 염소 및 토끼에서 항-마우스 면역글로불린 2차 항체를 효율적이고 경제적으로 생산하기 위하여 염소 및 토끼의 적혈구를 마우스에 면역시켜 항-적혈구 항체를 유도한 뒤이 마우스 혈청과 염소 혹은 토끼의 적혈구를 반응시켜 적혈구에 마우스 면역글로불린을 도포 하였으며 적혈구-면역글로불린 복합체를 염소와 토끼에 총 5회 주사하여 기존의 시판되는 항체와 비슷한 품질의 항-마우스 연역글로불린 2차 항체를 얻을 수 있었다.
이 중 염소 2차 항체는 친화성컬럼크로마토그래피로 정제하여 유세포분석에서 Jackson사와 Southem Biotechnology Associates사의 2차 항체보다 우수한 항체를 얻을 수 있었으며 FITC와 PE 부착시 모두 우수성을 보였다.
면역조직화학염색에 이용되는 biotin 이 부착된 염소 2차 항체는 친화성컬럼크로마토그래피를 거치지 않고 염소 혈청에서 이온교환칼럼크로마토그래피로 염소 IgG를 분리하여 사용하여도 DAKO사의 염소 2차 항체와 비슷한 염색능과 비특이반응을 보였으며 면역조직화학용 키트의 또 다른 주요 구성물인 horseradish peroxidase가 부착된 streptavidin도 DAKO사의 제품과 비슷하였다.
주로 Westem blotting 에 많이 쓰인 horseradish peroxidase가 부착된 염소 2차 항체는 이온 교환칼럼크로마토그래피로 항체를 사용하였으며 soôium periodate로 peroxidase 부착시 DAKO사의 제품보다 소량의 항원도 감지할 수 있었다.
따라서, 본 연구에서 사용한 적혈구를 이용한 2차 항체 생산 기법은 마우스 면역글로불린의 정제과정 없이 매우 경제적이고 효과적으로 항-마우스 면역글로불린 생산에 쓰일 수 있으며 여기에 친화성컬럼크로마토그래피로 2차 항체를 정제하면 기존의 시판되는 항체보다 우수한 품질의 항체를 얻을 수 있었다. 그러므로, 본 연구에 사용한 면역 기법과 정제 기법 그리고 형광물질, 효소 그리고 biotin 등의 부착법을 사용하여 여러 면역학적 실험 및 병원에서 진단용으로 쓰이는 2차 항체를 경제적이고 효과적으로 대량 생산할 수 있을 것으로 기대된다.

Abstract ▼

We perfonned present project to develop a new effective strategies for mass production of anti-mouse immunoglobulin secondary antibodies that could be used in imrnunologic research field and for clinical purpose
In this work, we initially immunized the mice with goat and/or rabbit RBC to induce a

We perfonned present project to develop a new effective strategies for mass production of anti-mouse immunoglobulin secondary antibodies that could be used in imrnunologic research field and for clinical purpose
In this work, we initially immunized the mice with goat and/or rabbit RBC to induce anti-goat or rabbit RBCs antibodies in mice. After 6 week, the goat and rabbit RBC were incubated with mouse anti-RBC polysera, and coated with mouse IgG antibodies.
The RBC-mouse IgG complex was injected into goat and rabbits five times and high quality anti-mouse IgG sec:ondary antibodies were obtained from those goats and rabbits.
The specificity and sensitivity of goat anti-mouse IgG antibodies was attenuated by affinity purification. The FITC- and PE-conjugated affinity-purified goat antibodies sho\V higher mean fluorescence intensity and resolution power between positive and negative populations than commercial secondary antibodies from Jackson laboratory and Southem Biotechnology Associates in flow cytometric analysis.
For peroxidase and biotin conjugation, goat antibodies purified by ion-exchange chromatography column were used. The biotin conjugated goat antibodies and peroxidase-conjugated streptavidin were usef비as well as those from DAKO company in imrnunohistochemistry. While peroxidase-conjugated goat antibodies could detect antigen more sensitively than those from DAKO when peroxidase was conjugated to the antibodies using sodium pεriodate.
These results show that our immunization strategies, antibody purification methods and conjugation methods are very powerful for production of secondary antibody kits.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구개발사업 최종보고서 요약문 ... 5
• Project Summery ... 6
• 총괄연구개발과제 연구결과 ... 7
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 7
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과 ... 9
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 10
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 11
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획 ... 13
• 6. 첨부서류 ... 14
• 제 1세부연구개발과제 연구결과 ... 15
• 1. 제 1 세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 16
• 2. 제 2세부연구개발과제섹 연구대상 및 방법 ... 16
• 3. 제 1세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 19
• 4. 제 1세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 22
• 5. 제 1세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 25
• 6. 제 1 세부연구개발과제의 활용계확 ... 26
• 7. 참고문헌 ... 26
• 제 2세부연구개발과제 연구결과 ... 27
• 1. 제 2세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 28
• 2. 제 2세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 28
• 3. 제 2세부연구개발과제의 최종 연구개발결과 ... 29
• 4. 제 2세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 35
• 5. 제 2세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 36
• 6. 제 3세부연구개발과제의 활용계획 ... 37
• 7. 참고문헌 ... 37
• 제 3세부연구개발과제 연구결과 ... 38
• 1. 제 3세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 39
• 2. 제 3세부연구개발과제의 연구대상 및 방법 ... 39
• 3. 제 3세부연구개발과제씌 최종 연구개발결과 ... 40
• 4. 제 3세부연구개발과제꾀 연구결과 고찰 및 결론 ... 44
• 5. 제 3세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 45
• 6. 제 3세부연구개발과제왜 활용계획 ... 46
• 7. 참고문헌 ... 46
• 끝페이지 ... 46