초록 ▼

Ⅳ. 연구개발 결과 및 활용에 대한 건의
본 연구를 통하여 개발된 형질전환 마우스들은 CWD 감염실험 시 질병의 발생기간 및 질병의 발생정도를 비교하는데 유용하게 사용될 것이다. 꽃사슴 및 고라니 등 우리나라에서 서식하는 사슴과 동물들의 프리온 단백질 유전자에 존재하는 polymorphism의 의미는 향후 CWD에 감염된 다른 사슴과 동물들과의 유전적 분석을 통해 꽃사슴 및 고라니가 CWD에 감염할 가능성을 연구하는데 중요한 자료가 될 것이다. 또한 본 연구를 통해 개발된 PrPCWD에 특이적인 단클론항체들은 Western b

Ⅳ. 연구개발 결과 및 활용에 대한 건의
본 연구를 통하여 개발된 형질전환 마우스들은 CWD 감염실험 시 질병의 발생기간 및 질병의 발생정도를 비교하는데 유용하게 사용될 것이다. 꽃사슴 및 고라니 등 우리나라에서 서식하는 사슴과 동물들의 프리온 단백질 유전자에 존재하는 polymorphism의 의미는 향후 CWD에 감염된 다른 사슴과 동물들과의 유전적 분석을 통해 꽃사슴 및 고라니가 CWD에 감염할 가능성을 연구하는데 중요한 자료가 될 것이다. 또한 본 연구를 통해 개발된 PrPCWD에 특이적인 단클론항체들은 Western blot, IHC 및 Immuno-PCR 등 CWD 및 BSE 등과 같은 프리온질병의 검출기법에 매우 유용하게 사용될 것이다. 변형프리온 단백질인 PrPCWD를 특이적으로 검출할 수 있는 Immuno-PCR 기법의 개발 또한 CWD 및 기타의 프리온 질병을 신속하고 정확하게 검출할 수 있는 신기술로 개발하는 성과를 거두었다.
본 연구의 최초 목적은 CWD 및 프리온 질병을 연구하는데 반드시 필요한 단클론항체 및 형질전환동물 등을 외국에 의존하지 않고 자체 개발하여 국내연구진의 프리온 질병 연구력을 향상시키는 기반을 확립하는 것이었다. 본 연구를 통하여 이러한 소기의 목적은 달성하였으나 개발된 형질전환 마우스 및 단클론항체를 충분히 검증하는 실험은 연구기간이 허락하지 않아 수행되지 못한 아쉬움이 있다. 따라서 본 연구를 통해 개발된 중요한 연구재료들을 이용한 검증실험이 후속과제를 통해 연속적으로 수행될 수 있는 정책과제가 제공된다면 프리온 연구의 발전에 많은 도움이 될 것으로 사료된다.

Abstract ▼

Chronic wasting disease (CWD) is a kind of prion diseases affecting mainly mule deer (Odocoileus hemionus), white-tailed deer (Odocoileus virginianus) and Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni). Most of the CWD infections were reported in the USA and Canada. However. there were
two cases hap

Chronic wasting disease (CWD) is a kind of prion diseases affecting mainly mule deer (Odocoileus hemionus), white-tailed deer (Odocoileus virginianus) and Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni). Most of the CWD infections were reported in the USA and Canada. However. there were
two cases happened in 2001 and 2004 in South Korea. Although nonhuman primates and cows could be infected by experimental infection, there were no report on CWD infection in sika deer and water deer living in Korea. In this study, two strains of transgenic mice expressing prion protein of the Korean
subspecies of Chinese water deer (Hydropetes inermis argyropus) were generated. One strain of transgenic mice were generated with normal C57BL/6 mice, so they expressed both prion proteins of mouse and water deer. The other strain of transgenic mice only expressed the prion protein of
water deer because they were generated with PrP knouk-out mice. Polymorphisms of the prion protein gene (PRNP) have been detected in several cervid species. In order to confirm the genetic variations,
single-nucleotide polymorphisms (SNP) were determined in the DNA sequences of the PRNP obtained from 33 captive sika deer. A total of three SNPs were found at codons of 100, 136, and 226 in the PRNP of the sika deer. The polymorphic site located at codon 100 has not been previously
reported. The SNPs detected at codons 100 and 226 induced amino acid substitutions. The SNP detected at codon 136 was a silent mutation that does not induce any amino acid change. Two SNPs located at codons 77 and 100 were identified in the PRNP of 34 water deer. Whereas the one SNP located at codon 77 was a silent mutation, the other SNP located at codon 100 induced amino acid change. In addition, a real-time PCR method was developed to detect SNPs in the PRNP of sika deer. Monoclonal antibodies specific for PrP^CWD were generated by immunization of PrP knock-out mice with recombinant elk PrP. Seven clones such as A32-37, B48-57, B48-60, B85-05, B85-08, B85-12, B77-75 were selected. Four clones of them such as B85-05, B85-08, B85-12 및 B77-75 were finally confirmed to specifically react with PrP^CWD by Western blotting. Polyclonal antibody specific for cervid PrP was generated from rabbit immunized with recombinant elk PrP. Immuno-PCR method was developed by using one chicken polyclonal antibody obtained from a chicken immunized with prion peptide, monoclonal antibody 6H4, biotinylated antibody and biotinylated DNA. The immuno-PCR was very sensitive and highly specific for PrP^CWD. This results indicated that the immuno-PCR may be used as an alternative detection method for PrP^CWD. These reagents and animals developed in this study will be useful in studying CWD.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 요 약 문 ... 3
• SUMMARY ... 7
• CONTENTS ... 9
• 목 차 ... 10
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 11
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 15
• 제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 17
• 제 1 절. 사슴의 프리온 단백질을 발현하는 형질전환 마우스의 개발 ... 17
• 제 2 절. 사슴의 프리온 유전자에 존재하는 polymorphism 연구 ... 29
• 제 3 절. PrPCWD에 특이적인 항체 생산 ... 38
• 제 4 절. PrPCWD를 검출하는 Immuno-PCR 기법 개발 ... 49
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 61
• 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 63
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 64
• 제 7 장 참고문헌 ... 65
• 끝페이지 ... 69