초록 ▼

Ⅳ. 연구개발 결과
1. 생육정도
○ 액체배양배지에서 생장이 빠른 균종은 동충하초, 먹물, 느타리버섯이었다.
2. CLA 생성버섯균주
○ CLA생성이 우수한 균주는 신령버섯, 먹물과 느타리버섯균 이었다
○ CLA는 균사체와 배양액에 존재하였다.
○ 생성된 CLA 이성체는 c9,t11 CLA 약 76%, t10,c12 CLA는 약 29%였다.
○ 버섯균주가 CLA를 높게 생성시키는 최적의 조건은 기본배지에 대두를 4% (40 g/ℓ)첨가하고 pH를 5.5로 조절한 후 홍화유 가수분해물 0.4%를

Ⅳ. 연구개발 결과
1. 생육정도
○ 액체배양배지에서 생장이 빠른 균종은 동충하초, 먹물, 느타리버섯이었다.
2. CLA 생성버섯균주
○ CLA생성이 우수한 균주는 신령버섯, 먹물과 느타리버섯균 이었다
○ CLA는 균사체와 배양액에 존재하였다.
○ 생성된 CLA 이성체는 c9,t11 CLA 약 76%, t10,c12 CLA는 약 29%였다.
○ 버섯균주가 CLA를 높게 생성시키는 최적의 조건은 기본배지에 대두를 4% (40 g/ℓ)첨가하고 pH를 5.5로 조절한 후 홍화유 가수분해물 0.4%를 가하고, 1.0 v/v/m의 공기를 주입하면서 25℃에서 8일간 배양하였을 때였다
○ 최적배양조건에서 신령, 먹물, 느타리버섯균주가 생성하는 CLA 농도는 신령, 먹물, 먹물버섯 각각 14, 6.9, 1,8 ㎎/ℓ였다.
3. CLA 분포
○ 신령버섯의 c9,t11 CLA는 균사체내에 대부분 포합되어 있고 일부가 균사체의 표면에 부탁되어 있었다.
○ 느타리버섯의 c9,t11 CLA는 배양여액에 대부분 존재하였다.
○ 균사체내의 축적 CLA를 이용한 분말, 캡슐 및 정제의 경우 신령버섯과 먹물버섯은 균사체를 이용하고, 배양원액을 생물소재로 이용할 경우 느타리버섯이 좋았다.
4. CLA 생성효소 (Linoleate isomerase=Llase)
○ 총단백질 함량은 신령버섯, 먹물버섯, 느타리버섯 균사체에 각각 39.2, 40.7, 35.1 ㎎/㎖ (total vol: 10 ㎖)이 함유되어 있었다.
○ 신령버섯균사체와 먹물버섯균사체의 protein을 column chromatography를 이용하여 F1, F2, F3로 분획하였다. 이중 F1이 각각 38, 30 ㎍ CLA/㎎ protein으로 LIase 활성이 가장 뛰어 났으며, F1분획에서 대략 40 Kd 이하의 protein과 LIase라고 생각되는 21 KD의 protein을 분리하였다.
5. 제품화
○ c9,t11 CLA^®: Crude LIase로 반응하고 저온침전법으로 분리한 c9,t11 CLA를 0.1∼1.0 g 정도 생산할 수 있었다.
○ CLA^® Mushroom mycelia: 액체신령버섯균사체배양물 균사
○ CLA^® Mushroom mycelial extract: 엑체느타리버섯균사체배양물 배양액
농축액으로 Brix 50 (50배 농축액)액으로 고농도 농축한 액상제제로 CLA함량이 3.17% (액상) 함유되어 있다.
○ Crude Linolease Isomerase^®: Crude Llase를 대량으로 collection한 다음 탈염과정을 거쳐 동결건조한 제품의 경우 35 mg CLA/g proein 정도 였다.

Abstract ▼

This study was conducted to produce natural conjugated linoleic acid (CLA) by means of the submerged liquid cultures of mushroom strains in medium containing linoleic acid (LA) or raw agricultural products. In terms of mycelial growth, Dongchunghacho (Paecilomyces japanicus) was the best strains in

This study was conducted to produce natural conjugated linoleic acid (CLA) by means of the submerged liquid cultures of mushroom strains in medium containing linoleic acid (LA) or raw agricultural products. In terms of mycelial growth, Dongchunghacho (Paecilomyces japanicus) was the best strains in the given basal medium. However, CLA could not be produced by this strain. CLA production were the best by Neutari (Pleurotus ostreatus) followed by Mugmul (Coprinus comatus), Synryeong (Agaricus blazei), Neutari (Pleurotus astreatus), Sanghwang (Phellinus linteus), Pyogyo (Lentinus edodes), and Yeongji (Ganoderma lucidum). Of tested mushroom strains, Synryeong (Agaricus blazei), Mugmul (Coprinus comatus), and Neutari (Pleurotus ostreatus) were selected for the production of CLA in the medium developed in the HK Biotech., Co. LTD. Because small amount of LA, which is substrate for CLA synthesis is present in the basal medium, the addition of an adequate amount of LA was needed to produce maximiun amount of CLA that can be produced by each mushroom strains.
Following studies were focussed on the culture conditions for the growth of mushroom mycelia and the production of CLA. Each substrate containing LA hydrolyzed form sunflower seed oil, safflower seed oil, and soybean oil (5, 10, 15 g/250 ㎖ culture medium) were tested for the production of CLA. An adequate amount of oil substrate was 10 g/250 ㎖ with all three kinds of oil substrates. Maximum amount of CLA 0.71%, dry base) in this study was obtained from the combination of safflower seed oil and Neutari (Pleurotus ostreatus). CLA isomers produced were c9,t11 CLA and t10,c12 with higher amount of c9,t11 CLA. Distribution of these isomers in the part of mushroom mycelia were investigated, and c9,t11 CLA was mainly located in the inside of mushroom mycelia while only small amount was detected on the surface of mushroom mycelia and liquid culture medium of Synryeong (Agaricus blazei). However, high amount of c9,t11 CLA was found in the supernatant from mushroom mycelial culture of Neutari (Pleurotus ostreatus). This suggests that Mugmul (Coprinus comatus) and Synryeong (Agaricus blazei) shoud be used as culture spawn when we need to use mushroom mycelia as bioingredient, but Neutari (Pleurotus ostreatus) shoud be used as culture spawn when we need to use liquid extract as bioingredient. Culture condition for the CLA production was similar trend with the condition (pH, temperature, airation) of the growth of mushroom mycelia.
This may be because production of LA isomerase (Llase) from mycelial culture affect on the CLA amount produced. Adequate incubation time was 8 days for the production of CLA for all three strains. Enzyme for the production of CLA was isolated from the mycelial culture and partly characterized by means of SDS-PAGE, anion exchange column chromatography, size exclusion chromatography, and then LIase activity was examined. A typical protein that has molecular weight ca. 21 Kd found from the mushroom mycelia of Synryeong (Agaricus blazei) and Mugmul (Coprinus comatus), while this protein band was not shown on the SDS-PAGE of mycelia from strains which CLA was not produced from. The fraction (fraction no 12) from gel filteration of the culture from Synryeong (Agaricus blazei) and Mugmul (Coprinus comatus) showed specific activities 51㎍ CLA/㎎ protein and 41 ㎍ CLA/㎎ protein, respectively. Based on the research data, HK Biotech developed two products. They are liquid extract packed in pouch made from the culture of Neutari (Pleurotus ostreatus) and tablet made from mycelial powder of Synryeong (Agaricus blazei).

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 8
• CONTENTS ... 10
• 목차 ... 12
• 제1장 연구개발의 개요 ... 15
• 제1절 연구개발 목표 ... 15
• 1. 최종목표 ... 15
• 2. 단계별 목표 ... 15
• 3. 주요개발목표와 내용 ... 16
• 제2절 연구개발 필요성 ... 16
• 1. 기술적 측면 ... 16
• 2. 경제·산업적 측면 ... 18
• 3. 사회·문화적 측면 ... 18
• 제3절 연구개발 범위 ... 19
• 1. 연구개발 목표와 내용 ... 19
• 제4절 연구개발 추진체계 ... 20
• 1. 추진체계도 ... 20
• 2. 추진체계 ... 21
• 제2장 국내·외 기술개발 현황 ... 22
• 제1절 CLA 생리활성 및 합성 ... 22
• 제2절 버섯균액체배양 및 이의 이용 ... 24
• 제3절 CLA 연구에 관한 전망 ... 26
• 제3장 연구개발 수행내용 및 결과 ... 28
• 제1절 연구개발 수행내용 ... 28
• 1. 버섯균사체 유래 CLA 시료 조제 및 CLA 분석 ... 28
• 2. CLA 생성 버섯 균주의 선발 ... 28
• 3. CLA 생성 배양조건 구명 ... 31
• 4. CLA 생성 효소의 분리 정제 ... 32
• 5. CLA 대량생산 ... 34
• 6. CLA 버섯균사체 및 배양액의 제품화 ... 34
• 제2절 연구개발 결과 ... 35
• 1. CLA 분석 ... 35
• 2. CLA 생성 버섯균주 선발 ... 35
• 3. CLA 생성 배양조건 구명 ... 42
• 4. CLA 분리 방법 확립 ... 59
• 5. CLA 생성 효소의 분리 정제 ... 60
• 6. CLA 생산 ... 68
• 7. 제품화 ... 70
• 제4장 목표달성도 및 관련분야 기여도 ... 75
• 제1절 목표달성도 ... 75
• 제2절 관련분야 기여도 ... 79
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 81
• 제1절 연구개발 효과 ... 81
• 1. 기술적 측면 ... 81
• 2. 경제·산업적 측면 ... 81
• 제2절 연구개발 활용방안효과 ... 83
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술 정보 ... 84
• 제1절 CLA의 산업화 ... 84
• 제2절 CLA 시장성 ... 86
• 제7장 참고문헌 ... 91
• 끝페이지 ... 94