[보고서]할랄인증을 위한 육류구분 유전자 분석 kit 개발

할랄인증을 위한 육류구분 유전자 분석 kit 개발 원문보기

보고서 정보
주관연구기관	동국대학교 산학협력단 DongGuk University
보고서유형	최종보고서
발행국가	대한민국
언어	한국어
발행년월	2013-06
과제시작연도	2012
주관부처	중소기업청 Small and Medium Business Administration
과제관리전문기관	한국산학연협회 Korea Association of University, Research Institute and Industry
등록번호	TRKO201400026965
과제고유번호	1425075082
사업명	산학연 공동기술개발 지역사업
DB 구축일자	2014-11-17

초록 ▼

2. 개발내용 및 결과
육종 별로 미토콘드리아 유전체 중 정확도가 높은 검출 부위를 선별 하여 돼지는 NDH5, cytochromb유전자, 소는 D-loop, 양은 D-loop, D-loop/cytochrom b ,닭에 경우 cox2, cox3 유전자를 target으로 하는 primer set와 TaqMan probe를 제작하였다. 이를 이용한 PCR, mulltiplex PCR 및 real-time PCR을 통해 돼지, 소, 양, 닭 4가지 육류를 구분 검출하는 방법을 개발하였으며 그 결과 국내 특허 출원을 예정하고 있고 참

목차 Contents

최종보고서 제출서 ... 1
개 발 결 과 의 견 서 ... 2
최 종 보 고 요 약 서 ... 3
목 차 ... 5
제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 7
제 1 절 연구개발과제의 필요성 및 현황 ... 7
1. 기술개발 필요성 ... 7
2. 국내외 기술개발 현황 및 향후 전망 ... 10
제 2 절 국내·외 관련 기술현황 및 시장현황 ... 12
제 3 절 연구개발 과제의 범위 ... 14
1. 기관별 업무분장 ... 14
2. conventional PCR 시스템의 구성 ... 14
3. Multiplex PCR 시스템의 구성 ... 16
제 2 장 과제개발 내용 및 방법 ... 18
제 1 절 DNA 추출, PCR primer 및 반응조건 확립 ... 18
1. PCR 반응위한 target gene 및 primer탐색 ... 18
2. DNA extraction 방법 및 최적화 조건 ... 19
3. PCR 반응조건의 확립 ... 19
제 2 절 real-time PCR 방법 개발 및 최적화 ... 20
1. 돼지, 소, 닭, 양의 특이적 real-time PCR 방법 개발 및 최적화 ... 20
제 3 장 사업성과 ... 21
제 1 절 기술적 성과Ⅰ : 최적화 PCR을 이용한 육류 및 할랄 식품 검출 ... 21
1. 돼지, 소, 양, 닭 각 primer에 대한 PCR반응 결과 ... 21
2. 돼지의 아종에 대한 돼지 특이적 PCR 검출 결과 ... 32
3. 야채 10종 및 미생물 10종에 대한 돼지 특이적PCR 수행결과 ... 36
4. 돼지의 specific 확인을 위한 PCR반응 결과 정리 ... 38
5. 돼지, 소, 양, 닭 primer의 PCR 검출한계 ... 41
6. 할랄식품 및 일반식품에 PCR 시스템 적용 및 확인 ... 42
7. 구성된 PCR 시스템을 이용한 돼지, 소, 양, 닭 multiplex PCR ... 66
8. 할랄 식품 및 일반식품에 multiplex PCR 시스템 적용 ... 67
제 2 절 기술적 성과Ⅱ : 최적화 real-time PCR을 이용한 육류 및 할랄 식품 검출 ... 75
1. 돼지의 real – time PCR 결과 ... 75
2. 소의 real – time PCR 결과 ... 78
3. 양의 real – time PCR 결과 ... 81
4. 닭의 real – time PCR 결과 ... 84
5. 할랄 식품 및 일반 식품에서의 real-time PCR 시스템 적용 및 확인 ... 88
제 3 절 경제적 성과 : 상업화를 위한 kit 개발 ... 100
1. 총 4종의 conventional PCR kit의 개발 ... 100
2. Multiplex PCR kit의 개발 ... 101
3. 총 4종의 real-time PCR kit의 개발 ... 101
제 4 장 목표 달성도 성과활용 계획 ... 102
제 1 절 연구개발 목표의 달성도 ... 102
1. 특이적 프라이머, 프로브 세트의 개발 ... 102
2. 할랄 식품 및 일반 가공 식품에 적용 및 실용화 ... 102
제 2 절 성과활용 계획 ... 103
1. 개발기술의 상용화 ... 103
2. 개발기술의 보급계획 ... 103
제 3 절 추가연구 및 타 연구에 활용 계획 ... 103
제 5 장 참고문헌 ... 104
끝페이지 ... 105

표/그림 (126)

표 세계 식품시장(총 3조 6100억 달러)과 할랄식품 시장의 규모
표 할랄(Halal)의 인증절차
표 PCR을 이용한 돼지 성분의 분석
표 PCR assay
표 TaqMan probe를 사용하는 real-time PCR assay
표 U.S. Food Safety Testing Market Value, through 2009
표 국내외 시장규모
표 기관별 업무분장
표 Oligonucleotide sequence of primers used in this study.
표 Oligonucleotide sequence of primers and probe used in this study. 　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the sus NDH5 primer.
표 PCR products using the sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Bos D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Bos D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Ovis D-loop primer.
표 PCR products using the Ovis D-loop primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Ovis D-loop primer.
표 PCR products using the Ovis D-loop primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Gallus Cox3 primer.
표 PCR products using the Gallus Cox3 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Gallus Cox3 primer.
표 PCR products using the Gallus Cox3 primer.
표 esult from PCR analysis of Pork. Pork and other meet species. 　　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 Result from PCR analysis of Pig. ,Pig of subspecies.
표 Result from PCR analysis of Pork., Pork and other bacteria. 　　
표 Result from PCR analysis of Pork., Pork and other vesitable species.
표 The result of sensitivity of PCR assays from Pig for specific primer
표 The result of sensitivity of PCR assays from Sheep for specific primer
표 The result of sensitivity of PCR assays from Chicken for specific primer
표 Halal Food list.
표 Processed food list.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer.　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Sus NDH5 primer.
표 PCR products using the Sus NDH5 primer.　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Bos D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.　　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Bos D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.　　　　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Bos D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Bos D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Bos D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Ovis D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Ovis D-loop primer.
표 PCR products using the Bos D-loop primer.　
표 Detection of sheep from processed food by PCR using Ovis D-loop primer.
표 PCR products using the Ovis D-loop primer.　　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Ovis D-loop primer.
표 PCR products using the Ovis D-loop primer.　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Ovis D-loop primer.
표 PCR products using the Ovis D-loop primer.　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Gallus cox3 primer.
표 PCR products using the Gallus cox3 primer.　　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Gallus cox3 primer.
표 PCR products using the Gallus cox3 primer.　　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Gallus cox3 primer.
표 PCR products using the Gallus cox3 primer.　　
표 Agarose gel electrophoresis of PCR products using the Gallus cox3 primer.
표 PCR products using the Gallus cox3 primer.　
표 The multiplex PCR result from preocessed food raw materials using primers.
표 The conventional PCR result from halal food raw materials using primers.
표 Specificity of multiplex PCR assays of specific primer mixtures.
표 Specificity of multiplex PCR assays of specific primer mixtures.
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from processed food by Multiplex PCR using Sus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from processed food by Multiplex PCR using Sus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from processed food by Multiplex PCR using Sus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from processed food by Multiplex PCR using Sus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.　
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from processed food by Multiplex PCR using Sus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from Halal food by Multiplex PCR using Sus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from Halal food by Multiplex PCR using Sus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.　
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from Halal by Multiplex PCR usingSus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.
표 Detection of pig, cow, sheep and chicken from Halal food by Multiplex PCR using Sus NDH5, Bos D-loop, Ovis D-lopp and Gallus cox3 primer.　
표 The multiplex PCR result from preocessed food raw materials using primers.
표 The multiplex PCR result from halal food raw materials using primers.
표 Detection accuracy of PCR primer set
표 Detection of pig using real-time PCR system.
표 Results from real-time polymerase chain reaction (Multiplex real-time PCR) analysis of Non-target meats.
표 Sensitivity test of beef primer with 10-fold serial dilutions.
표 Detection of Cow using real-time PCR system.
표 Results from real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) analysis of Non-target meats.
표 Sensitivity test of beef primer with 10-fold serial dilutions.
표 Detection of sheep using real-time PCR system.
표 Results from real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) analysis of Non-target meats.
표 Sensitivity test of sheep primer with 10-fold serial dilutions.
표 Detection of chicken using real-time PCR system.
표 Results from real-time polymerase chain reaction (real-time PCR) analysis of Non-target meats.
표 Sensitivity test of chicken primer with 10-fold serial dilutions.
표 Halal Food list.
표 Processed food list.
표 Detection of pig from halal food by real-time PCR using Sus cytochrom B primer
표 Detection of pig from halal and processed food by real-time PCR using Sus cytochrom B primer.real-timePCR real-timePCR
표 Detection of cow from halal foods by real-time PCR using D-loop primer.
표 Detection of cow from processed food by real-time PCR using D-loop primer.
표 Detection of cow from halal and processed food by real-time PCR using D-loop primer.
표 Detection of sheep from halal foods by real-time PCR using D-loop primer. 5-
표 Detection of sheep from processed food by real-time PCR using D-loop primer.
표 Detection of sheep from halal and processed food by real-time PCR using D-loop primer.
표 Detection of chicken from halal food by real-time PCR using cox2 primer.
표 Detection of chicken from processed food by real-time PCR using cox2 primer.
표 Detection of chicken from halal and processed food by real-time PCR using cox2 primer.
표 The real-time PCR result from halal food raw materials using primers.
표 The real-time PCR result from processed food raw materials using primers.
표 Detection accuracy of real-time PCR primer set

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