초록 ▼

본 연구의 큰 목표는 현재 우리 사회가 직면하고 있는 노령 인구의 증가와 다양한 만성 질환의 발병 증가에 따라 증가하는 구강 질환을 예방 또는 조기 발견을 할 수 있는 기반 기술을 마련하는데 있다. 이를 위하여 구강 질환의 가장 중요한 인자 중 하나인 구강내 세균총을 다양한 방법으로 분석하여 임상에서 이용 할 수 있도록 하는데 연구의 목적이 있다.
연구를 수행한 결과 총 40여종 이상의 구강내 세균을 확보하였고 각 세균의 배양 조건을 확립하였으며 genomic DNA를 분리하여 DIG probe를 제작하는데 성공하였다. 이러한

본 연구의 큰 목표는 현재 우리 사회가 직면하고 있는 노령 인구의 증가와 다양한 만성 질환의 발병 증가에 따라 증가하는 구강 질환을 예방 또는 조기 발견을 할 수 있는 기반 기술을 마련하는데 있다. 이를 위하여 구강 질환의 가장 중요한 인자 중 하나인 구강내 세균총을 다양한 방법으로 분석하여 임상에서 이용 할 수 있도록 하는데 연구의 목적이 있다.
연구를 수행한 결과 총 40여종 이상의 구강내 세균을 확보하였고 각 세균의 배양 조건을 확립하였으며 genomic DNA를 분리하여 DIG probe를 제작하는데 성공하였다. 이러한 노하우는 추후 더 다양한 구강 미생물에 대한 probe제작을 가능하게 할 것으로 기대된다. 또한 확보한 각 구강 세균을 혼합 배양함으로써 추후 구강 내 세균의 상호작용을 연구하는데에도 사용할 수 있을 것으로 기대된다.
DNA-DNA checkerboard법을 이요한 구강내 세균총 분석은 시료를 충분한 수 이상으로 준비하여 실험을 시행하면 매우 유리한 반면, 몇 가지 균에 대하여 소수의 시료를 대상으로 사용하기에는 번거러운 점이 있다. 이에 구강내 세균 특이 primer를 사용한 구강내 세균 분석도 함께 진행하였다. 구강내 세균총의 분석은 타액, 플라그, paper point, 환자 조직 등 다양한 방법으로 획득된 시료를 대상으로 시행할 수 있었다. 임상 시료는 치주과, 구강 내과, 구강 외과, 혈액 종양 등 다양한 과에서 제공되었다. 특히 경험이 쌓이면서 어떻한 complex를 어떻게 분석하는 것이 연구의 효율성을 높일 수 있을 것인지를 알게되어 향후 보다 활발한 연구가 보다 넓게 진행 될 것으로 기대된다.
DNA-DNA checherboard나 PCR method는 이미 알고 있는 세균에 대한 분석은 가능하지만 전체 세균총을 분석하는데에는 한계가 있다. 16S rRNA 염기 서열 분석은 이러한 제한점을 극복할 수 있는 방법으로 비교적 고가의 실험에 해당한다. 본 연구에서는 Roche의 454 시스템을 사용하여 분석을 진행하였다. 구강내 세균총은 개인별, 질환별 차이가 많기 때문에 다수의 시료를 대상으로 비교하기 보다는 소수의 환자를 대상으로 급격하게 변하는 구강내 세균총을 관찰할 수 있는 경우를 선택하여 분석을 진행하였다. 시료는 구강암 환자로 타액선을 포함하여 두경부에 방사선 치료를 받는 동안 얻어 분석을 진행하였다. 분석 결과 방사선 조사량이 증가함에따라 구강내 세균총의 species 수는 감소하였고 red complex에 해당하는 세균의 증가가 특징적으로 발견되었다. 이 후 보다 다양한 진환에 대해서도 유사한 연구를 진행하여 좋은 결과를 얻을 수 있을 것으로 기대된다.
마지막으로, 구강내 세균총의 구성은 개인마다 독특한 분포를 보이는 반면, 다양한 질환에 따라 일부 동일한 세균이 발견되고 질환의 발병과 깊은 관계가 있는 경우도 있다. 특히 일부 구강내 세균의 경우 염증을 보다 강하게 유발하여 질병을 유도하는 경우도 있다. 이러한 염증 반응은 타액내 염증성 사이토카인을 통하여 확인할 수 있기에 본 연구에서는 타액내 염증성 사이토카인인 IL-1beta와 IL-8의 농도에 따른 구강내 세균총의 차이를 분석하였다. 구강내 큰 염증이 없는 건강한 사람의 경우라도 염증성 사이토카인의 농도에 따라 서로 상이한 구강내 세균의 분포를 확인 할 수 있었다. 이러한 결과는 추후 타액내 여러 가지 마커와 구강내 세균총의 상호 관계를 연구할 수 있는 중요한 자료가 될 것으로 기대되며 보다 심도 깊은 연구가 진행되어야 할 것으로 생각된다.