초록 ▼

결과 1. 동정된 10G6(약 52 kBp, 46개 ORFs), 25G1(약 41.5 kbp, 36개 ORFs) DNA 서열 중에서 바이오필름 형성에 직접적으로 관여하는 유전자 탐색
1) 선별된 바이오필름 형성 균주의 장내 미생물 유래 유전자 분석:
10G6은 Bacteroide sp. D2 와 25G1의 경우 Bacteroides uniformis와 유사성이 높은 것으로 확인됨.
2) Transposon mutant에서 바이오필름 형성 감소 돌연변이주의 선별:
Transposon mutant library로부

결과 1. 동정된 10G6(약 52 kBp, 46개 ORFs), 25G1(약 41.5 kbp, 36개 ORFs) DNA 서열 중에서 바이오필름 형성에 직접적으로 관여하는 유전자 탐색
1) 선별된 바이오필름 형성 균주의 장내 미생물 유래 유전자 분석:
10G6은 Bacteroide sp. D2 와 25G1의 경우 Bacteroides uniformis와 유사성이 높은 것으로 확인됨.
2) Transposon mutant에서 바이오필름 형성 감소 돌연변이주의 선별:
Transposon mutant library로부터 바이오필름 형성 능력이 감소된 돌연변이주를 선별하였음.
3) 바이오필름 형성 관련 유전자의 표현형 회복 능력 검토:
복귀주들의 바이오필름 형성 능력을 검토한 결과 10a (10G6의 ORF20-22)와 25b (25G1의 ORF13)가 삽입된 DH10B 균주는 바이오필름 형성 능력이 회복된 것으로 나타났음.
4) 바이오필름 형성 관련 유전자의 분석 및 동정:
10a의 경우 lysozyme domain과 peptidoglycan(PG)-binding domain의 두 개의 domain을 가지고 있는 것으로 확인됨. 25b에 존재하는 유전자는 각각 transmembrane, shikimate dehydrogenase와 M13 peptidase domain인 것으로 확인됨.

결과 2. 바이오필름을 잘 형성하는 것으로 판단된 10G6과 25G1 클론과 세부목표 1에서 제작될 바이오필름 관련 유전자 복귀주의 in vivo 특성 검토
5) 바이오필름 형성 균주의 장 세포 독성 및 세포 부착능 검토
10a와 25b에 존재하는 유전자의 세포 독성을 확인한 결과 HT29 세포에 대한 독성을 없는 것으로 확인되었으며 HT29세포에 대한 부착능력이 각각 약 17배와 4배 증가하는 것으로 확인되었음.
6) 바이오필름 형성 균주의 마우스 정착 능력 확인
10a와 25b 두 균주 모두 control에 비해 각각 약 6.6배와 28배로의 증가된 마우스 장내 정착 능력을 나타내었으며 또한 25b의 경우 10a 보다 높은 정착 능력을 가지고 있음을 확인하였음.

결과 3. 최종 선별된 유전자가 정상 균총의 효과적인 장 정착에 미치는 기능 확인
7) In vivo 시스템에서 선별 유전자의 분포
마우스 장내에서 10a와 25b의 유전자 발현양을 확인한 결과 E. coli의 16S rRNA의 약 24%와 31% 정도 존재하고 있음을 확인함.
8) 10a와 25b 유전자가 장내 병원균의 감염 특성에 미치는 영향
동정된 신규 유전자가 장내 병원성 세균의 감염 능력 향상에 영향을 줄 수 있는지를 확인한 결과 그림 4와 같이 10a의 경우 콜레라균의 장내 초기 정착 능력이 향상되며 마우스의 생존율을 유의적으로 감소시키는 것으로 확인함. 이는 신규 유전자로 획득이 콜레라균의 장내 경쟁력을 향상시킴을 의미함.

목차 Contents

• 일반연구자지원사업 최종(결과)보고서 ... 1
• 목 차 ... 2
• I. 연구결과 요약문 ... 3
• II. 연구내용 및 결과 ... 4
• 1. 연구과제의 개요 ... 4
• 2. 연구수행 내용 및 결과 ... 5
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 7
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 7
• III. 연구성과 ... 8
• 끝페이지 ... 10