보고서 정보
주관연구기관 |
단국대학교 DanKook University |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2015-02 |
과제시작연도 |
2014 |
주관부처 |
농촌진흥청 Rural Development Administration(RDA) |
등록번호 |
TRKO201500010712 |
과제고유번호 |
1395035655 |
사업명 |
차세대바이오그린21 |
DB 구축일자 |
2015-07-11
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201500010712 |
초록
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Ⅳ. 연구개발결과
∘초과 추출물의 지표물질 설정 및 유효성분 분리 초과 추출물로부터 지표성분을 trans-nerolidol로 설정, (1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol 등의 유효성분을 포함하여 총 24종의 화합물을 분리정제 하였다.
∘표준화된 최적 공정 확립
초과 용매별 추출을 실시하고, 각 추출물별 효능을 검증하여 최적 수율 및 효능을 검토하고 초과 추출물 제조의 최적 공정을 확립하였다.
∘대량생산 공정을 통한 Pilot 추출물 확보
Ⅳ. 연구개발결과
∘초과 추출물의 지표물질 설정 및 유효성분 분리 초과 추출물로부터 지표성분을 trans-nerolidol로 설정, (1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol 등의 유효성분을 포함하여 총 24종의 화합물을 분리정제 하였다.
∘표준화된 최적 공정 확립
초과 용매별 추출을 실시하고, 각 추출물별 효능을 검증하여 최적 수율 및 효능을 검토하고 초과 추출물 제조의 최적 공정을 확립하였다.
∘대량생산 공정을 통한 Pilot 추출물 확보
표준화된 최적 공정법을 이용하여 초과의 대량생산 공정을 실시하였고 pilot 추출물을 확보하였다.
∘최적 추출물속 유효성분 분리 및 분석 완료
최적 추출물로부터 지표 및 유효성분을 포함하여 총 24종의 화합물을 분리정제 하였으며 HPLC를 이용하여 최적 분석 조건을 확립 하였다. 유효성분 및 지표물질들의 HPLC 등 분석기기를 이용한 최적 분리 및 분석 조건을 하였다.
∘원료 규격 표준화 및 원료 validation
HPLC를 이용하여 지표성분의 최적 분석 조건을 확립하고 원료 및 지표성분에 대한 분석법 validation을 통해서 원료 규격 표준화를 실시하였다.
∘안정성 평가
시제품에 사용될 제형의 물리 화학적 장기보존 평가 진행하였다.
∘원료표준화 자료 지속적인 보완
원료 표준화에 필요한 추가 자료 보완 및 자료에 대한 수정을 실시하였다.
∘초과 추추물 및 유효물질의 항염 활성
초과 추출물 및 유효물질인 (1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol를 lipopolysaccahride (LPS)에 의해 유도된 RAW 264.7 세포에 처리하여 NO 분비 억제 효과를 관찰하였으며, MTT 결과로부터 뚜렷한 세포독성은 나타나지 않았다.
∘초과 추출물 및 유효물질의 염증관련 인자 발현수준 분석
질려자 추출물 및 유효물질인 (1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol를 처리하여 염증관련 유전자인 IL-6, IL-10, TNF-α 의 발현이 농도 의존적으로 감소하는 것이 관찰되었다.
∘COX-2 발현수준 분석.
초과 추출물 및 유효물질인 (1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol를 처리하여 COX-2 유전자 발현 수준을 RT-PCR을 통해, 단백질 발현수준을 western blot을 통해 확인한 결과, 농도 의존적으로 그 발현양이 감소하는 것을 관찰하였다.
∘PGE2 발현수준 분석.
초과 추출물 및 유효물질인 (1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol를 처리하여 PGE2 단백질 발현수준을 ELISA로 확인한 결과, 농도 의존적으로 그 발현양이 감소하는 것을 관찰하였다.
∘관절염 동물모델에서의 골소주 분석
골소주 분석결과 초과 추출물이 골관절염의 보호 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었다. 초과 추출물 투여군에서 bone이 차지하는 비율을 의미하는 BV/TV 항목과, 해면골의 두께를 의미하는 ‘Tb/Th' 항목에서 높은 수치를 보였다. 또한 골의 표면적을 의미하는 ‘Tb.Sp’ 항목에서 낮은 수치를 보였다.
Abstract
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Ⅳ. Results
∘Determination of marker compounds and isolation of bio-active components from Amomi Taso-ko Frutus. extract
Determination of marker compounds (trans-nerolidol) and isolation of 24 compounds including bio-active components ((1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol)
Ⅳ. Results
∘Determination of marker compounds and isolation of bio-active components from Amomi Taso-ko Frutus. extract
Determination of marker compounds (trans-nerolidol) and isolation of 24 compounds including bio-active components ((1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol).
∘Establishment of standardized optimal extraction process
Establishment of standardized optimal extraction process with biological activity of various solvent extracts
∘Pilot scale extraction with mass-up process
Pilot scale extraction with mass-up process using standardized optimal extraction process
∘Isolation and analysis of bio-active components from optimal extracts
Isolation of 24 compounds including marker and bio-active components. Establishment of optimization analytical condition using HPLC for marker and bio-active components.
∘Standardizing of specifications for raw materials and validation of raw materials
Establishment of optimization analytical condition using HPLC and standardizing of specifications for raw materials according to HPLC method validation for raw materials and marker compounds.
∘Stability assessment of formulations
Physicochemical long-term storage test of food forms and raw materials
∘Data supplementation of standardizing of raw materials
Data supplementation and revision of standardizing of raw materials
∘The anti-inflammatory activities of EAT(Ethanol extract of Amomi Taso-ko Frutus.) and compounds.
EAT and (1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol prohibited NO production in LPS-stimulated RAW 264.7 cells without affecting its cell viability.
∘The effects of EAT and compounds on the expression of inflammatory cytokines.
EAT and (1ζ,2ζ,4ζ)-ρ-menth-5-ene-1,2-diol, 2,8-decadiene-1,10-diol suppressed the expression of LPS-induced inflammatory cytokines such as interleukin-6, interleukin-10, and tumor necrosis factor-α in LPS-stimulated RAW 264.7 cells.
∘The effects of EAT and compounds on inhibition of COX-2 expression.
EAT and compounds treatment resulted in the dose-dependent suppression COX-2 mRNA expression by RT-PCR and COX-2 protein expression by Western blot.
∘The effects of EAT and compounds on inhibition of PGE2 expression.
EAT treatment resulted in the dose-dependent suppression PGE2 protein expression by ELISA assay.
∘Morphometric parameters of subcondral bone in the MIA-induced model.
Morphometric parameters analysis showed protective effects of EAT on trabecular bone. EAT tended to increase in trabecular thickness(Tb.Th) and trabecular bone volume fraction(BV/TV). Treatment with EAT significantly decreased the level of trabecular spacing(Tb.Sp).
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