초록 ▼

Ⅳ. 연구개발결과
∘ 질려자 추출물의 지표물질 설정 및 유효성분 분리
질려자 추출물로부터 지표성분을 quercetin-3-gentiobioside로 설정하고 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D 등의 유효성분을 포함하여 총 23종의 화합물을 분리정제 하였음

∘ 표준화된 최적 공정 확립
질려자 용매별 추출을 실시하고, 각 추출물별 효능을 검증하여 최적 수율 및 효능을 검토하고 질려자 추출물 제조의 최적 공정을 확립하였음.

∘ 대량생산 공정을 통한 Pi

Ⅳ. 연구개발결과
∘ 질려자 추출물의 지표물질 설정 및 유효성분 분리
질려자 추출물로부터 지표성분을 quercetin-3-gentiobioside로 설정하고 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D 등의 유효성분을 포함하여 총 23종의 화합물을 분리정제 하였음

∘ 표준화된 최적 공정 확립
질려자 용매별 추출을 실시하고, 각 추출물별 효능을 검증하여 최적 수율 및 효능을 검토하고 질려자 추출물 제조의 최적 공정을 확립하였음.

∘ 대량생산 공정을 통한 Pilot 추출물 확보
표준화된 최적 공정법을 이용하여 질려자의 대량생산 공정을 실시하였고 pilot 추출물을 확보하였음.

∘ 최적 추출물속 유효성분 분리 및 분석 완료
최적 추출물로부터 지표 및 유효성분을 포함하여 총 23종의 화합물을 분리정제 하였으며 HPLC를 이용하여 최적 분석 조건을 확립 하였다. 유효성분 및 지표물질들의 HPLC 등 분석기기를 이용한 최적 분리 및 분석 조건을 확립함.

∘ 원료 규격 표준화 및 원료 validation
HPLC를 이용하여 지표성분의 최적 분석 조건을 확립하고 원료 및 지표성분에 대한 분석법 validation을 통해서 원료 규격 표준화를 실시하였음.

∘ 안정성 평가
시제품에 사용될 제형의 물리 화학적 장기보존 평가 진행

∘ 원료표준화 자료 지속적인 보완
원료 표준화에 필요한 추가 자료 보완 및 자료에 대한 수정을 실시하였음.

∘ 질려자 추추물 및 유효물질의 항염증 활성
질려자 추출물 및 유효물질인 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D를 lipopolysaccahride (LPS)에 의해 유도된 RAW 264.7 세포주에 처리하여 NO 분비 억제 효과를 관찰하였으며, MTT 결과로부터 뚜렷한 세포독성은 나타나지 않음.

∘ 질려자 추출물 및 유효물질의 염증관련 인자 발현수준 분석
질려자 추출물 및 유효물질인 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D를 처리하여 염증관련 유전자인 IL-6, IL-10, TNF-α 의 발현이 농도 의존적으로 감소하는 것이 관찰되었음.

∘ COX-2 발현수준 분석
질려자 추출물 및 유효물질인 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D를 처리하여 COX-2 유전자 발현 수준을 RT-PCR을 통해, 단백질 발현수준을 western blot을 통해 확인한 결과, 농도 의존적으로 그 발현양이 감소하는 것을 관찰함.

∘ PGE₂ 발현수준 분석
질려자 추출물 및 유효물질인 N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, tribulusamide D를 처리하여 PGE₂ 단백질 발현수준을 ELISA로 확인한 결과, 농도 의존적으로 그 발현양이 감소하는 것을 관찰함.

∘ 관절염 동물모델에서의 골소주 분석
골소주 분석결과 초과 추출물이 골관절염의 보호 효과를 갖는 것을 확인할 수 있었음. 초과 추출물 투여군에서 bone이 차지하는 비율을 의미하는 BV/TV 항목과, 해면골의 두께를 의미하는 ‘Tb/Th' 항목에서 높은 수치를 보였음. 또한 골의 표면적을 의미하는 ‘Tb.Sp’ 항목에서 낮은 수치를 보였음.

Abstract ▼

Ⅳ. The results of Research and Development
∘ Determination of marker compounds and isolation of bioactive components from T. terrestris extract.

∘ Determination of marker compounds (quercetin-3-gentiobioside) and isolation of 23 compounds including bioactive components (N-trans-ρ-caffeoyl

Ⅳ. The results of Research and Development
∘ Determination of marker compounds and isolation of bioactive components from T. terrestris extract.

∘ Determination of marker compounds (quercetin-3-gentiobioside) and isolation of 23 compounds including bioactive components (N-trans-ρ-caffeoyl tyramine, Tribulusamide D)

∘ Establishment of standardized optimal extraction process
Establishment of standardized optimal extraction process with biological activity of various solvent extracts.

∘ Pilot scale extraction with mass-up process
Pilot scale extraction with mass-up process using standardized optimal extraction process.

∘ Isolation and analysis of bioactive components from optimal extracts
Isolation of 23 compounds including marker and bioactive components. Establishment of optimization analytical condition using HPLC for marker and bioactive components.

∘ Standardizing of specifications for raw materials and validation of raw materials
Establishment of optimization analytical condition using HPLC and standardizing of specifications for raw materials according to HPLC method validation for raw materials and marker compounds.

∘ Stability assessment of formulations
Physicochemical long-term storage test of food forms and raw materials

∘ Data supplementation of standardizing of raw materials
Data supplementation and revision of standardizing of raw materials

∘ The anti-inflammatory activities of ETT (Ethanol extract of T. terrestris) and compounds
ETT and N-trans-ρ-caffeoyl tyramine and Tribulusamide D prohibited NO production in LPS-stimulated RAW 264.7 cells without affecting its cell viability.

∘ The effects of ETT and compounds on the expression of inflammatory cytokines
ETT and N-trans-ρ-caffeoyl tyramine and Tribulusamide D suppressed the expression of LPS-induced inflammatory cytokines such as interleukin-6, interleukin-10, and tumor necrosis factor-α in LPS-stimulated RAW 264.7 cells.

∘ The effects of ETT and compounds on inhibition of COX-2 expression
ETT and compounds treatment resulted in the dose-dependent suppression COX-2 mRNA expression by RT-PCR and COX-2 protein expression by Western blot.

∘ The effects of ETT and compounds on inhibition of PGE2 expression
ETT treatment resulted in the dose-dependent suppression PGE2 protein expression by ELISA assay.

∘ Morphometric parameters of subcondral bone in the MIA-induced model
Morphometric parameters analysis showed protective effects of ETT on trabecular bone ETT tended to increase in trabecular thickness(Tb.Th) and trabecular bone volume fraction(BV/TV). Treatment with EAA significantly decreased the level of trabecular spacing(Tb.Sp).