초록 ▼

◦ 세부과제명: 아까바네바이러스 항체검출용 ELISA 개발을 위한 기술이전
<아까바네바이러스 항체검출용 ELISA 개발사업을 통해 얻은 결과인 항원, 항체관련 기술이전 실시>
I) M 유전자의 G1 단백질을 이용하는 indirect ELISA 방법: G1 유전자를 3개부위로 나눠 E.Coli 시스템을 이용하여 발현을 재시도하였으나, 최종 ELISA 반응성이 낮게 나타남
II) 아까바네바이러스 항원, 단클론항체를 이용하는 Blocking ELISA 방법: 항원 농축 및 정제, 불활화 방법 등
- 아까바네바이러스(

◦ 세부과제명: 아까바네바이러스 항체검출용 ELISA 개발을 위한 기술이전
<아까바네바이러스 항체검출용 ELISA 개발사업을 통해 얻은 결과인 항원, 항체관련 기술이전 실시>
I) M 유전자의 G1 단백질을 이용하는 indirect ELISA 방법: G1 유전자를 3개부위로 나눠 E.Coli 시스템을 이용하여 발현을 재시도하였으나, 최종 ELISA 반응성이 낮게 나타남
II) 아까바네바이러스 항원, 단클론항체를 이용하는 Blocking ELISA 방법: 항원 농축 및 정제, 불활화 방법 등
- 아까바네바이러스(93FMX 주)를 NaCl과 PEG-6000으로 농축하고 Sucrose gradient에투석을 통해 정제 아까바네바이러스 제작 기술이전
- A, B, C 단클론 항체를 이용하여 반응성을 확인한 후 최종 B-HRPconjugation항체로 선정
III) N 단백질 항원을 이용하는 indirect ELISA 방법: 항원코팅 농도 등
- S gene segment유전자를 cloning하고 E.Coli 발현시스템을 이용한 N protein발현 단백질과의 반응성 확인(Western blotting) 후 indirect ELISA 개발에 활용
◦ 세부과제명: 아까바네바이러스 항체검출용 ELISA 산업화
<아까바네바이러스 항체검출용 ELSIA킷트 시제품생산>
- ELISA kit 대량생산 기법 표준화를 위해 7종의 coating plate를 대상으로 검사한 결과 Biomat Medium으로 선정, coating buffer는 PBS, Tris 버퍼 중 pH9.6의 carbonate buffer 선정
- 희석버퍼는 3종류 중 20% protein, 항원 1ug와 conjugate 50ng 농도로 적정 반응조건 선정
- Indirect ELISA 유효성 평가: 재조합 단백질(N protein) 항원을 이용한 Indirect ELISA시제품 유효성 평가시 야외혈청 양성100, 음성100개 시료를 대상으로 표준검사법인 중화항체가와 비교시 특이도 81.4% 확인
- Blocking ELISA 개발: 정제 항원을 이용하고 B HRP conjugation 항체를 이용한 ELISA시제품 평가시 민감도 92.3%, 특이도 90.7% 확인함
- 외산키트와의 비교 실험: 현재 일본에서 생산하는 제품 OBE-1 strain을 이용하고 blocking ELISA 이용한 결과 야외혈청시료결과와 일치율이 높아 외산키트의 대체 효과 기대
- 3곳의 실험실간 비교시험 및 모기매개 양성 혈청과의 특이도 검사시 비특이반응은 없는 것으로 나타남

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 농림축산검역검사기술개발 연구과제 최종결과보고서 ... 2
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 4
• 1. 연구배경 ... 4
• 2. 연구최종목표 ... 5
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• Ⅲ. 연구결과 ... 6
• 가. 제1세부과제명: 아까바네바이러스 항체검출용 ELISA 개발을 위한 기술이전 ... 6
• 나. 제2세부과제명: 아까바네바이러스 항체검출용 ELISA 산업화 ... 9
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 15
• 1. 아까바네바이러스 항체검출용 ELISA 개발을 위한 기술이전 ... 15
• Ⅴ. 고찰 ... 16
• Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 16
• Ⅶ. 참고자료 ... 17
• 끝페이지 ... 17