초록 ▼

5. 최종 연구결과 요약

세부과제명: 가축농가단위에서 요네병 근절을 위한 모델 개발
- 2012년 1월부터 2014년 11월 까지 8개도 22개 시.군 30개 농장에서 총 3691건의 분변을 채취하여 배양한 후 균 배양 유무를 확인하였다. 균 DNA 분리 후 요네균의 IS900 과 Moss900 region 대한 PCR 방법으로 확인 결과 요네균에 특이 밴드가 확인된 8개의 개체에서 요네균 양성으로 확인되었다. 8개의 양성 확인 개체는 모두 2012년까지 채취한 검체로 문경 3건, 정선1건, 홍천 3건, 제주 1건

5. 최종 연구결과 요약

세부과제명: 가축농가단위에서 요네병 근절을 위한 모델 개발
- 2012년 1월부터 2014년 11월 까지 8개도 22개 시.군 30개 농장에서 총 3691건의 분변을 채취하여 배양한 후 균 배양 유무를 확인하였다. 균 DNA 분리 후 요네균의 IS900 과 Moss900 region 대한 PCR 방법으로 확인 결과 요네균에 특이 밴드가 확인된 8개의 개체에서 요네균 양성으로 확인되었다. 8개의 양성 확인 개체는 모두 2012년까지 채취한 검체로 문경 3건, 정선1건, 홍천 3건, 제주 1건이었으며, 2013년과 2014년 검체에서는 균분리가 확인되지 않았음.
- 2012년 1월부터 2012년 12월까지 8개도 26개시, 30개 농장에서 총 4,611개의 한우 혈청을 채취하여 요네균 특이 ELISA를 수행. 또한 2013년 1월부터 전년도 기실시 농장 등 20개시, 25개 농장을 대상으로 3,489두의 혈청을 채취하여 ELISA를 실시하였으며, 2014년 역시, 2012년 또는 2013년에 검사이력이 있는 농장 위주로 8개 지역 25개시, 31개 농가를 대상으로 3,935두 검사. 2회 이상 검사농가는 총 30개로 이중 19개 농가는 발생율이 증가하였으며, 7개 농가는 발생율의 등락이 되었으며, 2개 농가는 발생이 감소하였음. 3년간 농가별 양성율은 40%-->76%-->93.55%로 증가하였고, 두수 양성율 또한 0.98%-->3.07%-->5.16%로 증가추세를 나타내었으며, 기간 중 전체 두수양성율은 2.95%였음. 대부분의 농가에서, 양성축의 도태를 실시하였음에도 불구하고, 양성율은 전반적으로 증가함. 사육환경에서의 변화없이 양성축의 도태만으로는 요네병의 근절에 상당한 시간이 소요되는 것으로 판단됨.
- 2012년 2월부터 2014년 11월 까지 요네병 근절농장을 선정하여 각 농장에 대한 요네병 위험수준을 평가하고,혈청검사 결과를 비교한 결과, 위험도와 항체양성율 간의 상관관계가 확인되지는 않음. 연구기간 동안,대상농장의 위험평가를 실시해 본 결과, 요네병 감염위험이 가장 높은 분만 직후에서 송아지 기간에 대한 위험평가 항목 중 어미소로부터 송아지의 분리시기/송아지와 다른 성우와의 접촉 가능성/송아지의 무리사육 등의 부분에서 비슷한 사육환경을 갖고 있었음. 대부분 초유수유를 위하여, 어미소와 송아지를 같이 키우거나,상호간에 수시로 접촉할 수 있는 환경이었으며, 성우사와 송아지 우사 간에 통로가 있어 다른 소와의 접촉이나 분변에 노출되어 있는 환경이었음. 위험평가 대상농장의 사양관리 수준이 양호함을 감안할 때,국내에서는 대체로 송아지가 분만 이후, 요네병에 노출될 수 있는 사육환경을 갖고 있어, 다른 위험평가요소에서 다소 간의 차이가 있다하더라도, 이런 결과가 항체양성율의 변화에 크게 영향을 주지 않는 것으로 판단됨.
- 요네병 근절 모델 개발 농장을 선정하여 분변시료에서 균 분리 시도 결과 총 27건에서 균배양이 확인되었으며 이 중 4건에서 요네균 특이 유전자를 확인 하였고 Acid-fast staining으로 항산성 균주를 확인 하였으며,이 농장에서 총 2621두 중 31두에서 양성을 확인하여 1.18%의 양성율을 보였으며 이들 개체는 모두 도태하였음.
- 국내 30여개의 한우의 사양관리를 비교, 분석하여 요네병 감염에 악영향을 줄 수 있는 일반적인 사양환경을 확인하였고, 국내의 사육여건에 적용할 수 있는 요네병 예방 및 근절을 위한 가이드라인을 제시함.
세부과제명: 가축 농가 단위 요네병 검사를 위한 진단법 선정
- 요네균 특이항체를 결합시킨 나노입자를 분변과 반응시켜 분변 중의 요네균을 신속 간편하게 검출하여 분변속의 요네균 20 cells/g까지도 검출이 가능하였음. 확립된 요네균 신속 분리기법을 이용하여 전국 7개 시도 674건의 분변을 조사한 결과 13건에서 요네균 특이 유전자를 확인하였음.
- 개발한 항체결합 magnetic nanoparticle (MNP)의 성능을 평가하기 위해 현재 시판되고 있는 Invitrogen의 paramagnetic bead (PMB)인 Dynabead와 비교평가를 시행하였음. 0.1~0.0125 μg/ml의 PMB와 MNP를 가지고 요네균을 검출해본 결과 가장 널리 쓰이는 마이크로 크기의 PMB와 본 검사실에서 개발한 나노 크기의 MNP는 그 성능에 큰 차이 없이 시료 중의 요네균을 검출할 수 있는 것으로 나타나는 것으로 볼 때, 본 검사법을 통해 효율적으로 요네균의 감염을 검출할 수 있음.
- 현재 시판되고 있는 요네균에 특이성을 가진 항원을 2종류의 ELISA KIT 를 대상으로 한우 혈청으로 실험하여 두 키트의 양성율 일치도를 분석 하였으나, 두 키트의 kappa value에 의한 일치도 분석결과 kappa value 값이 -0.0286으로 두 키트의 진단결과가 일치하지 않음을 확인하였고, 본 연구에서는 두 종류의 kit 모두를 사용하였음.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 농림축산검역검사기술개발 연구과제 최종결과보고서 ... 2
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 4
• 1. 연구배경 ... 4
• 2. 연구최종목표 ... 5
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• Ⅲ. 연구결과 ... 7
• 가. 제1세부과제명 : 가축농가단위에서 요네병 근절을 위한 모델 개발 ... 7
• 나. 제2세부과제명 : 가축 농가 단위 요네병 검사를 위한 진단법 선정 ... 19
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 24
• Ⅴ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 26
• 끝페이지 ... 26