초록 ▼

1. 연구개발사업의 목적
: 복부지방 유래 새로운 adipokine인 neuromedin B에 의한 종양형성의 분자적 작용기전 및 상.하위 신호전달경로를 고찰하여 규명함으로서 암화과정에서 neuromedin B와 neuromedin B 수용체의 총괄적인 기능을 이해하고자 함.

2. 연구방법
- 유방암세포의 증식,이동, 침윤능 및 관련 타겟유전자 조사: MTT assay, migration assay, invasion assay, wound migration assay.
- in vivo 종양모델에서 암형

1. 연구개발사업의 목적
: 복부지방 유래 새로운 adipokine인 neuromedin B에 의한 종양형성의 분자적 작용기전 및 상.하위 신호전달경로를 고찰하여 규명함으로서 암화과정에서 neuromedin B와 neuromedin B 수용체의 총괄적인 기능을 이해하고자 함.

2. 연구방법
- 유방암세포의 증식,이동, 침윤능 및 관련 타겟유전자 조사: MTT assay, migration assay, invasion assay, wound migration assay.
- in vivo 종양모델에서 암형성 및 암혈관신생 조사: in vivo mouse Matrigel assay, in vivo tumor xenograft model법, 면역조직화학염색법.
- Neuromedin B 수용체 및 MMPs의 발현조절기전 조사: (real time)RT-PCR, western blot analysis, luciferase assay, site-directed mutagenesis, EMSA, chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay.
- in vitro EMT 및 in vivo 전이 억제능 조사: western blot analysis, in vivo lung metastasis model법.

3. 연구결과
(1) Neuromedin B가 종양형성에 미치는 역할 조사
① Neuromedin B에 의한 유방암세포의 증식, 이동 침윤능을 확인함.
② Neuromedin B에 촉진된 in vivo 종양형성을 확인함.
③ Neuromedin B에 촉진된 in vivo 종양에서 증가된 혈관신생을 확인함.
(2) Neuromedin B-NMB 수용체의 분자적 신호전달 기전 조사.
① 유방암세포에서 hypoxia에 의해서 neuromedin B 수용체의 발현이 증가되며, 이는 HIF-1 전사인자가 관여함을 증명함 (Neuromedin B 수용체 promoter에 hypoxia response elements (HRE)가 존재하며, 이 부위에 HIF-1이 직접적으로 결합하여 전사를 매개하고 neuromedin B 수용체의 발현을 증가시킴).
② Neuromedin B가 pro-angiogenic factor 및 anti-angiogenic factor 들의 발현을 조절함을 확인함.
(3) Neuromedin B-NMB 수용체 표적 암 억제효능 조사.
① Neuromedin B 수용체 길항제에 의해 혈관신생이 억제되며, in vivo 종양조직에서 신생혈관형성이 저해됨.
② Neuromedin B 수용체 길항제가 유방암세포의 이동 및 침윤을 억제함. 또한 Neuromedin B 및 neuromedin B 수용체 길항제가 유방암세포의 epithelial to mesenchymal transition (EMT) marker 발현을 변화시키며 관련 세포내 신호전달기전을 조절함.
③ 유방암세포를 이용한 in vivo tumor metastasis model법을 확립함.
④ Neuromedin B 수용체 길항제가 neuromedin B에 의해 촉진된 유방암 세포주의 이동성과 침윤능을 저해함.
⇒ 이는 암화과정에서 neuromedin B와 neuromedin B 수용체의 총괄적인 역할을 세계최초로 연구한 창의적이며 독창적인 결과로써 이를 근거로 하여 neuromedin B와 neuromedin B 수용체를 제어하는 조절제 발굴을 통해 비만관련 암발생의 예방 및 치료제 개발 분야에 적용할 수 있을 것으로 사료됨.

Abstract ▼

1. Purpose
: The purpose of this study is to explore the roles of neuromedin B, a newly identified visceral adipokine, on tumorigenesis of breast cancer, and to provide foundations on developing novel anti-cancer drugs targeting neuromedin B receptor.

2. Methods
- Proliferation, migrati

1. Purpose
: The purpose of this study is to explore the roles of neuromedin B, a newly identified visceral adipokine, on tumorigenesis of breast cancer, and to provide foundations on developing novel anti-cancer drugs targeting neuromedin B receptor.

2. Methods
- Proliferation, migration, and invasion of breast cancer cells : MTT assay, migration assay, invasion assay, wound migration assay.
- In vivo tumor growth and tumor angiogenesis : in vivo mouse Matrigel assay, in vivo tumor xenograft model, immunohistochemistry.
- Molecular mechanism for the expression of neuromedin B receptor or MMPs: (real time)RT-PCR, western blot analysis, luciferase assay, site-directed mutagenesis, EMSA, chromatin immunoprecipitation (ChIP) assay.
- In vitro EMT and in vivo tumor metastasis : western blot analysis, in vivo lung metastasis model.

3. Results
(1) Investigation of the function of neuromedin B on tumorigenesis
① The effect of neuromedin B on proliferation, migration and invasion in breast cancer cells.
② The effect of neuromedin B on in vivo tumor growth using tumor xenograft model.
③ The effect of neuromedin B on tumor angiogenesis.
(2) Investigation of the molecular signal mechanism of neuromedin B-neuromedin B receptor
① Effect of hypoxia on neuromedin B receptorexpression and the role of HIF-1α in hypoxia-induced neuromedin B receptor expression (Localization of HREs in the neuromedin B receptor promoter and identification of a functional HRE in the human neuromedin B receptor promoter).
② The effect of neuromedin B on the expression of pro-angiogenic factors and anti-angiogenic factors.
(3) Investigation of the targeting neuromedin B receptor for suppression of tumor growth
① Suppression of in vivo angiogenesis and tumor angiogenesis by inhibition of neuromedin B receptor.
② Suppression of proliferation, migration, invasion, epithelial to mesenchymal transition (EMT) of breast cancer cells by inhibition of neuromedin B receptor.
③ Setting up in vivo tumor metastasis model using breast cancer cells.
④ Reduction of neuromedin B-induced migration, invasion, and EMT of breast cancer cells by inhibition of neuromedin B receptor.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구개발사업 최종연구개발결과보고서 요약문 ... 4
• Project Summery ... 6
• 1. 연구과제의 최종 연구개발 목표 ... 8
• 1) 연구개발의 필요성 ... 8
• 2) 연구개발의 목적 및 범위 ... 11
• 2. 연구과제의 연구대상 및 방법 ... 12
• 3. 연구과제의 연구개발결과 ... 16
• 1) 1차년도: Neuromedin B가 종양형성에 미치는 역할 조사 ... 16
• 2) 2차년도: Neuromedin B-NMB 수용체의 분자적 신호전달 기전 조사 ... 20
• 3) 3차년도: Neuromedin B-NMB 수용체 표적 암 억제효능 조사 ... 28
• 4. 연구과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 36
• 5. 연구과제의 연구성과 및 목표달성도 ... 38
• (1) 연구성과 총괄 ... 38
• (2) 연구성과 상세내역 ... 39
• (3) 연구개발과제의 목표달성도 ... 44
• 6. 연구과제의 활용계획 ... 46
• (1) 연구종료 3년까지 예상 연구성과 ... 46
• (2) 연구성과의 활용계획 ... 46
• 7. 참고문헌 ... 47
• 8. 첨부서류 ... 48
• 끝페이지 ... 53