초록 ▼

V. 연구개발결과
1. 비타민나무 잎 원료의 가공공정 확립과 표준화
1.1 비타민나무의 국내·외 소재 확보 및 확보소재의 추출물 생산
비타민나무의 국내·외 소재 확보를 위해 국내 비타민나무 농가를 대상으로 조사하였으며 국외 비타민나무 주 생산지 및 국내 수입량을 조사하였다. 확보한 국내·외 비타민나무 원 료를 바탕으로 잎과 열매를 각각의 용매별로 추출을 진행하였다. 추출물들 중 in vitro 효 능이 가장 우수한 추출물 대상으로 Scale-up 테스트 및 문제점을 개선하였다.
1.2 비타민나무 잎 추출물의 일

V. 연구개발결과
1. 비타민나무 잎 원료의 가공공정 확립과 표준화
1.1 비타민나무의 국내·외 소재 확보 및 확보소재의 추출물 생산
비타민나무의 국내·외 소재 확보를 위해 국내 비타민나무 농가를 대상으로 조사하였으며 국외 비타민나무 주 생산지 및 국내 수입량을 조사하였다. 확보한 국내·외 비타민나무 원 료를 바탕으로 잎과 열매를 각각의 용매별로 추출을 진행하였다. 추출물들 중 in vitro 효 능이 가장 우수한 추출물 대상으로 Scale-up 테스트 및 문제점을 개선하였다.
1.2 비타민나무 잎 추출물의 일반·미량성분 분석 및 유해물질 분석
비타민나무의 일반성분(탄수화물，단백질，지방，수분) 및 미량성분(무기질，비타민，아 미노산，페놀류) 분석을 위해 식품공전과 건강기능식품공전의 시험법을 이용하여 분석을 시행하였다. 또한 중금속 시험법을 이용하여 비타민나무 추출물의 유해물질 설정 분석을 시행하였다.
1.3 비타민나무 잎 추출물의 지표성분 분석
지표성분 분석을 위하여 총폴리페놀 함량 분석， 고속크로마토그래피를 이용한 quercetin, kaempferol, isorhamnetin의 분석을 시행하였다. 또한 국내·외 비타민나무 잎 추출물을 대상으로 quercetin, kaempferol, isorhamnetin의 함량을 비교 분석하였으며 추 출물을 분획하여 분획층별 지표물질인 quercetin, kaempferol, isorhamnetin의 함량을 비 교 분석하였다.
2. 비타민나무 잎 시제품 개발을 위한 제형 연구
2.1 비타민나무 잎 추출분말을 이용한 건강기능식吾 제형 개발
추출물의 적합한 제형을 적용성을 확인하기 위하여 대표적인 고상제형인 정제，경질캡슐 제형，대표적인 액상제형인 연질캡슬，액상제형에 대하여 각 제형 각 제형별 특성에 대해 검토하였다.
2.2 임상시험용 시제품 개발
제 형연구가 된 결과를 토대로 비타민나무 열수추출분말에 가장 적합한 제형을 선택하여 시제품을 개발하였다.
3. 비타민나무 잎 시제吾 개발을 위한 유통기한 설정
개발된 시제품을 대상으로 유통기한 설정을 시행하였다. 시료의 분석항목은 식품 및 건강 기능식吾 유통기간 설정 가이드라인을 참고하여 선정하였으며 검사 항목은 성상，대장균군， 지표성분(quercetin, kaempferol, isorhamnetin 합) 함량을 온도와 저장기간에 따라 측정을 실시하였으며 이를 바탕으로 유통기간을 산출하였다.
4. 비타민나무의 시제품 개발 및 상품화
비타민나무 추출분말을 활용한 시제품 개발은 Tatget 시장 선정 후 제품 유형, 배합비, 디자인 등을 선정 한 후 제품을 제조하였다.
5. 비타민나무의 정신적 항피로 기능성 및 활성기전 규명
5.1 비타민나무 부위 별 지역별 활성 비교실험을 통한 최종시료 선정
실험 시료로서 지역별로는 강원도，경기도，전라남도 장흥군，수입산(중국)에서 확보 하였으며, 부위별로 잎(전지역), 열매(전남 장흥군), 덖은잎, 그리고 추출용매로는 열수와 5%，30%，50%，70% 에탄올을 사용한 추출물을 이용하여 실험을 수행하였다. 총 4가지의 in vitro screening tool (corticosterone 보효효과 screening 모델， 5 - HT6 매게 cAMP 활성 screening 모델，NMDA 매게 Ca²⁺ 유입 억제능 활성 screening 모델，H0 - 1 효소 활성 모델)을 활용하여 건강기능식吾 소재로서의 비타민나무의 부위와 지역，용매별 추출물을 선택하고자 실험을 수행하였다.
5.2. 비타민나무잎 열수추출물 안전성평가
비타민나무잎 열수추출물의 단회투여 및 14일 반복투여 독성평가를 수행하였다. 평가지표로는 사망률 및 일반 증상, 체중변화, 변 상태 변화, 조직의 외관 상태와 무게변화, 혈청 AST 및 ALT 의 변화를 측정하였다.
5.3. in vivo 비타민나무 열수 추출물의 정신적 피로활성 평가
in vivo 실험으로서 전기쇼크를 통해 실험동물에 극심한 스트레스를 줌으로 정신적 스트레스에 대한 시료의 효과를 탐색 하였다.혈청과 뇌(해마) 부위 에서의 평가 지표로서， corticosterone 수치와 5 - HT의 수준，dopamine 및 norepinephrine 수준의 변화를 측정하였다.
5.4. 비타민나무 열수 추출물의 생리활성 후보물질 탐색
LC-MS-MS 를 활용하여 비타민나무잎 열수추출물에서 생리활성 단일 후보물질들을 규명하였으며, 스크리닝을 통한 최종 후보물질들의 비타민나무잎 열수추출물에서의 HPLC를 이용한 정량적 분석을 수행하였다.
5.5 비타민나무 정신적 항피로 생리활성 물질 및 활성기작 규명
LC - MSMS 분석을 통해 규명한 생리활성 후보물질들을 이용하여 in vitro screening tool들 (corticosterone 보효효과 screening 모델，5 - HT6 매게 cAMP 활성 screening 모델，NMDA 매게 Ca²⁺ 유입 억제능 활성 screening 모델)을 활용하여 최종 생리활성 후보 물질을 screening 하였다. 최종 선정된 생리활성 후보물질을 이용하여 in vivo 실험을 통해 활성기작을 규명하고자 하였다. 사용 모델로서 전기쇼크를 통해 실험동물에 극심한 스 트레스를 줌으로 정신적 스트레스에 대한 시료의 효과를 탐색 하였으며，행동양상의 변화 와 혈청과 뇌(해마) 부위에서의 평가 지표로서，corticosterone 수치의 변화와 5 - HT의 수준 변화，dopamine 및 norepinephrine 수준의 변화를 측정하였다.
6. 비타민나무의 육체적 항피로 기능성 및 활성기전 규명
6.1 in vivo 비타민나무잎 열수 추출물의 육체적 피로활성 평가
비타민나무잎 열수추출물의 in vivo assay로서 유속 pool을 활용한 육체적 피로와 관련 된 biomarker들 (수영시간，Lactate level， glycogen content， LDH activity， BUN level 등)을 확인하여 전임상 수준에서의 비타민나우잎 열수추출물의 육체적 항피로활성을 확인하였다.
6.2. 비타민나무 육체적 항피로 생리활성 물질 및 활성기작 규명
LC-MSMS 분석을 통해 규명한 생리활성 후보물질들을 이용하여 in vitro screening tod들 (L6 근육세포에서의 과산화수소에 대한 보호효과 모델과 세포내 ROS 소거능 평가 모델)을 활용하여 최종 생리활성 후보물질을 screening 하였다. 선정된 최종 후보물질을 이용하여 in vivo 수준에서의 활성기작 규명을 위해，유속 pool을 활용한 육체적 피로와 관 련된 biomarker들 (수영시간，Lactate level，glycogen content，LDH activity，BUN level， 신체내 항산화 효소 활성 수준 등)을 확인하여 전임상 수준에서의 생리활성물질의 육체적 항피 로활성 기작을 규명 하였다.

Abstract ▼

This research tried to present the possibility of development on domestic agricultural products as a material of health functional food indicating. Through mental care functional material exploration, scientific validation and identification mechanisms, clinical trials, product standardization and p

This research tried to present the possibility of development on domestic agricultural products as a material of health functional food indicating. Through mental care functional material exploration, scientific validation and identification mechanisms, clinical trials, product standardization and processing technology research and development, we should proposed that Physical / mental health care total functional food market exemplary success stories. We have confirmed that flavonoid glycosides an indicator substance in Hippophae rhamnoides L. leaf extract.
We confirmed that the aqueous extract (HRW) and various compounds from HR confer protective effects against CORT - induced impairments in SH - SY5Y cells and antagonistic effects on NMDA receptors and the 5-HT₆ receptor by using primary cultured rat hippocampal neurons and astable 5-HT₆ receptor-expressing cell line, respectively. In addition, we confirmed the anti-stress effects of HRW and kaempherol in an electric foot shock stress model in mice and explored the underlying mechanisms of its action. We observed that HRW treatment significantly reversed the reduction in immobility times and increased climbing times in the forced swimming tests (FST) that were induced by electric foot shocks in the stress model. The levels of CORT, dopamine (DP) and norepinephrine (NE) were increased and the level of serotonin (5 - HT) in the hippocampus was decreased in the electric foot shock stress model. The standardized HRW and kaempherol effectively restored abnormal CORT and monoamine levels in the hippocampus that were induced by stress. The results of the present study demonstrate that the standardized HRW produces novel multi-functional anti-stress effects.
To screen the most potential compound for protectant against muscular ROS among various flavonoids confirmed in HRW using LC analytical system, we used in vitro cell model. When compared to cells treated with 150 |iM H₂O₂ alone, cell viability and intracellular ROS were the most recovered in the cells pretreated with isorhamnetin (IR) prior to H₂O₂ treatment. Thus, isorhamnetin was selected as the target material for the present experiments. To evaluate the endurance exercise capacity of mice, we carried out forced swimming test using adjustable-current water pool. Administration of HRW and IR improved exercise capacity and reduced lactic acid level elevated by intense exercise. Furthermore, HRW and IR-administered groups showed sparing effects of muscular and liver glycogen contents and blood glucose levels. When evaluating the indicators of fatigue status, the lactic dehydrogenase (LDH) activities and blood urea nitrogen (BUN) contents increased by exhaustive swimming were significantly reduced in HRW and IR-treated groups compared with the control group. There were not significant differences in creatine kinase (CK) level of extract treated groups compared with those of control group. Also, the administration of IR significantly protected the depletion of enzymatic-antioxidants and glutathione levels by exhaustive exercise. These results suggest that HRW and IR have an improvement effect on endurance exercise capacity, which is attributed to its ability to ameliorate oxidative stress by improving antioxidant and to recover glucose metabolism efficiency.