초록 ▼

Ⅰ. 연구결과 요약문

본 연구의 두 가지 궁극적인 목표는 (1) 다양한 콜레스테롤 환경, 그리고 산화 LDL의 초기 형태와 감염 등에 의해 자극된 대식세포 혹은 혈관내피세포에서 HDL이 보이는 항동맥경화효과와 기전을 분자생물학적, 세포생물학적 수준에서 규명하는 것임. (2) 임상에서 얻은 관상동맥경화환자와 대조군의 혈액으로부터 추출된 HDL내의 단백질조성변화와 항염증기능의 저하여부를 조사함. 이러한 HDL의 구성과 기능이 지질 조절제를 투여한 후에 회복되는지 여부를 조사함.

(1) 다양한 콜레스테롤 환경에서

Ⅰ. 연구결과 요약문

본 연구의 두 가지 궁극적인 목표는 (1) 다양한 콜레스테롤 환경, 그리고 산화 LDL의 초기 형태와 감염 등에 의해 자극된 대식세포 혹은 혈관내피세포에서 HDL이 보이는 항동맥경화효과와 기전을 분자생물학적, 세포생물학적 수준에서 규명하는 것임. (2) 임상에서 얻은 관상동맥경화환자와 대조군의 혈액으로부터 추출된 HDL내의 단백질조성변화와 항염증기능의 저하여부를 조사함. 이러한 HDL의 구성과 기능이 지질 조절제를 투여한 후에 회복되는지 여부를 조사함.

(1) 다양한 콜레스테롤 환경에서 대식세포에 대한 HDL의 효과를 알아볼 목적으로 aggregated low-density lipoprotein (agLDL), minimally oxidized LDL (mmLDL) 및 lipopolysaccaride (LPS)를 사용하여 대식세포내 염증반응을 자극한 후, 세포내의 염증성 신호전달분자들 (cJun, ERK, p38, JNK)과 분비성 사이토카인 (MIP-2, CXCL-2, TNF-α)의 활성 및 발현증가를 확인하였음. 이러한 실험조건에서 HDL을 처리한 후 위에서 언급된 항염증인자들이 활성 및 발현증가의 억제를 조사하여 HDL의 항염증기전을 탐색하였음. LPS와 mmLDL에 의해 자극된 대식세포에 처리된 HDL은 ERK, p38, JNK단백질의 활성을 억제하였고, mmLDL에 의해 자극된 대식세포에 처리된 HDL은 처리한 군에서는 p38, JNK, c-Jun 단백질의 활성을 억제하였음. 이 연구를 통해 다양한 콜레스테롤 환경과, 염증유도인자의 종류에 따라 HDL를 매개로한 항염증기전이 다양함을 규명하였음.

(2) HDL의 구성과 기능연구를 위해 관상동맥경화질환군과 대조군에서 얻은 HDL을 사용하였음. HDL의 단백질구성연구는 KIST와의 긴밀한 협력연구를 통해 Mass spectrometry기법을 이용하여 50개 이상의 HDL 결합단백질을 동정하였고, 이들 단백질의 정량, post-translational modification을 분석함. apoC-I, apoC-III, serum amyloid A (SAA), SAA4를 포함한 여러 단백질의 정량 또는 PTM의 변화가 질환군에서 관찰되었음. 동시에 본 연구자의 연구실에서는 HDL 결합단백질 구성연구에서 사용된 동일한 HDL의 대식세포로 부터의 콜레스테롤 유출능력, 혈관내피세포내의 nitric oxide (NO) 생성 유도, tumor necrosis factor alpha (TNF-α)로 염증반응이 유도된 혈관내피세포내의 vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) 발현 억제능력을 평가하였음. 관상동맥경화질환군의 HDL의 콜레스테롤 유출과 VCAM-1억제 기능은 대조군에 비해 각각 22%와 51%가 감소하였지만, NO 생성 유도효과는 변화하지 않았음. HDL의 콜레스테롤 유출기능저하와 HDL결합단백질 조성의 변화와의 상관관계를 분석하여 apoA-I 단백이, 관상동맥질환환자군에서 정량적 변화는 없었지만, 통계적으로 유의한 독립적인 상관관계를 보임. 또한 질환군의 HDL의 콜레스테롤 유출기능이 지질조절제 (atorvastatin 및 atorvastatin+ezetimibe)에 의해 대조군의 HDL 콜레스테롤 유출능력정도로 회복됨을 관찰하였고, 본 연구에 사용된 지질 치료제 투여 종류간의 콜레스테롤 유출능력 기능향상정도에는 차이를 보이지 않았음.