초록 ▼

현재 우리나라에서 간흡충증은 국민 건강을 위협하는 기생충 감염증이다. 특히 4대강 유역에서는 주민들이 민물고기를 생식하여 간흡충에 반복감염되고 있다. 이 지역 주민들의 간흡충 충란 양성율은 유지되고 있지만 충체부하는 현저하게 낮아졌다. 현재 간흡충증 진단에 이용되고 있는 현미경대변충란검사법, 혈청학적진단 ELISA법 등의 민감도가 낮아지고 있다. 따라서 이 진단법들은 간흡충증 대단위 집단관리사업에 적용하기에 상당한 어려움이 따르고 있다. 이러한 간흡충증 진단법을 대체하기 위하여 민감도와 특이도가 우수하고 신뢰할 수 있으며 현장 적용

현재 우리나라에서 간흡충증은 국민 건강을 위협하는 기생충 감염증이다. 특히 4대강 유역에서는 주민들이 민물고기를 생식하여 간흡충에 반복감염되고 있다. 이 지역 주민들의 간흡충 충란 양성율은 유지되고 있지만 충체부하는 현저하게 낮아졌다. 현재 간흡충증 진단에 이용되고 있는 현미경대변충란검사법, 혈청학적진단 ELISA법 등의 민감도가 낮아지고 있다. 따라서 이 진단법들은 간흡충증 대단위 집단관리사업에 적용하기에 상당한 어려움이 따르고 있다. 이러한 간흡충증 진단법을 대체하기 위하여 민감도와 특이도가 우수하고 신뢰할 수 있으며 현장 적용성이 있는 간편한 신속진단키트 개발이 요구되고 있다.

본 연구에서는 간흡충 항원단백질로 알려진 융합항원 Cs28GST-CsAg17와 단일항원 CsAg17B의 항원성을 증강시키기 위하여 펩타이드항원(CsRe4, CsRe10)을 추가한 병렬항원과 복합항원을 개발하였다. 이 항원단백질들을 사용하여 현장적용 가능한 신속진단키트 (rapid diagnostic test, RDT)와 면역블롯 (immunoblot test, IBT)를 개발하였다.

항원성 재평가: 융합항원 Cs28GST-CsAg17은 간흡충감염 표준혈청에 대하여 민감도 86.8%를 보였다. 항원성 펩타이드로 합성된 병렬항원 중 CsRe10-2MAP과 CsRe10-4MAP은 단일 펩타이드보다 항원성이 증강되어 민감도가 65.7%와 78.9%로 높아졌다. 신속진단키트 (RDT): Cs28GST-CsAg17를 항원과 gold conjugate로 사용한 RDT는 민감도가 68%이였다. 이 단백질항원에 IUD와 펩타이드 2종을 직렬로 연결한 병렬항원 Cs28GST-CsAg17-CsIUD-CsRe4-CsRe10을 생산하였다 (CsIUD1, CsIUD2). CsIUD1을 test line에, CsAg17B를 gold-conjugate로 사용한 RDT는 민감도 72%, 특이도 100%를 보였다.

그러나 표준혈청 200개에 대해 특이도가 98%인 반면 민감도가 52%로 낮았다. 민감도 증강을 위해 전개액 조성을 최적화시킨 결과, RDT CsIUD1은 민감도를 79%로 개선시킨 반면 특이도는 77%로 낮아졌다. 면역블롯 (IBT): 침적식 IBT의 Cs28GST-CsAg17 항원은 민감도 84%로 조항원 40%보다 우수하였다. 수평전개식 IBT는 streptavidin을 test line에 긋고 희석된 CsRe4 펩타이드 항원과 human-IgG gold conjugate로 반응시켰을 때 민감도 72%와 특이도 80%를 보였다. CsRe4-2MAP과 CsRe10-2MAP의 복합항원은 민감도가 64-84%로 증가하면서 특이도는 65-95%로 향상되었다. 성능이 최적화된 RDT와 IBT는 저렴하며 현장에서 신속하고 간편하게 다량의 혈청을 검사할 수 있는 진단키트로 사용될 수 있을 것이다.

(출처 : 보고서 요약문 4p)

Abstract ▼

Clonorchiasis is the most prevalent intestinal parasitic infection threatening publis health in Korea now. In endemic areas along in basins of the four major rivers, inhabitants eat fresh water fish in raw and got repetitively infected by this fluke. Infection rate in terms of egg positive rate, rem

Clonorchiasis is the most prevalent intestinal parasitic infection threatening publis health in Korea now. In endemic areas along in basins of the four major rivers, inhabitants eat fresh water fish in raw and got repetitively infected by this fluke. Infection rate in terms of egg positive rate, remains stable as before, whereas worm burden decreased significantly. As consequences, diagnostic methods such as microscopic stool examination and ELISA give less sensitive results. These diagnoses are therefore recognized less feasible to apply for mass control projects of clonorchiasis. Now we need rapid diagnostic tests of good capacity, high sensitivity and specificity, which challenge the two conventional diagnostic methods of Clonorchis sinensis infections.

In this study, to enhance antigenicity of a fusion antigen Cs28GST-CsAg17 and single antigen CsAg17B, chimeric and multiple antigens were made by adding antigenic peptides CsRe4 and/or CsRe10 to the previous antigens. By employing these antigens, rapid diagnostic tests (RDT) and immunoblot tests (IBT) were developed as care-of-point formats.

Re- evaluation on antigenicity: Fusion antigen Cs28GST-CsAg17 revealed 86.8% sensitivity to C. sinensis-infected human standard sera. (CsHSS) Synthetic parallel antigens, CsRe10-2MAP and CsRe10-4MAP, gave sensitivity 65.7% and 78.8% higher than those of single peptide. Rapid diagnostic test (RDT): an RDT using Cs28GST-CsAg17 as antigen and gold-conjugate showed sensitivity 68%. Two chimeric antigens, Cs28GST-CsAg17-IUD-CsRe4-CsRe10 (CsIUD1, CsIUD2), were produced by adding IUD and the two antigenic peptides to the fusion antigen. An RDT made with drawn test line with anti-human IgG and CsIUD-gold conjugate gave sensitivity 60-80%, but test line signal appeared so weak. Toward CsHSS, this RDT of CsIUD1 revealed low sensitivity 52% and high specificity 98%. To improve sensitivity, diverse running buffer compositions were tested. One adjusted buffer increased sensitivity to 79% but hurted specificity to 77%.

Another RDT having CsIUD1 on test line and CsAg17B as gold-conjugate produced sensitivity 72% and specificity 100%. Immunoblot test (IBT): AS an immersing type IBT, Cs28GST-CsAg17 revealed 84% sensitivity superior to that of crude antigen 40%. For lateral flow formats, streptavidin was drawn on test line and peptide antigen was used as gold-conjugate. A peptide antigen, CsRe4 showed sensitivity 72% and specificity 80%.

Multiplex antigens of CsRe4와 CsRe4-2MAP revealed sensitivity increased to 64-84% and specificity 65-95%. It is expected that the optimized CsRDTs would be cost-effective, care-of-point and versatile diagnostics for C. sinensis infections than stool examination in endemic areas.

(출처 : Summary 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1정책연구용역사업 최종결과보고서 ... 2목차 ... 3보고서 요약문 ... 4Summary ... 5정책연구용역사업 연구결과 ... 6 제1장 최종 목표 ... 6 제2장 국내외 기술 현황 ... 12 제3장 최종 연구내용 및 방법 ... 14 제4장 최종 연구결과 ... 27 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 67 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 69 제7장 정책연구용역사업 진 행과정에서 수 집한 해외과학기술정보 ... 71 제8장 기타 중요변경사항 ... 72 제9장 연구비 사용 내역 및 연구원 분담표 ... 73 제10장 참고문헌 ... 75 제11장 첨부서류 ... 79끝페이지 ... 80