초록 ▼

□ 연구결과
신장에서의 유비퀴틴화-탈유비퀴틴화 관련 연구는 국내외적으로 거의 연구가 이루어지지 않은, 창의적이며 새로운 연구 분야임.
1) 신장 속수질 집합관 NEDD4 family의 기질 후보 발굴
- 가교결합(chemical crosslinking) 및 LC MS/MS를 통해 스크리닝된, NEDD4 기질 후보 단백질 S100A11은 신장에서 NEDD4가 발현되는 속수질 집합관에서 주로 발현됨이 조직 면역염색결과를 통해 확인됨
- Co-IP 실험을 통해 NEDD4와 S100A11이 직접 결합함을 확인함

□ 연구결과
신장에서의 유비퀴틴화-탈유비퀴틴화 관련 연구는 국내외적으로 거의 연구가 이루어지지 않은, 창의적이며 새로운 연구 분야임.
1) 신장 속수질 집합관 NEDD4 family의 기질 후보 발굴
- 가교결합(chemical crosslinking) 및 LC MS/MS를 통해 스크리닝된, NEDD4 기질 후보 단백질 S100A11은 신장에서 NEDD4가 발현되는 속수질 집합관에서 주로 발현됨이 조직 면역염색결과를 통해 확인됨
- Co-IP 실험을 통해 NEDD4와 S100A11이 직접 결합함을 확인함
- in vitro 유비퀴틴화 분석실험에서 S100A11은 NEDD4 의존적으로 모노유비퀴틴화됨이 확인됨
- 또한, 칼슘 결합 단백질인 S100A11은 칼슘 존재하에서는 NEDD4 의존적 모노유비퀴틴화가 저해됨이 확인됨
- 이전 연구들에서 S100A11은 세포질내의 단백질이며, 세포내 칼슘 농도 증가에 반응하여 세포질에서 핵으로 이동한다고 알려져 있음. 또한, 모노유비퀴틴화도 단백질의 세포질에서 핵으로의 이동을 가능하게 한다고 알려져 있음. 따라서, S100A11이 세포내 칼슘 농도 증가에 따라 세포질에서 핵으로 이동할 때, NEDD4 의존적 S100A11의 모노유비퀴틴화가 미치는 영향을 NEDD4 siRNA를 이용하여 조사함. 고농도 칼슘 의존적 S100A11 핵이동은 NEDD4에 의해 촉진되어짐이 확인됨
- NEDD4 의존적 S100A11의 모노유비퀴틴화 여부에 따라 AQP2의 mRNA 발현량이 조절됨이 확인됨
2) 신장 속수질 집합관 탈유비퀴틴화 효소 (DUBs) 및 관련 단백질 발굴
- HA-Ub-VS probe를 이용하여 probe에 결합된 탈유비퀴화 효소들을 동정하기 위해 단백질 획득이 용이한 신장 전체를 이용하여 LC MS/MS를 통해 소량의 탈유비퀴틴화 효소가 검출될 수 있는 실험 조건을 설정함
(출처 : 한글요약문 4p)

Abstract ▼

□ Result
In both domestic and overseas, the study of ubiquitination-deubiquitinization in the kidney is a creative and new field of research that has rarely been studied.
1) Investigation of the novel roles of NEDD4 and NEDD4L in inner medulla collecting duct
- Inner medulla homogenates of

□ Result
In both domestic and overseas, the study of ubiquitination-deubiquitinization in the kidney is a creative and new field of research that has rarely been studied.
1) Investigation of the novel roles of NEDD4 and NEDD4L in inner medulla collecting duct
- Inner medulla homogenates of rat kidney interacting with NEDD4 containing three WW domains were subjected to LC-MS/MS analysis and S100A11 was selected as a candidate substrate of NEDD4.
-Immunohistochemistry revealed the immunolocalization of S100A11 at the inner medulla collecting duct cells.
-Co-immunoprecipitation assay showed the interaction of S100A11 with NEDD4 in the kidney IMCD tubule suspension.
-In vitro ubiquitination assays revealed that S100A11 was monoubiquitinated by NEDD4.
-Following exposure of mpkCCDc14 cells to high extracellular [Ca²⁺], a common triggering factor for nuclear translocation of S100A11, S100A11 translocation to nuclei was markedly reduced in the cells with siRNA-mediated NEDD4 knockdown, along with significantly decreased AQP2 mRNA levels.
2) Identification of de-ubiquitinating enzymes using the HA-Ub probe in inner medulla collecting duct
-To identify the deubiquitinating enzymes in the inner medullary collecting duct, the experimental condition was established. The whole rat kidney homogenates were tested to detect a small amount of deubiquitinating enzymes bound to the HA-Ub-VS probe through LC-MS/MS.
(출처 : SUMMARY 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 목차 ... 2
• 연구계획 요약문 ... 3
• 연구결과 요약문 ... 4
• 한글요약문 ... 4
• SUMMARY ... 5
• 연구내용 및 결과 ... 6
• 1. 연구개발과제의 개요 ... 6
• 2. 연구수행 내용 및 결과 ... 6
• 3. 목표달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 10
• 4. 연구결과의 활용계획 ... 10
• 5. 주관연구책임자 대표적 연구실적 ... 11
• 6. 참고문헌 ... 11
• 7. 연구성과 ... 11
• 8. 국가과학기술지식정보서비스에 등록한 연구시설‧장비 현황 ... 11
• 9. 기타사항 ... 11
• 별첨1. 대표연구성과 ... 12
• 끝페이지 ... 12