대장암의 발생 및 전이 과정에서 EYA4 등 새로운 종양억제제의 promoter hypermethylation의 역할 Role of promoter hypermethylation of new tumor suppressor genes likes EYA4 in the development and metastasis of colorectal cancer원문보기
보고서 정보
주관연구기관
삼성서울병원 Samsung Seoul Hospital
연구책임자
김은란
보고서유형
최종보고서
발행국가
대한민국
언어
한국어
발행년월
2016-07
과제시작연도
2015
주관부처
미래창조과학부 Ministry of Science, ICT and Future Planning
□ 연구의 목적 및 내용 ◎ EYA4 유전자 활성 (Demethylation)에 의하여 조절되는 항암제 내성 및 전이와의 관련성 규명: Phosphatase인 EYA4 유전자에 의하여 phosphorylation이 억제되는 유전자를 선별하기 위한 연구시행 ◎ 새로운 methylation marker 발굴 대장암 조직 및 주변 정상 조직에서 methylation specific PCR을 이용하여 후보 유전자들의 promoter hypermethylation을 규명함. ◎ EYA4에 의한 대장암에서의 종양억제기능
□ 연구의 목적 및 내용 ◎ EYA4 유전자 활성 (Demethylation)에 의하여 조절되는 항암제 내성 및 전이와의 관련성 규명: Phosphatase인 EYA4 유전자에 의하여 phosphorylation이 억제되는 유전자를 선별하기 위한 연구시행 ◎ 새로운 methylation marker 발굴 대장암 조직 및 주변 정상 조직에서 methylation specific PCR을 이용하여 후보 유전자들의 promoter hypermethylation을 규명함. ◎ EYA4에 의한 대장암에서의 종양억제기능 규명 EYA4 유전자를 transfection 시킨 세포주를 이용하여 colony formation assay, MTT assay, BrdU assay, migration assay, invasion assay, xenograft study 시행 ◎ EYA4 유전자 변이와 대장암의 발생과의 관련성 규명 EYA4 유전자이 변이를 TCGA, 1,000 genome database를 이용하여 대장암 환자의 유전자 분석 결과를 바탕으로 유전자 변이를 발굴하여 대장암의 발생 및 진행과의 관련성 분석
□ 연구결과 ◎ EYA4 유전자 활성 (Demethylation)에 의하여 조절되는 항암제 내성 및 전이와의 관련성 규명 EYA4를 과발현 시켰을 때 expression profile 변화를 살펴보기 위하여 expression array를 통하여 분석한 자료를 통하여 얻은 EYA4의 발현 조절이 대장암 세포 성장 및 전이와 밀접한 관련이 있는 다양한 kinase (MAPK, PI3/AKT, RTK, JAK/STAT) 에서의 발현 양상 확인 ◎ EYA4에 의한 췌장암에서의 종양억제기능 규명 EYA4를 췌장암 세포주(MIA-PaCa2)에 transfection시켜 과 발현시키면, Colony formation의 억제 및 성장이 억제됨 ◎ EYA4 유전자 변이와 대장암의 발생 및 진행과의 관련성 규명 샘플 데이터에서 EYA4부분만을 추출하여 WGS, WES 각각의 변이를 찾아 변이 정보를 annotation 시킨 결과, 105명에서 총 4개의 EYA4 유전자 중 Exon 위치에서 유전자 변이가 추출하였으며, 총 5개의 데이터 분석 결과, EYA4 위치에서 공통적으로 6번 chromosome의 133789728, 133855247 두 부분에서 변이가 발견됨
□ 연구결과의 활용계획 현재 대장암의 경우 조기 발견을 위하여서는 대장내시경 검사가 가장 좋은 방법이나 침습적이고 고가의 검사이어서 선별 검사로서 적절치 못한 단점이 있기 때문에 대변잠혈검사의 경우 비침습적이고 경제적이나 민감도가 낮다는 단점이 있음. 현재 대변 DNA 검사가 시도되고 있으나 적절한 marker가 부족한 형편으로 본 연구를 통하여 대장암에서 promtoer hypermethylation을 보이는 유전자군을 검증하면 향후 대변 DNA 검사의 민감도와 특이도를 향상시킬 수 있을 것이며, 본 연구를 통하여 새로운 종양억제유전자로서 ADHFE1과 EYA4를 발굴한 바와 같이 새로운 종양억제유전자를 발굴함으로써 대장암의 발암 기전에 대한 이해를 증진시키고 새로운 치료 타겟을 발굴하는 기반을 제공할 수 있을 것임 (출처:요약문 4p)
Abstract▼
□ Purpose& contents ◎ Relevance identification of transition and anticancer drug resistance regulated by EYA4 gene activation (Demethylation): conducted research for screening the phosphorylation suppressed genes by EYA4, phosphatase. ◎ finding of a new methylation marker clarified promoter
□ Purpose& contents ◎ Relevance identification of transition and anticancer drug resistance regulated by EYA4 gene activation (Demethylation): conducted research for screening the phosphorylation suppressed genes by EYA4, phosphatase. ◎ finding of a new methylation marker clarified promoter hypermethylation of candidate genes from colorectal cancer tissues and surrounding normal tissues using methylation specific PCR. ◎ discovering tumor suppression of colorectal carcinoma by EYA4 gene. implemented colony formation assay, MTT assay, BrdU assay, migration assay, invasion assay, xenograft study using EYA4 gene transfected cell strain. ◎ Relation of EYA4 gene mutation and colorectal cancer progression: Relevance analysis of the development and progression of colorectal cancer based on the CRC patients' EYA4 gene mutation using TCGA, 1,000 genome database.
□ Result ◎ Relevance identification of transition and anticancer drug resistance regulated by EYA4 gene activation (Demethylation): To look for expression profile alteration, we checked the expression of the kinase (MAPK, PI3/AKT, RTK, JAK/STAT) which are closely related with colorectal cancer cell growth and transition when EYA4 gene has over expressed. ◎ discovering tumor suppression of pancreatic cancer by EYA4 gene: Colony formation is inhibited when EYA4 gene is over expressed after transfection with pancreatic cell line (MIA-PaCa2). ◎ Relation of EYA4 gene mutation and colorectal cancer progression: Only EYA4 position was extracted from each WGS, WES sample data and ann9otated with mutation information. 4 exon mutation were found from 105 WGS data and the results from 5 different genetic analysis all contain same EYA4 mutation position; chromosome 6 133789728, 133855247
□ Expected Contribution Colonoscopy is currently the best way for early detection of colorectal cancer but this is a high-priced invasive inspection. However, fecal occult blood testing is a non-invasive and low sensitivity as well as economically saved. DNA analysis from stool samples are currently in force but lack of proper markers. In this study, we demonstrate increase of sensitivity and uniqueness of stool DNA analysis after validating promotor hypermethylation gene cluster. Furthermore, we promote understanding for mechanism of colorectal cancer oncogenesis and afford developing new treatment target, thereby discovering new tumor suppressor genes such as ADHFE1 and EYA4. (출처:SUMMARY 5p)
목차 Contents
표지 ... 1목차 ... 2연구계획 요약문 ... 3연구결과 요약문 ... 3 한글요약문 ... 4 SUMMARY ... 5연구내용 및 결과 ... 6 1. 연구개발과제의 개요 ... 6 2. 국내외 기술개발 현황 ... 7 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 10 4. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 18 5. 연구결과의 활용계획 ... 19 6. 연구과정에서 수집한 해외 과학기술정보 ... 19 7. 참고문헌 ... 20 8. 연구성과 ... 21 9. 국가과학기술지식정보서비스에 등록한 연구시설‧장비 현황 ... 21 10. 연구개발과제 수행에 따른 연구실 등의 안전조치 이행실적 ... 21 11. 기타사항 ... 21끝페이지 ... 21
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