[보고서]인간 및 실험동물 전분화능 정원줄기세포의 분리 및 대량생산 체계 구축

이동율

인간 및 실험동물 전분화능 정원줄기세포의 분리 및 대량생산 체계 구축
Isolation of pluripotent spermatogonial stem cells and establishment of large-scaled production system in human and experimental animal 원문보기

보고서 정보
주관연구기관	차의과학대학교 CHA University
연구책임자	이동율
참여연구자	김계성 , 김진경
보고서유형	1단계보고서
발행국가	대한민국
언어	한국어
발행년월	2009-06
과제시작연도	2008
주관부처	교육과학기술부 Ministry of Education and Science Technology(MEST)
등록번호	TRKO201700012091
과제고유번호	1345075556
사업명	바이오기술개발사업
DB 구축일자	2017-11-13
키워드	정원줄기세포.전(다)분화능.체외배양.세포치료.마이크로RNA.세포증식.역-/분화.조절인자.Spermatogonial stem cells.Pluripotency.In vitro culture.Cell therapy.miRNA.Cell proliferation.De-/differentiation.Regular factor.
DOI	https://doi.org/10.23000/TRKO201700012091

초록 ▼

① 줄기세포를 이용한 세포치료제의 재료로는 크게 성체줄기세포와 배아줄기세포로 나뉘어 연구되고 있음. 하지만 성체줄기세포는 증식의 제한점 때문에, 또한 배아줄기세포는 분화의 조절과 면역적합성, 그리고 윤리성의 제한점을 가지고 있음.

② 본 연구에서는 장기간 배양을 통해 확립되며 배아줄기세포와 유사한 특성을 가지고 있으며, 면역적합성 줄기세포로 활용가능성이 가장 뛰어난 전분화능 줄기세포의 확립기술을 개발하고, 확립된 줄기세포의 전분화능을 확인하였음. 또한 생쥐 모델에서 확립된 기술을 이용하여 인간의 정원줄기세포의 장기간 배양기술을 확립하였고, 전분화능 정원줄기세포의 증식을 확인하였음.

③ 생쥐 전분화능 정원줄기세포주는 2004년, 인간 전(다)분화능 정원줄기세포주는 2008년에서야 최초로 확립에 성공하여 특성연구는 아직 많이 진행되어있지 않고 있음. 본 연구진의 공동연구자들은 정원줄기세포의 특정 유전자나 유전자의 기능을 조절하는 miRNA의 발현을 연구하고 기능을 분석하여 줄기세포의 증식, 분화 및 역분화에 관여하는 많은 정보를 확보하였음.

(출처 : 보고서 요약서 3p)

Abstract ▼

Ⅳ. Results of Research Program
① Find efficient methods for establishing of mouse pluripotent spermatogonial stem cells

② Establishment of methods for isolation and proliferation of human pluripotent spermatogonial stem cells

③ Production of transgenic mouse pluripotent spermatogonial stem cells

④ Targeting of spermatogonial stem cells-specific microRNAs

⑤ Cloning of novel genes of spermatogonial stem cells

(출처 : SUMMARY 5p)

목차 Contents

표지 ... 1제 출 문 ... 2보고서 요약서 ... 3요 약 문 ... 4SUMMARY ... 5CONTENTS ... 6목차 ... 7제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 8 제1절 연구개발의 목적 ... 8 1. 1단계 연구 개발의 최종 목표 ... 8 2. 1단계 연구개발의 목적 ... 8 제2절 연구개발의 필요성 ... 9 1. 연구개발의 과학기술적 중요성 ... 9 2. 연구개발의 경제·산업적 중요성 ... 10 3. 연구개발의 사회·문화적 중요성 ... 10 제3절 1단계 연구개발의 범위 ... 11제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 11 제1절 국내·외 기술개발현황 ... 11 1. 국외 기술개발현황 ... 11 2. 국내 기술개발 현황 ... 12 제2절 본 연구결과의 국내·외 기술개발현황에서 차지하는 위치 ... 13제 3 장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 14 1. 생쥐 전(다)분화능 정원줄기세포주의 확립과 특성 분석 ... 14 2. 인간 전(다)분화 정원줄기세포의 분리, 증식 기술 개발 ... 17 3. 생식세포 및 정원줄기세포 특이 유전자 및 miRNA의 발현양상 비교 ... 19제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 27 제1절 연구개발목표의 달성도 ... 27 제2절 관련분야 기술발전에 기여도 ... 29제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 33제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 34제 7 장 참고문헌 ... 35끝페이지 ... 36

표/그림 (11)

표 체외배양을 통해 ICR생쥐의 정원줄기세포로부터 분리되어 확립된 정원줄기세포주 (A,a)와 중간단계 정원줄기세포 (B-화살표 머리), 전(다)분화능 정원줄기세포주 (C,c). a-c: AP staining
표 단계특이 마아커를 이용한 FACS 분석
표 테라토마의 형성을 통한 전분화능의 확인
표 키메라 생쥐 생산을 통한 전분화 능 확인
표 (A) 폐쇄성과 비폐쇄성 무정자증 환자의 고환으로부터 분리된 정원줄기세포의 증식. (B) MTT assay를 이용한 정원줄기세포의 증식확인. (C) 장기간 배양 중 정원줄기세포의 증식
표 인간 전(다)분화능 정원줄기 세포로부터 테라토마의 형성
표 Differential mRNA expression of eight known genes in various cell lines by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). A: Senescent and immortalized cell lines. Senescent lung (WI-38), SV40-immortalized lung (WI-38 VA13), SV40-immortalized lung (WI-26 VA-4), SV40-immortalized brain (SVG p12). B: Pairs of normal and cancer cell lines. Lung N (WI-38), C (adenosquamous, NCI-H596); prostate N (RWPE-1), C (adenocarcinoma, DU-145); colon N (CCD-18Co), C (carcinoma, KM1214); stomach N (Hs 677.St), C (adenocarcinoma, AGS); skin N (CCD-986sk), C (melanoma, WM-266-4). C: Cancer cell lines. Cervix adenocarcinoma (HeLa), erythroleukemia (chronic myelogenous leukemia, K562), neuroblastoma (SK-N-SH), glioblastoma (A172). N and C indicate normal and cancer, respectively
표 Pie diagram showing functional classification of genes identified in subtracted clones. Randomly selected subtracted clones characterized by function using the NCBI database. (A) cDNA sequences obtained in the subtracted P-hSSC-like cells library. (B) Biological process information for known genes
표 Known genes differentially expressed in P-hSSC-like-cells and S-hSSC-like-cells. RT-PCR analysis showing the expression levels of known genes from subtracted clones in P-hSSC-like cell and S-hSSC-like cells. (A) In vitro senescence, eighteen known genes were down-regulated in hSSC-like cells. Lane 1: P-hSSC-like cells. Lane 2: S-hSSC-like cells. (B) The calibrated density of 18 down-regulated known genes normalized to that of 18S rRNA
표 nknown/novel genes differentially expressed in P-hSSC-like-cells and S-hSSC-like-cells. RT-PCR analysis showing the expression levels of two unknown genes from subtracted clones in P-hSSC-like cell and S-hSSC-like cells. (A) In vitro senescence, CHA-S55 and CHA-S212 corresponding to unknown genes were down-regulated in hSSC-like cells. Lane 1: P-hSSC-like cells. Lane 2: S-hSSC-like cells. (B) The calibrated density of CHA-S55 and CHA-S212 normalized to that of 18S rRNA
표 Known genes differentially expressed in P-hSSC-like-cells and S-hSSC-like-cells. RT-PCR

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