초록 ▼

※ 누에 hemolymph 단백질대량분석
○ 예로부터 질병치료에 사용된 누에를 우수한 생물소재로 인식, 유용한 새로운 단백질의 분리, 구조 및 기능 분석을 포함하는 단백체연구 필요. 의약용 신소재 개발을 위한 원천물질특허 확보 측면에서 아주 귀중한 자원
○ 누에의 단백체연구는 특히 hemolymph가 유용하나 제한적임 - 많은 알부민과 무기질 때문에 전기영동상에서 정확한 protein spot를 만들기 어려움
○ 1DE/LC-MSMS를 이용하여 silkworm hemolymph의 단백질 발현을 조사함. Gel상에서

※ 누에 hemolymph 단백질대량분석
○ 예로부터 질병치료에 사용된 누에를 우수한 생물소재로 인식, 유용한 새로운 단백질의 분리, 구조 및 기능 분석을 포함하는 단백체연구 필요. 의약용 신소재 개발을 위한 원천물질특허 확보 측면에서 아주 귀중한 자원
○ 누에의 단백체연구는 특히 hemolymph가 유용하나 제한적임 - 많은 알부민과 무기질 때문에 전기영동상에서 정확한 protein spot를 만들기 어려움
○ 1DE/LC-MSMS를 이용하여 silkworm hemolymph의 단백질 발현을 조사함. Gel상에서 각 단백질 lane(albumin제거 & intact sample)을 8등분(F1~F8)하여 in-gel trypsin digestion 방법으로 분해하고 각 tryptic digest들을 Nano-LC ESI MS로 분석.
○ 단백질 동정을 위하여 사용한 database는 NCBInr Bombyx mori를 이용. Mascot 검색시 동정 기준은 Methionine oxidation과 Cysteine carbamidomethylation을 fixed modification으로 사용.
◎ 최종 동정된 단백질은 peptide expect value 0.05이하(Probability P<0.05)이하의 triplicate LC_run 중 2회 이상 검색된 단백질만 선택. 총 3회 반복하여 833종의 단백질 동정

※ 누에 fat body tissue culture에 의한 항비만-당뇨후보물질 확인
○ 누에의 fat body는 척추동물의 liver와 기능적 상동기관으로 간주. 척추동물에서 보다 미분화상태의 역사를 가지고 있는 무척추동물(누에)에서 항비만-당뇨후보물질을 찾으면 더욱 원천적인 단백질후보물질이 될 것으로 보임
○ 누에 fat body tissue를 분리하여 glucose(정상/과대/결핍)의 dose가 다른 조건에서 배양. 얻은 fat body tissue에서 특이적인 유전자를 찾기 위하여 DsDD cDNA subtraction technology를 사용하여 당뇨치료 후보 유전자를 screening후 silkworm hemolymph에 존재하는 항비만-당뇨 관련되는 후보물질과 비교
○ 당뇨치료제 후보물질의 9개 full cDNA 확보
- GNPDA2, MOAT2, MAGT2, alkaline ceramidase, SCD, ceramide, IDH-1, IDPc, NUCN2,NGR-A11
◎ MOAT2의 특성 연구 : 352 amimo acid, 약 39.9 kDa, human homologue 48%, 1st instar larvae에서 강하게 발현, ER membrane 단백질

※ 2종류의 당뇨치료제 후보 peptide 분리
○ Bombyx mori sNPF (Bm-SNPF) : #1: SPSRRLRFG, #2: TPVRLRFG, #3: APSMRLRFG
○ Bombyx mori Nesfatin (BNesfatin) : #1(N16): PPVTPDKSEDSEIKDD, #2(M30): LEEYMEYHRYLKEVV QALESDPDFRERLEK, #3(C29): ADEEDVKSGKIAEQLDFVNHNVRTRLDEI
◎ BsNPF-R의 특성 연구
- 누에(Bombyx mori)에서 short neuropeptide F (sNPF) receptor를 encoding하고 있는 cDNA
- sNPF-R들과 아미노산 수준에서 사람(36%), 쥐(34%), 제브라피쉬(35%), 초파리(51%)와 상동성 보임
- 분자량이 42,731 Da, 원형질막을 관통하는 단백질
- 중장, 후견사선, 말피기관, 정소에서 강한 반면 지방체, 혈세포, 난소에서 약하게 발현
- 합성된 sNPF에 의해서도 BsNPF-R의 유전자발현이 조절
(출처: 연구결과 요약문 4p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 목차 ... 3
• Ⅰ. 연구결과 요약문 ... 4
• Ⅱ. 연구내용 및 결과 ... 5
• 1. 연구과제의 개요 ... 5
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 5
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 5
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 6
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 6
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 6
• Ⅲ. 연구성과 ... 7
• 끝페이지 ... 8