초록 ▼

2009년 신종 인플루엔자 유행 이후 인플루엔자의 대유행(pandemic)은 세계 보건계의 중요한 관심사 중의 하나이다. 신종 및 대유행 인플루엔자에 대응하기 위하여 신속한 백신의 개발 및 생산이 필요하며, 안전하고 효과적인 백신의 사용을 위해서는 생산 단계에서의 백신 원액에 대한 역가 분석이 가장 중요한 단계에 해당된다.

인플루엔자 백신의 역가 확인에 사용되는 가장 일반적인 방법은 일차면역확산법(Single radial immino-diffusion, SRID)이다. SRID 시험법은 인플루엔자 바이러스의 주성분인 헤

2009년 신종 인플루엔자 유행 이후 인플루엔자의 대유행(pandemic)은 세계 보건계의 중요한 관심사 중의 하나이다. 신종 및 대유행 인플루엔자에 대응하기 위하여 신속한 백신의 개발 및 생산이 필요하며, 안전하고 효과적인 백신의 사용을 위해서는 생산 단계에서의 백신 원액에 대한 역가 분석이 가장 중요한 단계에 해당된다.

인플루엔자 백신의 역가 확인에 사용되는 가장 일반적인 방법은 일차면역확산법(Single radial immino-diffusion, SRID)이다. SRID 시험법은 인플루엔자 바이러스의 주성분인 헤마글루티닌(Heamagglutinin, HA)을 정량적으로 측정하는 방법이다. 하지만 시간과 노동력이 많이 필요하다는 단점이 있으며, 신종 및 대유행 상황에서는 신속한 표준항원과 항체의 공급이 어렵기 때문에 WHO에서는 SRID 대체시험법 개발을 권고하고 있다. 이에 따라 ELISA, HPLC, qPCR 등 다양한 시험법이 개발되고 있으나 실용화 단계에 도달하지 못한 실정이다.

본 연구에서는 표준물질 및 항원 없이 신속하고 정확하게 인플루엔자 백신의 역가를 확인할 수 있도록 표면플라즈몬공명(Surface Plasmon Resonance, SPR)을 이용한 새로운 인플루엔자 백신의 역가시험법을 개발하고자 하였다. 먼저 인플루엔자 백신을 특이적으로 검출할 수 있는 리간드를 발굴하고, 발굴된 리간드를 SPR 칩에 고정화하는 방법을 개발하였다. 문헌 조사를 통해 인플루엔자 백신 항원 검출 가능성이 있는 리간드로 렉틴 7종과 대식 세포 수용체 2종을 발굴하였다. 발굴된 리간드를 Sensor chip SA와 Sensor chip NTA를 사용하여 고정화하고, AAL, EEL, MMR, CLEC10A(MGL) 등이 인플루엔자 백신 항원을 검출할 수 있다는 것을 확인하였다. 이들 4가지 리간드를 후보 리간드로 선별하였고, 인플루엔자 백신 역가시험법을 검증하기 위하여 ICH Q2 가이드라인에서 제시하는 파라미터와 허용기준을 참고하여 실험을 수행하였다.

최종적으로 sensor chip SA를 SPR 칩으로 선택하였고, AAL을 리간드로 선택하여 실험 조건을 확립하였으며 특이성(검출 대상을 특이적으로 검출하며 완충 용액의 간섭현상 없음), 직선성(R²≥0.99), 정확성(이론 대비 측정값 80~120%), 정밀성(변동계수 20% 이내)이 모두 ICH 가이드라인 상의 허용 기준을 만족하였다.

추가로, 다기관 공동 연구 수행을 통해 실험실간 밸리데이션을 진행하여 시험법을 확립하였다.

(출처 : 요약문 3p)

Abstract ▼

Since the outbreak of new type influenza in 2009, pandemic influenza has became one of the important interests of world health community. In order to respond to new type and pandemic influenza, it is necessary to rapid development and production of vaccine and potency analysis of undiluted vaccine s

Since the outbreak of new type influenza in 2009, pandemic influenza has became one of the important interests of world health community. In order to respond to new type and pandemic influenza, it is necessary to rapid development and production of vaccine and potency analysis of undiluted vaccine solution in production process is the most important step to using vaccine safely and effectively. The most commonly used potency assay for influenza vaccine is 'single radical immuno-diffusion(SRID)'. SRID is quantify Hemagglutinin(HA), which is the main component of influenza virus. But SRID requires many time and labor force and it is difficult to supply standard antigen and antibody in new type and pandemic situation. Therefore WHO recommanded to develop the replaceable potency assay. Various assay has been developed such as ELISA, HPLC, qPCR but there are not actually applied yet.

In this study, we developed a new potency assay for influenza vaccine based on Surface Plasmon Resonance(SPR), which can identify rapidly and accurate without standard materials. First, we found out influenza antigen specific ligands and developed methods to immobilize ligands on SPR chip surface.

We found 7 types of lectin and 2 types of macrophage receptor as ligands by paper research. We immobilized ligands on sensor chip SA or sensor chip NTA, and discovered AAL, EEL, MMR, MGL(CLEC10A) can be specially detect influenza vaccine antigen, so we chose that 4 types of ligand as candidate. We carried out experiments according to parameter and permissible range on ICH Q2 guideline for verify assay. We established experimental condition using AAL and sensor chip SA.

As a result, specificity, linearity, accuracy, precision were satisfied the permissible range on ICH guideline. In addition, we established potency assay based on SPR by collaborative research for validation.

(출처 : Summary 4p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 요 약 문 ... 3
• Summary ... 4
• 목차 ... 5
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
• 1. 연구개발과제의 목표 ... 6
• 2. 연구개발과제의 필요성 ... 6
• 제2장 총괄연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 10
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 13
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 53
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 55
• 1. 연구개발과제의 목표달성도 ... 55
• 2. 관련분야에의 기여도 ... 55
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 56
• 1. 활용성과 ... 56
• 2. 활용계획 ... 56
• 제7장 첨부서류 ... 57
• 제8장 참고문헌 ... 57
• 끝페이지 ... 59