초록 ▼

1. 노로바이러스 시험법 표준화 연구
노로바이러스는 비세균성 위장염을 유발하는 주요 원인체이며 공중보건학적 측면에 있어 주요한 관리 대상이다. 본 연구에서는 노로바이러스 식중독 발생 원인조사, 실태조사 등에 있어 임상, 비임상, 환경 시료에서 공동으로 사용이 가능한 노로바이러스 Conventional RT-PCR을 개발하고자 하였다. 국내에서 노로바이러스를 연구하는 기관의 노로바이러스 Conventional RT-PCR을 수집하였으며 검출 감도증진을 위해 Conventional RT-PCR에 사용되는 프라이머를 새롭게 설계하였

1. 노로바이러스 시험법 표준화 연구
노로바이러스는 비세균성 위장염을 유발하는 주요 원인체이며 공중보건학적 측면에 있어 주요한 관리 대상이다. 본 연구에서는 노로바이러스 식중독 발생 원인조사, 실태조사 등에 있어 임상, 비임상, 환경 시료에서 공동으로 사용이 가능한 노로바이러스 Conventional RT-PCR을 개발하고자 하였다. 국내에서 노로바이러스를 연구하는 기관의 노로바이러스 Conventional RT-PCR을 수집하였으며 검출 감도증진을 위해 Conventional RT-PCR에 사용되는 프라이머를 새롭게 설계하였다. 새롭게 제작된 프라이머는 T7F sequence tagging primer와 M13R tagging primer이며 기존에 사용하는 프라이머와 비교평가를 통해 검출감도를 확인하였다. 또한, 새롭게 개발된 노로바이러스 Conventional RT-PCR의 비특이적인 증폭반응을 확인하기 위한 특이성 검증을 위해 식중독 바이러스, 세균, 기생충 유전자 확보하여 특이성을 확인하였다. 결과적으로 현재 식중독원인조사에 사용되고 있는 시험법에 비해 검출감도가 향상된 시험법을 확보하였다. 본 연구를 통해 개발된 노로바이러스 Conventional RT-PCR 표준화 방법은 임상, 비임상, 환경 분야에서 노로바이러스가 매개한 식중독 원인조사에 활용될 것이다.

2. 식중독 바이러스 원인조사 검사법 개선
A형 간염바이러스, 로타바이러스, 아스트로바이러스, 장관아데노바이러스와 같은 식중독 바이러스는 식중독 발생 등 공중보건학적인 관리와 중요한 관계를 갖는다.
검출 민감도가 높은 Realtime PCR 방법은 현재 식중독바이러스를 검출에 널리 사용되고 있는 방법으로 바이러스를 신속하게 검출할 수 있는 방법으로 알려져 있다. 본 연구의 목적은 식중독바이러스 4종에 대한 Realtime PCR을 개선하는 것으로 Realtime PCR을 개선하기 위해 문헌에서 보고된 프라이머와 프르브를 수집하였고 검출감도를 향상시키기 위해 프라이머, 프르브, 증폭조건 등을 조정하였다. 최종적으로 선별된 조건은 단일 Realtime PCR 증폭을 통해 최적화 여부를 확인하였다. 유전자 검출한계 정량측적을 위해 standard RNA 이용하여 최적화된 Realtime PCR의 유전자 검출한계를 측정하였으며, 다른 병원체의 비특이적인 증폭여부를 확인하기 위해 세균, 원충의 유전자를 이용해 특이성을 검증하였다. 검출감도가 향상된 최적화 Realtime PCR의 검출한계는 5-50 copy까지 검출이 가능했으며 R² (Correlation coefficient) value는 98-99%로 나타났다. 또한 최적화된 4종 바이러스의 Realtime PCR 방법의 실제 시료 적용성 확인을 위해 인위적으로 지하수 포집필터에 바이러스를 오염시킨 후 Realtime PCR 증폭한 결과 성공적으로 바이러스 4종을 모두 검출할 수 있었다. 결과적으로 현재 사용하고 있는 4종 식중독바이러스 Realtime PCR 방법보다 검출감도가 더욱 향상된 시험법을 개발하였다. 검출감도가 향상된 최적화된 식중독바이러스 Realtime PCR 방법은 우리나라 식중독 원인조사를 위한 산물로 사용될 것이다.

(출처 : 국문요약문 4P)

Abstract ▼

1. Development of standardised methods for norovirus Conventional RT-PCR
The Noroviruses are major causes of acute nonbacterial gastroenteritis and major public health concern. The goal of this study was development of standard method of the NoV conventional RT-PCR from clinical, non-clinical and

1. Development of standardised methods for norovirus Conventional RT-PCR
The Noroviruses are major causes of acute nonbacterial gastroenteritis and major public health concern. The goal of this study was development of standard method of the NoV conventional RT-PCR from clinical, non-clinical and environment samples. NoV conventional RT-PCR methods of national organizations related to NoV studies were collected. To enhance for sensitivity level of NoV conventional RT-PCR methods, we modified primer sequence. The newly primer sets designed by T7F sequence tagging primer (Nov GI) and M13R tagging primer(Nov GII). Also, we have confirmed non-specific amplification of other foodborne viruses, bacteria and parasites for the validation of conventional RT-PCR. And to conclude, we developed more sensitivity to NoV detection than current conventional RT-PCR. This NoV conventional RT-PCR method used to investigation for food_borne outbreaks linked to NoVs from clinical, non-clinical and environment samples. The result of this project is expected to contribute for prevention and reduction of foodborne disease related to NoVs.

2. A study on the improvement of the Realtime-PCR assay for foodborne virus
The foodborne viruses caused by enteric viruses such as hepatitis A virus, rotavirus, astrovirus and enteric adenovirus has became one of the significant public health concern. Real-time PCR assays showing high sensitivity are being currently used for the detection of foodborne viruses. It has become very rapidly a standard tool in viruses discovery. The objective of in this study was improvement of the Realtime-PCR for foodborne viruses. To enhance for sensitivity level of the realtime-PCR methods, Probe and primer related to foodborne viruses Realtime-PCR were investigated and we modified probe Report dye and primer sequence. The selected primer and probe for sensitive detection of those viruses were optimized for single Realtime RT-PCR. We also quantified the detection limit of Realtime PCR developed by standard RNA. Also, We have confirmed non-specific amplification of other food_borne viruses, bacteria and parasites for the validation of Realtime PCR. The detection limit of Realtime PCR for foodborne viruses was confirmed up to 5 to 50 copy. And the values of Realtime-PCR R² (Correlation coefficient) analysed a 0.98 to 0.99 in the all Realtime-PCR methods. Also, the newly Realtime-PCR methods successfully detected in artificially contaminated filter samples. Finally, we developed more sensitivity and effective to detection viruses than current Realtime-PCR methods. Improvement of Realtime PCR of hepatitis A virus, rotavirus, astrovirus and enteric adenovirus be used to products in order to investigation of foodborne outbreaks.

(출처 : Summary 7P)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 국문 요약문 ... 4
• Summary ... 6
• 목차 ... 8
• 그림목차 ... 9
• 표목차 ... 11
• 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 14
• 제 1 절 연구개발과제의 목표 ... 14
• 제 2 절 연구개발과제의 필요성 ... 22
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 24
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 27
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 107
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 109
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 110
• 제1절 활용성과 ... 110
• 제2절 활용계획 ... 110
• 제7장 참고문헌 ... 111
• 끝페이지 ... 116