초록 ▼

발열성물질시험은 혈액제제의 국가출하승인을 위해 수행하고 있는 중요 시험항목으로, 동물을 이용하는 시험법이다. 그러나, 토끼를 이용한 기존의 시험법은 다수의 토끼가 소요되기 때문에 실험동물의 윤리문제가 문제점으로 지적되고 있으며, 이는 3R로 대표되는 동물시험의 최소화를 위한 국제적인 노력에 부합하지 않는다. 더욱이, 토끼발열성시험은 시험자의 숙련도와 실험동물의 상태에 민감하고 정량평가에 어려움이 있어 점차 축소 및 대체할 필요가 있다.

본 연구과제의 목적은 단핵구를 이용한 단핵구활성시험을 in vitro 대체시험법으로써

발열성물질시험은 혈액제제의 국가출하승인을 위해 수행하고 있는 중요 시험항목으로, 동물을 이용하는 시험법이다. 그러나, 토끼를 이용한 기존의 시험법은 다수의 토끼가 소요되기 때문에 실험동물의 윤리문제가 문제점으로 지적되고 있으며, 이는 3R로 대표되는 동물시험의 최소화를 위한 국제적인 노력에 부합하지 않는다. 더욱이, 토끼발열성시험은 시험자의 숙련도와 실험동물의 상태에 민감하고 정량평가에 어려움이 있어 점차 축소 및 대체할 필요가 있다.

본 연구과제의 목적은 단핵구를 이용한 단핵구활성시험을 in vitro 대체시험법으로써 개발하는 것이다. 이를 위해, 토끼단핵구와 사람단핵구를 이용하여 단핵구활성시험의 시험조건을 설정하였고, 엔도톡신과 비엔도톡신성 발열물질인 Lipoteichoic acid와 Zymosan에 대해 기존의 토끼발열시험과단핵구활성시험을 수행하였다.

그 결과, 토끼발열시험에서 엔도톡신, Lipoteichoic acid 및 Zymosan의 농도가 증가함에 따라 토끼의 체온상승의 합이 비례적으로 증가하였고, 단핵구활성시험에서 엔도톡신, Lipoteichoic acid 및 Zymosan의 농도가 증가함에 따라 발열에 직접적인 원인이 되는 사이토카인(IL-1beta, IL-6 및 TNF-alpha)의 분비량이 비례적으로 증가하였다. 즉, 토끼발열시험과 단핵구활성시험의 결과는 유사한 경향성을 보였다.

본 연구에서는 토끼단핵구를 시험의 재료로 사용함으로써 동물의 사용량을 획기적으로 감소할 수 있었다. 또한 본 연구의 결과는 혈액제제의 안전성을 위해 수행되고 있는 주요 시험항목인 발열성물질시험에 in vitro 발열시험법을 추가적으로 도입하기 위한 기초자료로 활용될 것이다.

(출처 : 국문 요약문 3p)

Abstract ▼

Currently, the rabbit pyrogen test(RPT) is practiced for national lot release of final blood products. While it costs many lives of rabbits, it dose not line with the international efforts for minimization of animal use in the life sciences, also represented as 3R. In addition, there has been a need

Currently, the rabbit pyrogen test(RPT) is practiced for national lot release of final blood products. While it costs many lives of rabbits, it dose not line with the international efforts for minimization of animal use in the life sciences, also represented as 3R. In addition, there has been a need of replacement due to its difficulty in quantification of pyrogen, and also to its sensitivity to condition of animals and technique of examinant.

The aim of this study is to develop an alternative in vitro pyrogen test for blood products using monocyte activation test(MAT). We established conditions and methods for monocyte activation test using rabbit PBMC and human PBMC. And we conducted both rabbit pyrogen test and monocyte activation test for endotoxin and two non-endotoxin pyrogens, Lipoteichoic acid(LTA) and Zymosan.

As a result, RPT and MAT showed a similar tendency. The rise in body temperature of rabbit increased in proportion to increase in concentration of these three pyrogens. And the release of pyrogenic cytokines also increased in proportion to increase in concentration of 3 pyrogens. We can significantly reduce use of animal in this alternative method by using rabbit PBMC.

The results of this study will be used as baseline data for introduction of in vitro pyrogen test which is mainly inspected for safety of blood products.

(출처 : Summary 4p)

목차 Contents

• 표지 ... 1자체연구개발과제 최종보고서 ... 2국문 요약문 ... 3Summary ... 4목차 ... 5제1장 연구개발과제의 개요 ... 6 제1절 연구개발과제의 목표 ... 7 제2절 연구개발과제의 필요성 ... 7제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 7 제1절 국내 연구 실적 ... 7 제2절 국외 연구 실적 ... 8제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 9 제1절 토끼발열성시험에 대한 발열물질의 확인 ... 9 제2절 토끼단핵구활성시험에 대한 발열물질의 확인 ... 13 제3절 사람단핵구활성시험에 대한 발열물질의 확인 ... 22제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 31제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 32제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 33 제1절 연구성과 및 활용계획 ... 33제7장 참고문헌 ... 34끝페이지 ... 36