초록 ▼

IV. 연구개발의 결과
PRRS와 PED는 국내 양돈 산업에 있어 지속적으로 피해를 입히고 있는 질병이나 아직 효능이 확실하고 안전성이 뛰어난 백신이 없어 질병 예방에 많은 어려움을 겪고 있다.
본 연구 과제를 통해 Fc 분자 발현 Vero cell과 Marcl45 cell을 제작하여 Fc 분자가 세포 표면에 발현되는 것을 확인할 수 있었으며 이러한 세포주에서 백신주가 증식되면 증식된 바이러스 표면에 Fc 분자가 harboring 되는 것을 확인할 수 있었다. PED-Fc 바이러스의 경우 일반 바이러스와 같은 증식성을 보

IV. 연구개발의 결과
PRRS와 PED는 국내 양돈 산업에 있어 지속적으로 피해를 입히고 있는 질병이나 아직 효능이 확실하고 안전성이 뛰어난 백신이 없어 질병 예방에 많은 어려움을 겪고 있다.
본 연구 과제를 통해 Fc 분자 발현 Vero cell과 Marcl45 cell을 제작하여 Fc 분자가 세포 표면에 발현되는 것을 확인할 수 있었으며 이러한 세포주에서 백신주가 증식되면 증식된 바이러스 표면에 Fc 분자가 harboring 되는 것을 확인할 수 있었다. PED-Fc 바이러스의 경우 일반 바이러스와 같은 증식성을 보여 주었으며 면역원성 시험 등에서 백신 균주로의 안전성을 확보했을 뿐만 아니라 뛰어난 효능이 있음을 실험실내 실험과 전임상 임상시험을 통해 입증할 수 있었다. 특히 야외 적용 시험을 통해 기존의 백신이 4회 이상의 많은 접종을 통해 얻을 수 있는 방어력을 단 2회 접종으로 얻을 수 있는 획기적인 결과를 보여주었다. PRRSV의 경우 국내 다양한 유전형을 고려하여 야외 분리주 중 백신주 선발을 위해 유전형 분석을 하였으며 이를 통해 국내 유행하는 PRRSV에 대한 유전적 정보를 얻을 수 있었다. 특히 국내에 많이 감염되어 있는 것으로 알려진 유럽형 PRRSV의 유전적 특징에 대한 정보를 얻을 수 있어 앞으로의 백신 개발에 유용한 정보가 될수 있으리라 생각된다.
특히 이번 연구는 Fc 분자 등 면역학적 기능이 있는 분자를 이용한 새로운 백신 adjuvant 시스템 개발에 관한 기초적인 정보와 가능성을 보여주었다.

(출처 : 요약문 15p)

Abstract ▼

Opsonization of foreign materials with IgG enhances their removal from the host by macrophages through antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity. Currently various Fc receptorsdiscovered on the diverse immune cells and they has own immunological roles. Fc part of the antigen binding IgG interact

Opsonization of foreign materials with IgG enhances their removal from the host by macrophages through antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity. Currently various Fc receptorsdiscovered on the diverse immune cells and they has own immunological roles. Fc part of the antigen binding IgG interacts with Fc receptor (FcRs) on the diverse immune cells influence immune reactions. For example, cytokine secretion, antigen re-presentation and phagocytosis are activated. This is due to an increased uptake of antigen-antibody complex into antigen preserving cells (APC) through the APC cell surface FcRs resulting in increased processing and presentation. Therefore if we make Fc molecules expressed on the viral surface it can be used for more efficacious vaccine antigen. Most enveloped virus use host cell membrane for making their own envelop. So if we make swine IgG Fc molecules expressed on the surface of the mammalian cell and then enveloped vims propagate on this transformed cell, virus has reverse oriented Fc molecules on the virus envelop. In this study, We make Fc molecules expressed Vero cell and Marc145 cell using swine IgG Fc gene expression vector and porcine epidemic disease virus (PEDV) and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) are grown in genetically modified Vero cells and PED virus and PRRS virus may acquire Fc on the viral envelop. We test the immunological enhancement of the Fc molecules acquired PED vims as an inactivated antigen. Swine IgG Fc molecule expression vector (pBudCE4.1 GFP-Fc) was constructed using Fc and transferrin receptor gene amplified from swine spleen. Vero cells were transformed with Fc expression vector and transformed cells were selected in the Zeocine containing media. PED virus propagated on the transformed Vero cells. Fc molecules on the Vero cell and PED virus were tested by ELISA, Western blot analysis and immunofluorescent analysis. Immunological enhancement test of the Fc harboring PED virus (PED-Fc) was performed using the titration of the serum antibody of the mouse immunized with PED-Fc virus. Immune cell proliferation, cytokine secretion, Serum neutralization antibody titer were measured in the serum of the pig immunized with PED-Fc virus. Immunofluorescent analysis showed that transformed Vero cells successfully express swine IgG Fc molecules on the cell membrane. PED virus harboring Fc molecules on the virus envelop was identified by ELISA assay. Vero cells transiently transformed by the plasmid vector and PED-Fc virus, the expression of approximately 50 kDa molecules containing Fc was detected by Western blotting assay in reduced condition. The size of detected band was same to the expected molecular weight of the chimera Fc monomer. PED-Fc virus showed more strong immune stimulations in the mouse immunization test. IgG antibody titer increase 2 times, virus neutralization titer increase 16 times compare with normal PED virus. At the T cell proliferation assay also show PED-Fc vims increase 3 times compare with normal PED vims. Immunization with PED-Fc vims showed higher IgG2a/lgGl ratio comparing with normal PED virus. The result indicates that PED-Fc induces Th1 biased immune responses. In the swine model, when the animals are immunized with PED-Fc virus(10⁶ TCID₅₀/ml), serum neutralization antibody titer was 64 through 128. This SN titer 4 times higher than that of the same does normal PED immunization pigs. In this study, we found that PED-Fc virus elect more strong immune responses compare with normal PED virus. PED-Fc virus immunized mouse and pig show more strong humoral as well as cellular immune responses. The PED- Fc has a possibility as an inactivated vaccine, which have comparable effect to live attenuate vaccines to prevent PED disease. In addition, the newly established vaccines strategy might be able to apply for other viruses, which contain host cell derived envelope, using Vero cells or other host cells expressing Fc molecules

(출처 : SUMMARY 17p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 17
• CONTENTS ... 19
• 목차 ... 20
• 제1장 연구개발 과제의 개요 ... 21
• 1. 경제 사회적 측면 ... 21
• 2. 기술적 측면 ... 22
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 32
• 1. Fc 관련 연구 현황 ... 32
• 2. PED 백신 개발 현황 ... 32
• 3. PRRS 백신 개발현황 ... 34
• 4. 연구배경에 따른 연구의 범위 ... 36
• 가. PED 백신 개발 ... 36
• 나. PRRSV 백신 개발 연구 범위 ... 37
• 제3장 연구 개발 수행 내용 및 결과 ... 38
• 1절 PED-Fc 백신의 개발 ... 38
• 1. 백신 균주의 제작 ... 38
• 2. FED-Fc 전임상 시험 결과 ... 57
• 3. PED-Fc 백신 전임상 시험 고찰 ... 79
• 4. PED-Fc 백신의 야외 임상 시험 ... 81
• 5. PED-Fc 백신의 야외 임상시험 고찰 ... 97
• 6. PED-Fc 백신의 비교 임상 시험 ... 98
• 2절 PRRS-Fc 백신의 개발 ... 102
• 1. PRRSV 백신 후보주의 선정 ... 102
• 2. PRRSV 야외 분리주 병원성 시험 ... 112
• 3. Fc 표면발현 백신주 제작 ... 118
• 4. 단백질 발현 기술을 이용한 백신 개발 ... 124
• 3절 Fc 분자발현 양돈용 백신의 경제성 분석 ... 132
• 1. 국내외 PED 바이러스의 분포 동향 및 PED 백신 시장 규모 변화 파악 ... 132
• 2. Fc 분자 발현 PED 백신의 경제성 분석 ... 139
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 142
• 제5장 연구개발의 성과 및 성과활용 계획 ... 145
• 1. 연구 성과 ... 145
• 2. 연구 성과 활용 계획 ... 145
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 146
• 1. 해외 PED발생 현황 ... 146
• 2. PRRSV 불활화 백신 연구 ... 146
• 제7장 참고문헌 ... 147
• 끝페이지 ... 148