초록 ▼

제1장 연구수행내용
1. 연구 목표
가. 국립줄기세포재생센터 GMP 시설‧장비 적격 운영
□ GMP 성능적격성평가 실시계획 및 결과보고
○ 적격성평가 실시대상에 대한 적격성평가 종합계획서에 따라 설정된 기준에 맞게 설계, 설치되고, 예측된 운전 범위 내에서 의도한 대로 가동되는지 그 결과를 검증 및 문서화하고, 설정된 품질에 맞게 제품을 제조할 수 있는지 성능적격성을 평가하여 최종 적격성평가 종합보고서를 문서화함

- 제조지원설비 성능적격성평가 계획 및 결과 보고
- 생산장비 성능적격성평가 계획

제1장 연구수행내용
1. 연구 목표
가. 국립줄기세포재생센터 GMP 시설‧장비 적격 운영
□ GMP 성능적격성평가 실시계획 및 결과보고
○ 적격성평가 실시대상에 대한 적격성평가 종합계획서에 따라 설정된 기준에 맞게 설계, 설치되고, 예측된 운전 범위 내에서 의도한 대로 가동되는지 그 결과를 검증 및 문서화하고, 설정된 품질에 맞게 제품을 제조할 수 있는지 성능적격성을 평가하여 최종 적격성평가 종합보고서를 문서화함

- 제조지원설비 성능적격성평가 계획 및 결과 보고
- 생산장비 성능적격성평가 계획 및 결과 보고
- 시험 및 분석장비 성능적격성평가 계획 및 결과 보고
- 컴퓨터시스템 밸리데이션 계획 및 결과 보고

□ 밸리데이션 실시계획 및 결과보고
○ 시험방법 벨리데이션 실시 계획 및 결과 보고
○ 과산화수소 훈증 밸리데이션 실시 계획 및 결과 보고
○ 무균갱의절차 밸리데이션 실시 계획 및 결과 보고
○ 소독수 성능 밸리데이션 실시 계획 및 결과 보고

□ 시험방법 수립
○ 시험방법 SOP 문서화 및 시약 등의 규격 결정
○ 원자재입고 및 입고시험
○ 세포주 제조방법 표준화 및 문서화
○ 세포주 보관방법 표준화 및 문서화
○ 승인된 세포주 제조방법으로 세포주 제조
○ 세포주 보관방법 검증 및 유효기간 설정을 위한 안정성시험 방법 표준화 및 안정성시험 실시
○ 세포주 분양을 위한 세포주 운송방법 표준화 및 밸리데이션 실시

□ 품질시험과 관련된 세포주 품질시험방법 및 시험방법 밸리데이션 표준작업절차서 및 양식 개발
○ 자재 품질시험방법 표준화 및 시험방법 검증
○ 원료 품질시험방법 표준화 및 시험방법 검증

□ 제조지원설비, 생산장비 및 시험 및 분석장비, 컴퓨터시스템에 대한 적격성평가 이후 제조공정, 세척, 무균공정, 청소, 소독 및 무균절차 및 시험방법 밸리데이션 종합계획서를 수립함. 이에 따라 해당 실시대상에 대한 밸리데이션을 실시하고 종합보고서를 작성, 검토 및 승인

나. 임상용 전분화능줄기세포 배양 및 품질관리 기술 개발
□ 임상용 전분화능줄기세포 수립 및 배양조건 개선
○ Xeno-free 조건에서 바이러스가 아닌 episomal vector를 이용한 역분화줄기세포주 수립 조건 확립 및 개선

○ Xeno-free 조건에서 일차배양세포 배양조건 확립
○ Xeno-free 조건에서 전분화능줄기세포 동결 후 생존율 개선

□ 전분화능줄기세포 품질관리 기술 개발
○ 전분화능 특이적 유전자발현 마커 등 배양조건에 따라 특이적으로 발현하는 유전자를 이용한 배양조건 확인 절차서 개발

- 2015-2016년 관련 과제 수행 결과, 지지세포에서 배양한 줄기세포와 비교하여 xeno-free 조건에서 배양한 줄기세포에서 특이적으로 발현하는 유전자들을 확인함

○ 전분화능줄기세포의 염색체 안정성 및 분화능을 효율적으로 분석하고 정량화 할 수 있는 지표 개발

- 2015-2016년 관련 과제 수행 결과, 줄기세포 배양조건에 따라 염색체의 copy number가 다르게 변화되는 것을 확인하였음. 전분화능줄기세포주의 수립 및 배양과정에서 염색체 변이를 신속히 검사하고 정상적인 세포주를 선별하기 위하여 일반적으로 전분화능줄기세포의 배양에 따라 자주 변화가 일어나는 것으로 알려진 염색체 위치에 대해 ddPCR 또는 quantigene plex 등의 방법을 이용하여 분석 시간을 단축하면서 정량적인 분석이 가능한 방법의 개발

- 전분화능줄기세포의 전분화능을 측정하기 위해 일반적으로 사용되는 테라토마 형성 방법은 분화능을 정량화하기 어려운 측면이 있기 때문에 줄기세포의 전분화능 및 줄기세포주별 분화경향성을 품질관리 측면에서 정량적으로 측정할 수 있는 방법을 개발하고자 함. 이를 위해 전분화능줄기세포로부터 배아체(embryoid body) 등의 방법으로 분화시키고 이에 대한 전분화능 및 3배엽 분화 마커에 대해 시간적으로 빠르고 정량적인 분석 방법을 개발하여 분화능을 효율적으로 측정할 수 있는 방법을 개발

○ 전분화능줄기세포가 특이적으로 발현하는 마커들 중 형광유세포분석기(FACS)를 이용하여 정량 가능한 세포막 외부로 발현하는 SSEA-3, TRA-1-60 등을 이용한 분석방법 확립

(출처 : 본문 : 제1장 연구수행내용 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연차실적서 ... 2
• 제1장 연구수행내용 ... 3
• 1. 연구 목표 ... 3
• 2. 연구범위 및 수행방법 ... 5
• 3. 연구 수행내용 및 결과 ... 7
• 제2장 연구개발 목표의 달성도 ... 22
• 제3장 연구개발결과 평가 시 착안점 ... 22
• 제4장 문제점 및 개선 방향 ... 22
• 제5장 주요 연구 변경사항 ... 23
• 제6장 주요 연구 성과 ... 24
• 제9장 참고문헌 ... 25
• 제10장 첨부문서 ... 25
• 끝페이지 ... 25