초록 ▼

연구목표
· 진보된 세포기반 시스템을 확립하여 국가적 위기대응에 필요한 신속한 메르스 바이러스 항체 치료제 개발이 가능함을 제시하고자 함. 본 연구에서는 AviTag 등의 tagging 기술을 이용해 메르스 바이러스 spike 단백질 trimer 제작 기술을 확립할 것임.

· 궁극적으로는 최적화된 spike 단백질 구조 및 세포 기반기술 확보를 통해서 바이러스 단백질 trimer 항원성을 분석하고 MERS-CoV 중화능을 보이는 항체를 선별하는데 활용되어, 국가적 필요에 맞는 항체치료제 개발기술과 결과물이 과학기술

연구목표
· 진보된 세포기반 시스템을 확립하여 국가적 위기대응에 필요한 신속한 메르스 바이러스 항체 치료제 개발이 가능함을 제시하고자 함. 본 연구에서는 AviTag 등의 tagging 기술을 이용해 메르스 바이러스 spike 단백질 trimer 제작 기술을 확립할 것임.

· 궁극적으로는 최적화된 spike 단백질 구조 및 세포 기반기술 확보를 통해서 바이러스 단백질 trimer 항원성을 분석하고 MERS-CoV 중화능을 보이는 항체를 선별하는데 활용되어, 국가적 필요에 맞는 항체치료제 개발기술과 결과물이 과학기술 발전에 공헌하고자 함.

연구내용
가. MERS-CoV Spike 단백질 구조 분석 및 디자인
· MERS-CoV spike 단백질 구조분석 기반으로 trimer 형태의 최적 단백질 예측 및 디자인
· 벡터 클로닝: Tag 활용 (AviTag, HisTag 등)

나. Spike 단백질 발현 및 제작
· 동물/insect 세포를 이용한 spike 단백질 발현 및 정제
· Trimer 형태 spike 단백질 정제
· Trimer 구조 분석 및 검증
· Biotin-Streptavidin-형광물질 기반 단백질 생산

연구성과
· AviTag과 결합된 MERS-CoV Spike 단백질 벡터 (plasmid 또는 E. coli stock)
· 바이러스 spike trimer 1 mg, 형광부착 단백질 trimer 100 μg
· 연구 프로토콜, 결과 보고서, 국내학술발표 1건

(출처 : 최종보고서 요약문 4p)

Abstract ▼

Purpose
· In order to develop therapeutic antibodies at a time of national crisis with MERS virus infection, we would like to establish cell-based systems for rapid production of viral protein antigens. In this study, we plan to use tagging technologies such as AviTag to express and purify the re

Purpose
· In order to develop therapeutic antibodies at a time of national crisis with MERS virus infection, we would like to establish cell-based systems for rapid production of viral protein antigens. In this study, we plan to use tagging technologies such as AviTag to express and purify the recombinant MERS virus spike protein, and characterize a stable spike trimer that will be optimized for its stability.

· The antigenicity of optimized spike protein trimers will be examined ultimately via the antigen design and expression based on structure and cell techniques. The viral spike protein will be characterized to be used for selection of neutralizing antibodies for national demands and the products and technologies will contribute to the development of national science and technology.

Contents
A. MERS virus spike gene design and cloning
· Structure-based MERS virus spike protein design
· Vector cloning with tags (AviTag, HisTag etc)

B. Virus spike protein expression and purification
· Animal/insect cell-based spike protein expression
· Spike protein purification
· Trimer structure analysis and validation
· Biotin-Streptavidin-based protein production

Development Results
· MERS-CoV Spike protein vector with AviTag (plasmid or E. coli stock)
· Virus spike protein trimer 100 μg
· Experiment protocol, final report and presentation at a conference

(출처 : Summary 5p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 학술연구개발용역과제 최종결과보고서 ... 2
• 목차 ... 3
• 연구결과점검보고서 요약문 ... 4
• Summary ... 5
• 학술연구개발용역과제 연구결과 ... 6
• 제1장 최종 목표 ... 6
• 제2장 국내외 기술 현황 ... 14
• 제3장 최종 연구 내용 및 방법 ... 17
• 제4장 최종 연구 결과 ... 26
• 제5장 연구결과 고찰 및 결론 ... 42
• 제6장 연구성과 및 활용계획 ... 45
• 제7장 연구용역과제 진행과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 48
• 제8장 기타 중요변경사항 ... 54
• 제10장 참고문헌 ... 55
• 제11장 첨부서류 ... 56
• 끝페이지 ... 57