초록 ▼

1. 구제역바이러스 NSP(비구조단백질) 항원 제조 및 정량평가
- 진천주 유래 바이러스를 이용 불활화 NSP 항원 및 재조합 단백질(3ABC, 3AB)항원을 제조 후 최종 NSP 항원 농축액 정량평가한 결과 각각 102ng/ml, 47 μg/ml, 155 μg/ml 수준이었음.

2. 정량 NSP항원에 대한 실험동물(기니픽)의 NSP 항체 형성능 평가
- 불활화바이러스 항원 접종군에서는 NSP항원의 접종 농도(25ng/ml)가 낮아 45 DPV(Day post vaccination)까지 NSP 항체는 검출되지

1. 구제역바이러스 NSP(비구조단백질) 항원 제조 및 정량평가
- 진천주 유래 바이러스를 이용 불활화 NSP 항원 및 재조합 단백질(3ABC, 3AB)항원을 제조 후 최종 NSP 항원 농축액 정량평가한 결과 각각 102ng/ml, 47 μg/ml, 155 μg/ml 수준이었음.

2. 정량 NSP항원에 대한 실험동물(기니픽)의 NSP 항체 형성능 평가
- 불활화바이러스 항원 접종군에서는 NSP항원의 접종 농도(25ng/ml)가 낮아 45 DPV(Day post vaccination)까지 NSP 항체는 검출되지 않음
- 재조합단백질 항원의 경우, 120 ng/dose 이상 접종군에서 21 DPV부터 항체 검출이 나타났으며, 28 DPV에 120 ng/ml, 250ng/ml 접종군에서 각각 27%, 93%의 항체 양성률이 확인됨

3. 비육돈에서의 NSP 항체지속기간 평가
1) 비육돈에서의 재조합단백질항원(NSP) 접종에 따른 NSP 항체 지속기간 평가
- 비육돈(8주령, 4두, 구제역백신 미접종)에 재조합NSP 항원(3AB, 250ng)을 2주 간격으로 2차 접종 후 2종의 NSP ELISA 검사키트(3AB, 3ABC)를 이용해 항체 형성능 및 지속기간을 비교 평가한 결과 약3주(A사,3AB) ~ 4주(B사, 3ABC) 경과 후 모든 개체가 NSP 항체 양성돼지로 전환되었고, 양성 판정 후 약 25주(30주령)까지 지속적으로 NSP 항체 양성개체임이 확인됨

2) SPF 돼지에서의 야외바이러스(김제주) 공격접종에 따른 NSP항체 지속기간 평가
- SPF 돼지에 단가백신(O-3039+O-Manisa)접종군(19두)과 미접종군(6두)을 NSP ELISA(B사, 3ABC)를 이용하여 35일까지 비교한 결과 백신접종 후 21일 경과군 33%(2/6두), 14일경과군 0%(0/7두), 7일 경과군 33%(2/6두), 미접종군에서는 100%(5/5두, 11 DPC)의 NSP 항체 양성돼지 확인
- 중화항체(김제주)양성률은 백신접종 후 공격접종일 기준 21일 경과군 100%(6/6두), 14일경과군 85.7%(6/7두), 7일 경과군 0%(0/6두)으로 분석되었고, 35일까지 평균로그 2.0(100배)이상 높은 수준으로 유지됨
- 백신접종여부와 상관없이 NSP항체 양성판정개체는 28일 이후에도 지속적으로 NSP 항체 양성개체로 확인됨

3) SPF 돼지에서의 야외바이러스(보은주) 공격접종에 따른 NSP항체 지속기간 평가
- SPF 돼지에 O형단가백신 (O-Campos)을 접종군(15두)과 미접종군(6두)을 NSP ELISA를 이용하여 14일까지 비교한 결과 백신접종 후 35일 경과군 1두(5두), 21일경과군 0두(7두), 7일 경과군 2두(6두), 미접종군에서는 6두(6두)의 NSP 항체 양성돼지 확인
- 백신 미접종군에서는 8일째부터 NSP 양성개체가 검출되었고, 항체가가 지속적으로 상승함
- SP 항체 양성률은 백신접종후 35일경과군 100%(6/6두), 21일경과군 100(7/7두), 7일 경과군 0%(0/6두)로 조사됨(공격접종일 기준)
- 백신미접종군에서는 4일째부터 항체가가 상승하기 시작하여 5일째부터 양성개체가 검출되기 시작하였음.
- 본 실험은 현재 진행중이며 NSP항체 지속기간 평가를 위해 6개월까지 지속적으로 수행할 예정임

4. 번식돈 및 생산자돈에서의 NSP 항체지속기간 평가
[재조합단백질항원(NSP) 접종 번식돈 및 생산자돈 야외시험]
1) 모돈에서의 재조합단백질항원(NSP) 접종에 따른 NSP 항체 지속기간 평가
- 구제역 백신접종 이력이 있는 모돈(3~4차산, 4두)에 재조합NSP 항원(3AB, 250ng) 및 구제역 상용백신(O-manisa+O-3039)을 분만예정 4주전 기준 2주 간격으로 2차 접종 후 NSP ELISA 검사키트(2종) 및 SP-O ELISA를 이용해 항체가를 평가한 결과 NSP 항원접종 2주(M사,3AB) ~ 4주(P사, 3ABC) 경과 후 모든 개체가 NSP 항체 양성돼지로 전환되었고, 24주까지 추적 평가한 결과 NSP 양성개체는 지속적으로 양성개체 (B키트 1두 제외)임이 확인
- ELISA 키트를 이용한 SP항체 검사 결과 모든 개체에서 24주까지 항체가가 높은 수준(PI=80이상) 으로 유지됨
- 모체이행항체 평가를 위해 초유와 모돈의 SP 및 NSP 항체가를 비교한 결과 항체가가 거의 유사한 수준으로 조사됨

2) NSP 양성 모돈(재조합NSP 항원접종) 유래 자돈의 모체이행항체 지속기간 평가
- NSP 양성 모돈(재조합항원, 4두) 및 대조군(1두)에서 생산된 자돈(27두)의 SP 및 NSP항체 검사 결과 분만 2주후 100% 항체 양성율을 나타내어 초유를 통해 항체가 이행됨을 확인함
- 모체이행항체 지속기간 평가 결과 NSP항체의 경우 6~12주, SP항체는 8주 이상으로 조사되어 8주령에 예방접종을 실시할 경우 모체이행항체의 영향을 받을 가능성이 있을 것으로 추정

3) 자돈의 모체이행항체에 따른 최적 예방백신접종시기 조사
- (O-Manisa+3039 백신) ELISA 검사결과 출하시기인 26주령 기준 백신항체양성율은 각각 37%(백신 8주령 1회군), 66%(10주령 1회군), 88%(2회 접종(8주령, 12주령))로 나타났으며, 1회 접종만 할 경우 10주령접종이 8주령접종에 비해 모체이행항체의 영향을 받지 않는것으로 조사됨.
- 중화항체가(O-manisa)는 1회(10주령) 접종군이 2회(8주령, 12주령) 접종군보다 동일하거나 높은 수준으로 나타남

[NSP항체 검출 농장에서의 번식돈 및 생산자돈 농장시험]
1) NSP 양성농장 모돈에서의 NSP 항체 지속기간 평가
- NSP항체 검출 농가의 NSP 항체양성개체(모돈, B사키트 기준, 11두/97두)에 대해 양성판정일을 기준으로 NSP 항체 지속기간을 추적 평가한 결과 키트별로 각각 100%(B사, 11두/11두), 50%(A사, 6두/11두)의 항체양성율을 나타내 현장시료에 대해서는 키트간의 민감도 차이가 있음을 확인함
- 키트 종류와 상관없이 NSP항체 양성 판정 개체(1두 제외)는 24주까지 지속적으로 NSP 항체 양성개체로 조사됨

2) NSP 양성 모돈(NSP 양성농장) 유래 자돈에서의 NSP 항체 지속기간 평가
- NSP 검출농장의 NSP 항체양성 모돈(11두) 중 일부개체(9두)에서 생산된 자돈(46두) 대상 SP 및 NSP항체 검사 결과 분만 2주후에 100% 항체 양성율을 나타냄
- NSP항체 검사 결과 개체에 따라 4주경부터 모체이행항체가 소실되어 22%가 음성으로 전환되었고, 10주에는 모든 개체에서 음성으로 확인됨.
- SP항체 검사결과 모든 개체에서 10주까지 모체이행항체가 높은 수준(PI=90이상)으로 관찰됨

3) (O-Campos백신)접종 농가에서의 자체백신예방프로그램에 따른 백신항체가 조사
- 2회 접종(8주, 15주령)을 수행하고 있는 축산농가 대상 사육구간(4주령~21주령, 6구간)별로 SP 항체양성률을 검사한 결과 모든 구간에서 100%의 항체양성율을 보여 모체이행항체의 영향에 따른 취약구간이 없는 것으로 확인되었음.

4. 모체이행항체 평가를 위해 모돈, 초유 및 자돈의 NSP 항체가의 상관관계를 분석한 결과 유래 항원에 상관없이 NSP 항체 양성개체에 대해서는 높은 상관관계(≥0.898)가 나타났으나, NSP 음성 개체에 대해서는 상대적으로 낮은 상관관계(≤0.783)를 보임

(출처 : 연구결과 요약 2p)

Abstract ▼

In order to perform the effective management of infected animals which were detected NSP-sero positive during sero-surveillance of FMD, it is extremely important to predict the duration of antibodies of nonstructural proteins against FMDV. Therefore serological surveillance to investigate persistenc

In order to perform the effective management of infected animals which were detected NSP-sero positive during sero-surveillance of FMD, it is extremely important to predict the duration of antibodies of nonstructural proteins against FMDV. Therefore serological surveillance to investigate persistence of antibodies against FMDV NSP was conducted. Serial studies were performed using sera collected from pigs experimentally immunized with vaccine containing recombinant 3AB in the field and challenged by FMD virus in Animal Biosecurity Level 3. All growing pigs and sows immunized with experimental vaccine containing recombinant 3AB induced antibodies against FMDV NSP at 21 DPV and were continually detected for 6 months. Also, it was confirmed that the maternally derived antibodies against NSP and SP of FMDV, transferred through the colostrum, were detected and lasted up to 8~10 weeks in all piglets. A high correlation coefficient (r = 0.98) was found between the test results from sow sera and those from their offspring. NSP antibody levels were compared between non-vaccinated group and vaccinated group (O-3039 + manisa) in SPF pigs which were challenged with FMD virus (O/SKR/Gimje 2014). NSP antibodies were detectable within 10 DPI (5 DPI) in non-vaccinated group and after 10 DPI in vaccinated group. Positive reactions in NSP test were 100% (5/5 pigs) in non-vaccinated group and 21% (4/19 pigs) at 10 DPI in vaccinated group. Therefore this data demonstrated the kinetics of antibody against NSP antigen of FMDV in experimentally immunized pigs. Nevertheless, we need to investigate the persistence of NSP antibodies in challenged pigs up to 6 months before firm conclusions can be drawn.

(출처 : 영문초록 36p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 농림축산검역검사기술개발 연구과제 최종결과보고서 Final Report (FR) ... 2
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 5
• 1. 연구배경 ... 5
• 2. 연구최종목표 ... 6
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 7
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 7
• 1. 재 료 ... 7
• 2. 연구전략 및 방법 ... 7
• Ⅲ. 연구결과 ... 9
• 1. 구제역 비구조단백질 (NSP) 농축 접종액 제조 및 평가 ... 9
• 2. 정량 NSP 항원을 이용한 실험동물(기니픽)의 NSP 항체 형성능 평가 ... 11
• 3. 비육돈에서의 NSP 항체지속기간 평가 ... 12
• 4. 번식돈 및 생산자돈에서의 NSP 항체지속기간 평가 ... 19
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 28
• Ⅴ. 고 찰 ... 31
• Ⅵ. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 34
• Ⅶ. 주요연구과제 변경사항 ... 34
• Ⅷ. 참고자료 ... 34
• IX. 영문초록 ... 36
• 끝페이지 ... 36