초록 ▼

시구아테라독(시구아톡신, ciguatoxin)은 gambierdiscus 조류를 먹은 어류 섭취 시 신경학적, 소화기계 장애를 일으키는 시구아테라 식중독의 원인 독소성분이다. 최근 해외에서 검출정보가 지속적으로 보고되고 있고, FTA 확대에 따라 시구아톡신 함유 가능성이 있는 수산물의 수입량 및 소비량이 증가하면서 수산물 섭취로 인한 시구아톡신의 노출확률이 증가할 것으로 예상된다. 미국, 유럽 등 제외국에서는 시구아톡신 관련 시험법 연구와 모니터링이 활발히 진행 중이나, 국내에서는 연구 실적이 미비한 실정이다. 이에 따라 국내 수입

시구아테라독(시구아톡신, ciguatoxin)은 gambierdiscus 조류를 먹은 어류 섭취 시 신경학적, 소화기계 장애를 일으키는 시구아테라 식중독의 원인 독소성분이다. 최근 해외에서 검출정보가 지속적으로 보고되고 있고, FTA 확대에 따라 시구아톡신 함유 가능성이 있는 수산물의 수입량 및 소비량이 증가하면서 수산물 섭취로 인한 시구아톡신의 노출확률이 증가할 것으로 예상된다. 미국, 유럽 등 제외국에서는 시구아톡신 관련 시험법 연구와 모니터링이 활발히 진행 중이나, 국내에서는 연구 실적이 미비한 실정이다. 이에 따라 국내 수입 및 유통 어류 중 시구아톡신에 대한 안전관리 기반을 마련하고자 본 연구사업은 액체크로마토 그래피-질량분석기/질량분석기(LC-MS/MS)법을 사용한 시구아톡신 4종 동시분석법을 검토 및 확립하고 어류 중 시구아톡신 오염도 조사를 하였다.

분석대상물질인 시구아톡신 4종 중 P-CTX-3C는 상용화된 표준품을 시험법 확립에 사용하였고, P-CTX-1, P-CTX-2는 Mass Library Search와 논문자료를 통해 확보한 MS MRM조건으로 분석 조건을 예측하였다. 확보한 표준품으로 예측조건 확인결과, 실제 크로마토그램과 스펙트럼 이온값이 100% 일치함을 확인하여. 본 방법을 근거로 표준품 미확보한 C-CTX-1 또한 예측조건과 일치할 것으로 판단되어 모니터링에 활용하였다.

시험법 최적화 과정을 통해, 헥산을 함유한 75% 메탄올로 시료 추출, C₁₈ SPE 카트리지로 정제, C₁₈ 컬럼(2.1 x 50 mm, 2 μm) 사용하여 LC-MS/MS로 분석하는 동시분석법을 확립한 본 시험법은 기존 제외국 시구아톡신 분석법 대비, 실험소요시간이 단축되었고, 시험 절차는 간소화 및 효율화 되었다.

유효성 검증은 식품의약품안전평가원의 「식품 등 시험법 마련 표준절차에 관한 가이드라인」등에 따라 수행하였다. 장어, 다랑어, 대구를 대표 매트릭스로 하여 유효성 검증을 수행한 결과, 특이성은 간섭물질로부터 구분이 되는 것으로 확인, 직선성은 R²>0.99 이상으로 나타났다. 회수율은 전체적으로는 77.08~95.48%로 나타났고, P-CTX-3C의 경우 회수율 80.24~92.71%, 상대표준편차 2.97~15.92%로 나타났으며, P-CTX-2의 경우 회수율 77.08~95.48%, 상대표준편차 2.10~15.57%로 나타났다. 일간 정밀도 실험결과, 상대표준편차가 P-CTX-3C는 2.97~14.86%, P-CTX-2는 2.98~15.57%로 나타났다. 시료 중 P-CTX-3C,P-CTX-2의 검출한계와 정량한계는 각각 3.3 및 10 μg/kg이었다. 검증 요소 모두 기준을 충족하여 결과적으로 본 연구에서 개발한 시험법이 어류 중 시구아톡신 4종을 동시분석하는데 적합함을 확인하였다.

개발된 동시분석법으로 13품목 총 161건의 국내 유통 어류를 수거하여 시구아톡신 4종을 분석한 결과, 모든 검체에서 검출한계 미만으로 불검출되어 현재까지는 국내 유통 어류 중 시구아톡신은 안전한 수준인 것으로 판단되나, 제외국의 지속적 모니터링, 세계적 시구아테라 중독 지속적 발생, 사회적·환경적 변화로 인한 시구아톡신 유입 가능성을 고려하여 향후 지속적 모니터링 등 추가연구가 필요할 것으로 판단된다.

(출처 : 국문 요약문 2p)

Abstract ▼

Ciguatera(ciguatoxin) is a toxin component of the genus ciguatera fish poisoning causing neurological and digestive system disorders when consuming fish fed gambierdiscus algae.
Recently, detection information is continuously reported overseas, and as FTAs expand,imports and consumption of aquati

Ciguatera(ciguatoxin) is a toxin component of the genus ciguatera fish poisoning causing neurological and digestive system disorders when consuming fish fed gambierdiscus algae.
Recently, detection information is continuously reported overseas, and as FTAs expand,imports and consumption of aquatic products, which are likely to contain ciguatoxin, are increasing, and the probability of exposure to sea food is expected to increase due to consumption of aquatic products. Research and monitoring of ciguatoxin-related test methods are actively underway in countries other than the US and Europe. Therefore, in order to establish safety management base for ciguatoxin among domestic, imported and distributed fishes, this project is a simultaneous analysis of four species of ciguatoxin using liquid chromatography-mass spectrometry / mass spectrometry (LC-MS / MS). And investigated the ciguatoxin contamination in fish.

P-CTX-1 and P-CTX-2 were used for mass spectrometric analysis and mass spectrometry obtained from the papers. Analysis conditions were predicted by MRM conditions. As a result of confirming the prediction condition with the obtained standard product, it is confirmed that the actual chromatogram and spectrum ion value are 100%, and it is judged that C-CTX-1, Respectively.

The test method was optimized by extracting the sample with 75% methanol containing hexane, purifying it with C₁₈ cartridge, and establishing simultaneous analysis method by LC-MS / MS using C₁₈ column. The time required for the experiment was shortened compared to the toxin assay and the procedure was simplified and efficient.

The validation was carried out in accordance with the Food and Drug Safety Evaluation Institute (Guideline for Standard Procedures for Establishing Test Methods for Foods, etc.). As a result of validation with eel, bluefin tuna, and cod, we confirmed that the specificity was distinguished from interfering substances. The recovery rate of P-CTX-3C was 80.24~92.71% and the relative standard deviation was 2.97∼15.92%. In the case of P-CTX-2, the recovery rate was 77.08~95.48% The deviation was 2.10~15.57%. The relative standard deviations of P-CTX-3C and P-CTX-2 were 2.97~14.86% and 2.98~ 15.57%, respectively. The detection limits and quantification limits of P-CTX-3C and P-CTX-2 were 3.3 and 10 μg/kg, respectively. As a result, it was confirmed that the test method developed in this study is suitable for the simultaneous analysis of four species of ciguatoxin in fish.

As a result of analyzing four species of ciguatoxin collected from a total of 161 domestic imported fishes, 13 samples were not detected at the detection limit below all the detection methods. As a result, however, further research is needed, including ongoing monitoring of foreign countries, ongoing global epidemic poisoning, and possible future influx of ciguatoxin due to social and environmental changes.

(출처 : SUMMARY 4p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 국문 요약문 ... 2
• Summary ... 4
• 목차 ... 6
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 8
• 제1절 연구개발과제의 목표 ... 8
• 제2절 연구개발과제의 필요성 ... 9
• 1. 연구의 배경 ... 9
• 2. 연구의 필요성 ... 12
• 제3절 시구아테라독 개요 ... 19
• 1. 시구아테라독(시구아톡신)의 종류와 독성 ... 19
• 2. 시구아테라독 원인생물의 생태 ... 25
• 3. 어류에서의 발생 및 축적 ... 27
• 4. 외국의 시구아테라독 발생 사례 ... 30
• 5. 국내·외 기준규격 설정 현황 ... 34
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 35
• 제1절 국내·외 시구아테라독 관리 동향 ... 35
• 1. 국가별 관리현황 ... 35
• 제2절 국내·외 시구아톡신 연구현황 ... 39
• 1. 시구아테라독 분석법 및 모니터링 연구현황 ... 39
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 49
• 제1절 연구수행 내용 ... 49
• 1. 대표 품목 선정 ... 49
• 2. 어류 중 시구아테라독 시험법 ... 50
• 3. 어류 중 시구아테라독 시험법 검증 방법 ... 58
• 4. 유통 어류 중 시구아테라독 실태조사 ... 60
• 제2절 연구수행 결과 ... 63
• 1. 어류 중 시구아테라독 시험법 확립 ... 63
• 2. 어류 중 시구아톡신 시험법 검증 ... 79
• 3. 유통 수산물 중 시구아테라독 실태조사 ... 91
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 100
• 제1절 LC-MS/MS를 이용한 시구아테라독 시험법 확립 및 검증 ... 100
• 제2절 유통 어류 중 시구아테라독 실태조사 ... 101
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 102
• 제1절 목표 달성도 ... 102
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 및 활용계획 ... 103
• 제1절 활용성과 ... 103
• 제2절 활용계획 ... 103
• 제7장 참고문헌 ... 105
• 제8장 첨부서류 ... 115
• 끝페이지 ... 148