초록 ▼

본 과제는 국내 개발 유세포 분석을 이용한 피부감작성 시험법의 OECD 가이드라인 개발을 위해 OECD TG 442B 개정(안)을 제안한 후, 채택을 위해 전문가 의견에 따라 후속연구를 진행하였다. 유세포 분석을 이용한 피부감작성 시험법을 의료제품에 적용하여 의료기기 안전성평가를 위한 피부감작성 시험법을 탐색하였다.

국내 개발 유세포 분석을 이용한 국소림프절시험법의 채택을 위해 전문가 그룹의 요청에 따라 OECD 후속연구로서 20종을 추가 선정하여 수행하였다. 피부 감작성 평가는 감작성 지수(SI)가 2.7 이상(SI≥

본 과제는 국내 개발 유세포 분석을 이용한 피부감작성 시험법의 OECD 가이드라인 개발을 위해 OECD TG 442B 개정(안)을 제안한 후, 채택을 위해 전문가 의견에 따라 후속연구를 진행하였다. 유세포 분석을 이용한 피부감작성 시험법을 의료제품에 적용하여 의료기기 안전성평가를 위한 피부감작성 시험법을 탐색하였다.

국내 개발 유세포 분석을 이용한 국소림프절시험법의 채택을 위해 전문가 그룹의 요청에 따라 OECD 후속연구로서 20종을 추가 선정하여 수행하였다. 피부 감작성 평가는 감작성 지수(SI)가 2.7 이상(SI≥2.7)인 경우, 감작물질로 판정하였고, 자극지수가 2.7 미만(SI<2.7)인 경우, 비감작 물질로 판정하였다. 20종을 선정하여 피부 감작성 평가를 수행한 결과, 100%의 민감도, 100%의 특이도, 100%의 정확도를 나타내었다. OECD TG429 참고물질 22종의 시험결과와 20종의 시험결과를 더한 결과, 민감도가 87.5%에서 94%로, 특이도가 100%에서 100%로, 정확도 90.9%에서 95%로 더 높은 정확도가 나타났다.

피부 감작성 평가를 위한 보조지표를 탐색하고자 OECD TG429 참고물질 18종에 대한 유세포 분석을 이용하여 사이토카인 13종을 분석한 결과 moderate (IE, MBT, CT, HCA) 및 weak (EUG, PB, CA, IU, MMA) 참고물질은 용매 대조군에 비해 pre-inflammatory 면역반응에 관여하는 사이토카인인 IFN-γ 및 IL-2이 유의적인 변화를 나타냈다. 따라서 피부 감작성 평가에서 borderline에 걸친 물질에 대한 보조지표로서 IFN-γ 및 IL-2 활용가능성을 확인하였다.

동물대체 시험법의 의료기기 확대가 요구됨에 따라 의료기기 등 안전성평가를 위한 피부감작성 시험법을 탐색하기 위하여 유세포 분석을 이용한 피부감작성 시험법을 의료제품에 적용해보았다. 대상물질을 선정하기 위해 2017년도 의료기기 생산 및 수출입실적 통계자료를 확인한 결과 치과재료가 사용빈도가 높은 제품으로 나타났고, 치과재료용품 중 다빈도 생산품목 10종을 선정하여 적용해보았다. 유세포 분석을 이용하여 10종에 대한 의료기기의 피부감작성 평가 결과 모두 음성으로 나타났다.

2개 이상의 피부감작성 시험법 조합의 예측력 평가하기 위하여 Keratinosens^TM, h-CLAT, LLNA:BrdU-FCM 시험법을 조합하여 예측력을 평가해본 결과, 민감도 100%, 특이도 80%, 정확도 94.1%로 나타났다. 시험법을 조합했을 때 더 높은 예측력을 나타내는 것을 알 수 있었다.

본 연구 결과를 통해 국내 개발 유세포 분석을 이용한 국소림프절 시험법 장점에 대한 과학적 근거 자료를 확보함으로서 OECD 전문평가의 검토의견에 따라 우리나라 최초로 OECD 독성시험 가이드라인으로 채택되었다. 또한, 국내 개발 유세포 분석을 이용한 국소림프절시험법을 의료기기에 적용하여 피부감 작성 동물대체시험법을 탐색 가능성이 있었다.

(출처 : 요약문 2p)

Abstract ▼

This study aims to suggest the revision of OECD Test Guideline for skin sensitization using flow cytometry developed in Korea, and conduct the follow-up study for adoption taking expert review. We explored skin sensitization test methods for the evaluation of medical device safety. To achieve the ad

This study aims to suggest the revision of OECD Test Guideline for skin sensitization using flow cytometry developed in Korea, and conduct the follow-up study for adoption taking expert review. We explored skin sensitization test methods for the evaluation of medical device safety. To achieve the adoption of the LLNA:5-bromo-2-deoxyuridine-flow cytometry method(LLNA:BrdU-FCM), we selected additional 20 test substances for our follow-up study as requested by expert group. A test substance is categorized as a sensitizer when the SI is ≥ 2.7, whereas it is categorized as a non-sensitizer when the SI is < 2.7. We found out that the results for the 20 test substances were 100% sensitivity, 100% specificity and 100% accuracy.
The 22 reference chemicals suggested in OECD TG 429 and the 20 test substance taken together, the results were changed from 87.5% sensitivity to 94% sensitivity, from 100% specificity to 100% specificity and from 90.9% accuracy to 95% accuracy.

We also analyzed 13 cytokines using flow cytometry for the 18 reference chemicals with a view to identifying a secondary indicator for the assessment of skin sensitization potential. As a result, significant changes in IFN-γ and IL-2, which are involved in pre-inflammatory immune responses, occurred for moderate sensitizers (IE, MBT, CT and HCA) and weak sensitizers (EUG, PB, CA, IU and MMA), compared with vehicle controls.
Therefore, we confirmed that IFN-γ and IL-2 could be used as a secondary indicator for borderline chemicals in evaluating skin sensitization potential.

As the demand of medical device for alternative test methods has increased, we applied skin sensitization test methods to medical devices in order to explore skin sensitization test method for the safety of medical device.
We checked the statistical data including production, export and import of medical device in 2017 to select test material, and applied the 10 most produced items to medical device among dental materials. We evaluated these 10 most produced items using flow cytometry analysis, and all the results were negative.

We evaluated predictive capacity of the combination of Keratinosens^TM,h-CLAT,andLLNA:BrdU-FCM, and found the combination had a 100% sensitivity, 80% specificity and 94.1% accuracy. This combination showed the higher predictive capacity than single test method.

This study provides the scientific basis of advantages of LLNA:BrdU-FCM using flow cytometry analysis developed in Korea. This test method was adopted as OECD toxicological test guideline at the first time in Korea. In this study, we applied LLNA:BrdU-FCM using flow cytometry analysis developed in Korea in medical device. So this study demonstrates that alternative test methods on skin sensitization can be used for medical device by applying LLNA:BrdU-FCM using flow cytometry analysis developed in Korea.

(출처 : Summary 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 국문 요약문 ... 2
• Summary ... 3
• 목차 ... 4
• 연구개발과제 연구결과 ... 5
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 5
• 제2장 연구개발과제의 국내･외 연구개발 현황 ... 9
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 13
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 180
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 182
• 제6장 연구개발과제 연구개발 결과 활용계획 ... 184
• 제7장 참고문헌 ... 186
• 제8장 첨부서류 ... 199
• 끝페이지 ... 203